경골 미세 환경 내부에 골육종 세포를 이식하는 것은 폐 전이를 촉진합니다. 이 모형은 또한 그대로 면역 계통을 요구하는 폐 전이 또는 새로운 암 치료의 기계장치를 공부하기 위하여 유용할 수 있습니다. 일단 종양이 설치되면, 절단은 장기 생존 연구에서 전이의 비율을 통제하기 위하여 필요합니다.
우리는 정맥 약물 전달의 시각화를 허용하기 위해 경정맥 주사를 사용합니다. 경정맥 주사는 정확한 약물 전달이 필요한 다른 많은 질병 모델에 유용합니다. 우리는 생체 내 이미징을 위해 나노 입자와 방사성 라벨 리간을 제공하기 위해이 방법을 사용했습니다.
우리는 혈액 손실없이 사지 절단의 역학을 마스터하는 실험을 시도하기 전에 5에서 10 안락사 쥐에서 사지를 제거하는 연습을 새로운 사용자를 조언한다. 음경 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, supine 위치에 낮은 열 설정 열 패드에 노세네에 마취 된 쥐를 확보. 복부와 등쪽 하복부까지 오른쪽 다리의 머리카락을 제거합니다.
거즈 나 스프레이를 사용하여 70 %의 에탄올과 적절한 희석 된 살균제로 수술 영역을 소독하고 동물의 눈에 연고를 바르습니다. 드릴과 같은 동작을 사용하여 10mm 라고 표시된 22 게이지 바늘을 티비알 고원 한가운데에 있는 경골 의 다이아피시스에 삽입하여 다이아피시스로 바늘을 확장합니다. 바늘을 제거한 후, 상질세포 현탁액을 얻기 위해 관심 있는 종양 세포 현탁액을 부드럽게 혼합하고, PBS의 20 마이크로리터에서 세포의 4분의 4에 7.5 x 10을 로드하여 해밀턴 주사기로 한다.
바늘 끝에서 10 밀리미터 의 세포로 해밀턴 주사기를 표시하고 22 게이지 바늘에 의해 만들어진 구멍에 10 밀리미터 마크에 바늘을 삽입합니다. 그런 다음 전체 양의 세포를 골수 구멍으로 부드럽게 배출하고 쥐를 가열 패드에 케이지에 넣고 전체 재복이 있을 때까지 모니터링합니다. 정맥 내 독소 루비신 투여의 경우 마취 확인 후 신중한 해부를 사용하여 오른쪽 또는 왼쪽 경정맥을 시각화하고 바늘을 과측 근육 조직에 삽입하십시오.
바늘을 경정맥 루멘으로 향하게 하고, 경정맥 전방에서 펙토랄리스 근육에 시각화되고, 정확한 삽입을 확인하기 위해 바늘 끝에 소량의 혈액을 끌어들입니다. 바늘이 제자리에있을 때, 천천히 1 분 동안 킬로그램 독소루비신 당 2 밀리그램의 100 ~ 150 마이크로 리터를 주입하십시오. 솔루션은 납품 중에 정맥 내에서 표시되어야 합니다.
모든 용액이 전달되면 멸균 거즈를 사용하여 정맥에 부드러운 압력을 가하고 3~4개의 상처 클립을 사용하여 절개를 닫습니다. 퇴적을 확인한 후 오른쪽 다리의 머리카락을 복부와 등쪽 하복부까지 제거하고 가열 패드에 쥐를 척추 위치에 놓습니다. 종아리 의 중간에서 오른쪽 아래 복부의 엉덩이 관절 바로 위에 피부를 문질러 동물의 눈에 연고를 적용합니다.
멸균 장갑과 악기를 사용하여, 멸균 수술 커튼의 통풍구를 통해 다리를 당기고, 단지 질식에 근위균 을 할례 적인 분리 절개를합니다. 뒷다리를 장갑을 끼고 뒷사지의 복부 내측 표면에 대퇴 동맥과 정맥을 노출시키고 4-0 흡수 가능한 봉합사를 사용하여 중간 대퇴골 및 트랜스펙트 의 수준에서 혈관을 소송합니다. 정맥을 해부 하는 동안 누출을 줄이기 위해 해동 하 고 측면 외부 회전으로 엉덩이 관절을 납치 하는 무딘 해부를 사용 하 여.
대퇴골의 머리를 염분에서 찾아 분해하고 남은 조직을 제거하여 다리에 부착된 다리를 유지합니다. 로피바카인 킬로그램당 약 6밀리그램의 아세타불룸및 시스틱 신경에 스플래시 블록을 투여하고, 간단한 중단된 4-0 흡수성 봉합사를 사용하여 아세타부를 통해 근육을 닫습니다. 그런 다음 5~10밀리미터 에 배치된 상처 클립을 사용하여 피부의 가장자리를 닫습니다.
종양 감시를 위한 엑스레이 화상 진찰은 뼈 종양 침략의 확인을 허용하고 최근에 절단한 또는 포르말린 고정 사지에 수행될 수 있습니다. 엑스레이 화상 진찰은 또한 전이의 유무에 관계없이 폐의 방사선 학적 형태에 대한 평가를 허용하고, 불필요한 자발적인 죽음을 방지하기 위해 안락사에 대한 필요성을 결정하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다. 쥐 골육종에서, 골분해성 및 골성 세포 종양 형태는 절단된 사지의 조직병리학에 의해 확인될 수 있다.
피질 뼈는 이 예에서 결석하고 인접한 뼈가 피질의 기존 샤프트에 수직으로 지향되는 새로운 직조 뼈로 대체되거나 강화되었다는 점에 유의하십시오. 미숙한 골골의 섬은 또한 종양 내에서 확인할 수 있습니다. 이들 심상에서는, 대표적인 폐 전이의 현미경 형태, 광물화된 뼈 및 종양 혈관 색전증을 가진 몇몇은 관찰될 수 있다.
1 차적인 골육종 종양의 면역 염색은 CD68 양성 대식세포 또는 CD3 양성 T 세포와 같은 면역 세포 집단에 의한 종양의 침투를 드러낼 수 있습니다. 종양 세포 단백질 용해의 서양 얼룩은 단백질 키나아제, 단백질 키나아제 수용체 및 이러한 경로와 상호 작용하는 다른 단백질의 발현을 결정하는 데 사용될 수 있다. 티비알 이식의 경우, 첫 번째 티비알 구멍이 만들어지면, 해밀턴 바늘 삽입을 쉽게 하기 위해 피부와 뼈 구멍이 줄지어 있는 것과 같은 각도로 비 지배적인 손에 다리를 계속 고정합니다.
경정맥 주사의 경우 바늘을 근육에 삽입하지만 바늘을 너무 많이 각도로 각도로 각도를 두지 마십시오. 절단을 위해, 먼저 안락사 쥐에 대한 반자 연습을.
