이 프로토콜은 꼬리 뇌간과 상부 자궁 경부의 관심 영역에 대한 재현 가능한 접근 경로에 대한 단계별 지침을 제공합니다. 이 기술은 꼬리 뇌간이나 상부 자궁 경부의 제한된 관심 영역에 작은 주사량을 전달할 때 정밀도를 높입니다. 이 기술은 다른 동물 모델에 적용될 수 있고 적용될 수 있다.
신경학 부교수이자 VanderHorst Laboratory의 수석 연구원 인 Veronique VanderHorst 박사는이 절차를 시연 할 것입니다. 산소 흐름이 코 콘으로 향하는지 확인하십시오. 마우스를 입체 택시 프레임으로 이동하고 코를 유연한 코 콘에 놓습니다.
이어 바만 사용하여 마우스를 스테레오택시 프레임에 놓습니다. 눈에 윤활제를 바르십시오. 수동으로 코를 안내하여 마우스의 머리를 90도 각도로 Anteroflex하십시오.
이 위치를 확보하려면 마우스 어댑터의 이어 바 기둥 사이에 플라스틱 장벽을 두개골의 평평한 부분이 참조 역할을하는 기둥과 평행하게 배치하십시오. 가열 패드를 마우스 아래에 놓고 작은 상자로 몸을 들어 올려 목과 신체의 나머지 부분이 테이블에 평행하게 배치되었는지 확인하십시오. 몸 아래에 드레이프를 놓습니다.
킬로그램 당 네 밀리그램의 단일 복용량을 주입 멜록시캄 천천히 방출 체중 그램 당 두 마이크로 리터의 부피로 피하로. 수술 절개 부위를 먼저 70 % 알코올 준비 패드로 닦은 다음 베타 인 준비 패드로 닦은 다음 다시 알코올 준비 패드로 말리십시오. 손을 소독하고 멸균 장갑을 착용 한 다음 수술 부위에 커튼을 놓습니다.
발가락을 꼬집거나 각막 반사를 확인하여 마우스를 적절하게 마취했는지 확인하십시오. 이소플루란을 줄여 수준을 2.0으로 유지하십시오. 후두부 뼈의 가장자리에서 어깨쪽으로 수술 용 10 블레이드로 1 ~ 1.2 센티미터 절개를하십시오.
조심스럽게 사다리꼴 근육의 중간 선 랩을 절개하여 쌍을 이룬 장수염 근육을 노출시킵니다. 두 리트랙터 후크를 쌍을 이룬 장수염 근육 사이에 놓고, 하나는 왼쪽으로, 다른 하나는 오른쪽으로 향하게합니다. 무딘 laminectomy 포셉을 사용하여 쌍을 이룬 장수염 근육의 왼쪽 및 오른쪽 배를 분리하고, 중간 선이 쉽게 보이는 후두부에서 시작하십시오.
중간 선에서 후두부의 뼈를 가로 질러 무딘 포셉을 안내하여 cisternal dura mater와 만나는 곳으로 안내 한 다음 경막을 가로 질러 아틀라스까지 계속하십시오. 리트랙터의 위치를 변경하고 지혈제를 재배치하여 장력을 조정합니다. 무딘 laminectomy 포셉을 사용하여 중간 선에서 근육을 더 분리하여 뇌간과 소뇌를 잘 볼 수 있습니다.
소뇌와 뇌간이 듀라 아래에 나타날 때까지 필요에 따라 위의 절차를 반복하십시오. 무딘 laminectomy 포셉을 사용하여, 뇌간을 명확하게 볼 수있을 때까지 중간 선에서 횡방향으로 포셉을 움직여 결합 조직의 작은 가닥의 경막을 지우고 더 많은 측면 공간을 만듭니다. 열린 두라를 통해 상세한 랜드 마크가있는 뇌간의 등쪽 표면을보십시오.
각진 포셉을 사용하여 후두골에서 아틀라스까지 뻗어있는 경막을 잡은 다음 스프링 가위를 사용하여 두라에서 약 0.5 ~ 1.5 밀리미터의 작은 개구부를 만듭니다. 경막이 열리면 멸균 된 Q 팁으로 과도한 뇌척수액을 배출하십시오. 중앙 운하가 네 번째 심실로 열리는 지점 인 외측은 표준 전방 후부 및 평측 영점입니다.
입체 택시 암을 사용하여 피펫 또는 주사기를 표적에 위치시킵니다. 등쪽 영점에서 형성되는 등쪽 표면으로 등쪽 팔을 내립니다. 그런 다음 피펫을 뇌간으로 내리고 용액을 주입하십시오.
주사 후 일에서 5 분 동안 바늘을 제자리에 두어 3 ~ 50 나노 리터 사이의 부피를 사용할 때 바늘 트랙을 피하십시오. 그런 다음 입체 택시 암을 사용하여 피펫이나 주사기를 들어 올리고 여러 대상에 대해이를 반복하십시오. 수술 현장에서 후크를 조심스럽게 제거하십시오.
쌍을 이룬 장수염 근육은 수흉골 마그나를 완전히 덮는 중립 위치로 되돌아 가게됩니다. 봉합사를 잡기에는 너무 약하기 때문에 중간 선의 사다리꼴 근육과 경막은 닫지 마십시오. 나일론 또는 폴리프로필렌 봉합사 3개로 피부를 닫습니다.
cisterna magna 접근법은 표준 입체 택시 접근법을 통해 도달하기 어렵거나 일관성없는 타겟팅에 취약한 꼬리 뇌간 및 상부 자궁 경부 구조를 타겟팅 할 수있게합니다. 마우스에서, 저광택 핵, 복부 호흡기 및 인접 망상 형성과 같은 구조는 저광택 핵 및 벤트로메디아 수질에 대해 여기에 예시된 바와 같은 시스테르나 마그나 접근법을 사용하여 일상적으로 표적화되었다. 표준 접근법 대 시스테르나 마그나 접근법의 정확성을 결정하기 위해, 복부 및 등쪽 영역에 대한 전후, 평측부 및 등쪽 평면에서 의도된 표적 부위와 실제 표적 부위 사이의 거리를 측정하였다.
결과는 표준 접근법에 비해 전후, 평측 및 등쪽 평면에서 상당히 작은 오류를 보여 주며 이러한 대상에 대한 cisterna magna 접근법의 향상된 정확성을 강조합니다. 이 프로토콜을 시도 할 때, 머리의 전방 굴곡과 신체의 상승이 설명 된대로 수행되도록하는 것이 중요합니다. 다음으로, 근육이나 경막을 조작하기 전에 주요 랜드 마크를 인식하는 것이 중요합니다.
이러한 랜드 마크가 인식되지 않거나 분실 된 경우 방향을 유지하고 의도 한대로 절차를 실행하는 것이 어려울 것입니다. 이 기술은 인과 관계 뇌간과 상부 자궁 경부 내의 기능적 해부학 적 조직과 관련된 개념적 질문을 해결하는 데 도움이되었습니다.
