Kültürde amelogenin salgılayan ameloblastı uzamış ve polarize etmiştir. Bu aynı zamanda mikro yerçekiminde ameloblast hücrelerinin büyümesi için ilk protokoldür. Kültürdeki ameloblastların büyümesi, emaye alanındaki en büyük zorluklardan biri olmuştur.
Ve bizim için, bu biyoreaktör modelini kullanıyor, emaye araştırmalarında bu ayırt edici özelliği ilk kez başardık. Bu model, ameloblast hücrelerinin biyolojisini anlamak için kullanılabilir. Bu model Dr.Mirali Pandya tarafından gösterilecektir.
Toplanan dokuyu altı günlük doğum sonrası farelerden diseksiyon mikroskobu ve disseke servikal döngüler altına yerleştirerek başlayın. Steril vanaları şırınga portlarına takarak bir biyoreaktör kurun. Her iki hücreyi, servikal döngüyü ve diş pulpasını biyoreaktöre kaplanmış iskele ile birlikte ekleyin ve biyoreaktör kabını, büyüme faktörleri ve hücre dışı matriks proteinleri ile desteklenmiş 10 mililitre keratinosit SFM ortamı ile doldurun.
Biyoreaktör kabının dolum portu kapağını kapatın ve sıkın, ardından steril valfleri açın. Medya değişimi için iki steril üç mililitrelik şırınga kullanın. Bunu yapmak için, bir şırıngayı taze ortamla doldurun ve diğer şırıngayı boş bırakın.
Her iki şırınga valfini de açın ve kabarcıkları boş şırınga portuna doğru yavaşça manevra yapın. Tam şırıngadan taze ortam dikkatlice kaba enjekte edildikten sonra, tüm kabarcıkları boş şırınga portundan çıkarın. Şırınga portlarını kapaklarla kapatın.
Her bir kabı rotatör tabanına takın. Gücü açın ve hızı dakikada 10,1 dönüşe ayarlayın. İskelelerin askıda olduğundan ve gemi duvarına dokunmadığından emin olmak için hızı ayarlayın.
Her 24 saatte bir ortam değişimi için, hücrelerin dibe oturmasını sağlamak için damarları dik yerleştirin. Steril şırıngaları bağlantı noktalarına bağlamak için şırınga bağlantı noktalarını açın. Beslenme tükenmiş ortamın %75'ini aspire edin ve taze ortamı daha önce gösterildiği gibi diğer porttan enjekte edin.
Grafen iskelesi ve kollajen iskelesinin makrografları burada gösterilmiştir. Grafen iskelesi paralel bir yüzey kabartma dizisine sahipken, kollajen iskelesi gözenekli yapıyı sergiledi. İskeletize edilmiş bir fare mandibulası diseke edildi ve alt fare kesici dişinin distal en büyük kısmı açığa çıkarıldı.
Rezeke edilmiş servikal döngünün kesin konumu, altı günlük doğum sonrası fare kesici dişinde sınırlandırılırken, yetişkin bir iskeletleştirilmiş fare mandibulasındaki benzer bir bölge referans olarak verilmiştir. Hehemimandibles üç mandibuler azı dişinden ve sürekli büyüyen bir kesici dişten oluşurken, servikal döngü hücre nişi mine oluşumu için gerekli olan çeşitli hücre popülasyonunu içeriyordu. Servikal döngü hücrelerinin özel bir mikro ortamda başarılı bir şekilde farklılaşması, bir ucunda çekirdek ve diğer ucunda uzun hücresel süreçler bulunan polarize hücrelerin tipik bir özelliğine sahip ameloblastların oluşumuna neden olmuştur.
Büyüme faktörleri ve iskele kaplaması olmadan tek başına ortamdaki hücrelerin kültürü, anahtar emaye proteinlerini salgılayan, ancak uzamayan veya polarize olmayan servikal döngü hücreleri ile sonuçlandı. Galanin kaplı iskele grubu, kaplanmamış iskeleler içeren kontrol grubuna kıyasla önemli ölçüde daha yüksek bir proliferasyon oranı göstermiştir. E15 farelerinden toplanan akciğer dokusu segmentleri, biyoreaktördeki 3D mikro yerçekimi ortamında 10 gün boyunca başarıyla kültürlendi.
Kültür ortamına interlökin-6'nın eklenmesi, alveoler morfolojide in vivo görülenlere benzer inflamasyonla ilişkili değişikliklere neden oldu. Giriş bölümünde, emaye ekibinin bir ameloblast hücre kültürü modeli bulmanın ne kadar zor olduğunu anlattım. Şimdi bu zorluğu, iki yöne odaklanan son derece yenilikçi bir prosedür kullanarak ele aldık: sünger kollajen iskelesi ve ayrıca ameloblast hücrelerini ayırt etmek için matrisin kullanılması.
Birlikte, bu iki yenilik, 3D kültürde ameloblast benzeri hücrelerin polarizasyonu ve büyümesi ile sonuçlandı. Bu 3D kültürlü hücreler, ameloblast biyolojisini anlamak için harika bir modeldir. Ve bu biyolojiyi anlamak için, elektron mikroskobu, proteomik ve genomik dahil olmak üzere çeşitli teknikler kullanabiliriz.
Ameloblastlar fantastik hücrelerdir. Evet, prizmatik diş minesi salgılama yeteneğine sahiptirler. Şimdi, bu biyoreaktör modeli bizi ameloblastların prizmatik diş minesini büyütmek için matrisi nasıl salgıladığını ve apatit minerallerini nasıl salgıladığını anlama konumuna getiriyor.
