우리의 외과 적 절차는 렙토멘닝 세포의 특정 유전자 편집을 가능하게신경 발달과 세균성 뇌막염의 확산과 같은 많은 생리적 및 병리학 적 조건에서 자신의 기능을 연구할 수 있습니다. 엔독시펜의 인트라디에이터리 전달 중 손상을 최소화하기 위해, 우리는 두개골의 caudal 가장자리에 대해 고정 될 수있는 구부러진 바늘을 사용하여 조직 깊숙이 침투하는 것을 방지합니다. 절차는 기능 실험의 손실 및 이득을 통해 렙토멘딩 세포를 표현하는 유전자의 역할을 탐구하기 위하여 이용될 수 있습니다.
또한 뇌척수액 의 흐름을 추적하기 위해 채택 될 수있다. 이 방법의 시각적 데모는 인종 차별 성 주사에 대한 주입 부위의 성공적인 식별을 보장하고 후두 뼈에 대한 바늘을 확보하는 방법에 대한 이해를 보장합니다. 주사를 위해 30 게이지 베벨드 바늘로 해밀턴 주사기를 준비하는 것으로 시작합니다.
집게를 사용하여 바늘을 끝에서 3밀리미터까지 구부립니다. 다음으로, 10%DMSO에서 엔독시펜을 밀리리터당 1밀리그램의 농도로 희석시키고 주사기를 백필한다. 이소플루란 챔버에서 동물을 마취한다.
그런 다음 마우스피스가 수술테이블 표면으로부터 약 30도 각도로 되도록 마우스 헤드 홀더를 조정하여 동물의 머리를 홀더에 고정시합니다. 시스테나 마그나에 대한 접근성을 향상시키기 위해, 동물의 몸을 테이블 표면에서 약 30도 아래로 기울어 몸의 나머지 부분과 함께 120도 각도를 설정하고 목 뒤쪽을 확장하여 시스테르나 마그나에 대한 접근을 용이하게합니다. 동물이 제대로 배치되면, 안연연을 적용, 목 의 뒷면을 면도하고, 알코올 물티슈와 베타 딘으로 영역을 살균.
외과 가위를 사용하여 후두 뼈의 수준에서 시작하여 후방으로 확장하는 중간 선 절개를 하십시오. 피상적 결합 조직과 목 근육을 미세 한 팁 핀셋으로 미드 라인에서 옆으로 당겨 서 피상적 인 결합 조직과 목 근육을 부드럽게 분리하여 시스테나 마그나 위에 있는 듀랄 막을 노출시킵니다. 시술 내내 시스테나 마그나의 시각화를 가능하게 하는 작은 수술 분리기를 배치합니다.
목막 뼈의 caudal 끝을 확인하고 바로 아래에 이전에 구부러진 바늘을 삽입합니다. 두라가 천공되면 주사기를 위쪽으로 부드럽게 당겨 서 표면 아래에 바늘의 구부러진 끝이 침투하여 더 나은 안정성을 보장합니다. 뇌척수액의 자연적인 흐름에 대한 간섭을 피하기 위해 화합물을 천천히 주입하십시오.
주입 후 바늘이 1 분 동안 내부에 휴식을 취한 다음 미세 팁 집게의 도움으로 조심스럽게 제거하십시오. 치아 노아크릴레이트 접착제 몇 방울로 피부를 닫고 주사 부위에 국소 마취제를 바르습니다. 홀더에서 동물을 제거하고 가열 패드에 깨끗한 케이지에 놓습니다.
그런 다음 의식을 회복 할 때까지 동물을 모니터링해야합니다. Cx30 프로모터하에서 CreER을 발현하는 형질 마우스에서 내측 내시경 주사, 유도형 형광 리포터는 피질에 있는 표면 성상세포 및 완랑한 성상세포를 표현하는 인접한 Cx30을 표시하지 않고 렙토멘닝 세포의 특정 재조합을 허용합니다. 이 주입 프로토콜은 뇌척수액의 생리적 움직임을 활용하여 엔록시펜 용액이 후각 전구, 피질 및 소뇌를 오버레이하는 렙토멘딩 세포를 효율적으로 재결합하기 위해 수막 공간 전체에 분포되도록 합니다.
해결책은 두뇌 수막 장벽을 교차하거나 경구 gavage를 통해 전신 행정반대로 parenchyma의 천체 글리아 세포와 접촉하지 않습니다. 내인종 주의 적 주입 후 렙토멘닝 세포의 재조합은 Pdgfr-알파 반응성을 통해 확인되었으며 Gfap을 표현하는 표면 및 완두콩 성상 세포는 라벨이 부착되지 않은 채로 남아 있었습니다. 이 실험을 시도할 때, 인종 차별 성 전달을 위한 주사 부위를 찾는 것이 중요합니다.
이 시각적 데모는 그 아래 신경 조직을 손상의 위험을 최소화하면서 절차를 수행하는 기술적 노하우를 제공합니다. 유전자 절제 연구는 뇌척수액 형성의 코르티코 발생 및 조절에서 렙토스멘닝 세포의 역할을 조사하고 뇌막부 공간에서 박테리아의 확산을위한 추가 사이트를 식별하기 위해이 기술로 수행 될 수있다.
