미세중력에서 치과 및 호흡기 세포와 장기의 전파

배양에서 아멜로게닌 분비 아멜로모세포를 길쭉하고 양극화했습니다. 이것은 또한 미세 중력에서 ameloblast 세포를 성장시키기위한 최초의 프로토콜입니다. 문화에서 ameloblasts의 성장은 법랑질 분야의 주요 과제 중 하나였습니다.

그리고 우리에게는 이 바이오리액터 모델을 사용하고 있으며, 에나멜 연구에서 이 특징을 달성한 것은 이번이 처음입니다. 이 모델은 ameloblast 세포의 생물학을 이해하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 Dr.Mirali Pandya에 의해 시연 될 것입니다.

출생 후 6 일 마우스에서 수집 한 조직을 해부 현미경과 해부 된 자궁 경부 루프 아래에 놓는 것으로 시작하십시오. 멸균 밸브를 주사기 포트에 부착하여 생물 반응기를 설정합니다. 코팅된 스캐폴드와 함께 두 세포, 경추 루프 및 치수를 바이오리액터에 추가하고 성장 인자와 세포외 기질 단백질이 보충된 10밀리리터의 각질세포 SFM 배지로 바이오리액터 용기를 채웁니다.

생물 반응기 용기의 충전 포트 캡을 닫고 조인 다음 멸균 밸브를 엽니 다. 배지 교체를 위해 멸균 3 밀리리터 주사기 2 개를 사용하십시오. 이렇게 하려면 한 주사기에 새 배지를 채우고 다른 주사기는 비워 둡니다.

두 주사기 밸브를 모두 열고 빈 주사기 포트를 향해 기포를 부드럽게 움직입니다. 전체 주사기의 새 배지가 용기에 조심스럽게 주입되면 빈 주사기 포트를 통해 모든 기포를 제거합니다. 캡으로 주사기 포트를 닫습니다.

각 용기를 회전 장치 베이스에 부착합니다. 전원을 켜고 속도를 분당 10.1회전으로 설정합니다. 비계가 매달려 있고 용기 벽에 닿지 않도록 속도를 조정하십시오.

24시간마다 배지를 교체하려면 혈관을 똑바로 세워 세포가 바닥에 고정되도록 합니다. 주사기 포트를 열어 멸균 주사기를 포트에 연결합니다. 영양이 고갈된 배지의 75%를 흡인하고 이전에 설명한 대로 다른 포트를 통해 새 배지를 주입합니다.

그래핀 스캐폴드와 콜라겐 스캐폴드의 매크로그래프가 여기에 표시됩니다. 그래 핀 스캐 폴드는 표면 엠보싱의 평행 한 배열을 갖는 반면, 콜라겐 스캐 폴드는 다공성 구조를 나타 냈다. 골격화된 마우스 하악골을 해부하고 하부 마우스 앞니의 말단 대부분을 노출시켰다.

절제 된 자궁 경부 루프의 정확한 위치는 출생 후 6 일 마우스 앞니에서 구분되는 반면, 성인 골격 마우스 하악골의 유사한 영역이 참조로 제공됩니다. hemimandibles는 3 개의 하악 어금니와 지속적으로 성장하는 앞니로 구성되었으며, 자궁 경부 루프 세포 틈새에는 법랑질 형성에 필요한 다양한 세포 집단이 포함되어있었습니다. 맞춤형 미세 환경에서 자궁 경부 루프 세포의 성공적인 분화는 한쪽 끝에 핵이 있고 다른 쪽 끝에 긴 세포 과정이있는 편광 된 세포의 전형적인 특성을 가진 ameloblasts의 형성을 가져 왔습니다.

성장 인자와 스캐폴드 코팅 없이 배지에서만 세포를 배양한 결과 주요 법랑질 단백질을 분비하지만 늘어나거나 분극되지 않는 자궁 경부 루프 세포가 생성되었습니다. 갈라닌-코팅된 스캐폴드 그룹은 코팅되지 않은 스캐폴드를 함유하는 대조군에 비해 상당히 더 높은 증식률을 입증하였다. E15 마우스로부터 수확된 폐 조직 세그먼트를 바이오리액터의 3D 미세중력 환경에서 10일 동안 성공적으로 배양하였다.

배양 배지에 인터루킨-6을 첨가하면 생체 내에서 보이는 것과 유사한 폐포 형태의 염증 관련 변화가 발생했습니다. 소개에서 법랑질 팀이 ameloblast 세포 배양 모델을 제시하는 것이 얼마나 어려웠는지 말씀 드렸습니다. 이제 우리는 스폰지 콜라겐 스캐폴드와 ameloblast 세포를 구별하기위한 매트릭스의 사용이라는 두 가지 측면에 초점을 맞춘 매우 혁신적인 절차를 사용하여이 문제를 해결했습니다.

이 두 가지 혁신은 함께 3D 배양에서 ameloblast-like 세포의 분극화와 성장을 가져 왔습니다. 이 3D 배양 세포는 ameloblast 생물학을 이해하는 훌륭한 모델입니다. 그리고 이 생물학을 이해하기 위해 우리는 전자 현미경, 단백질체학 및 유전체학을 포함한 다양한 기술을 사용할 수 있습니다.

아멜로 모세포는 환상적인 세포입니다. 예, 그들은 프리즘 치아 법랑질을 분비하는 능력이 있습니다. 이제이 생물 반응기 모델은 ameloblasts가 매트릭스를 분비하고 아파타이트 미네랄을 분비하여 프리즘 치아 법랑질을 성장시키는 방법을 이해할 수있는 위치에 있습니다.