Microdialysis System을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집

뇌 미세투석 기술에 의한 해마 세포외액 및 군중은 중추신경계 질환의 질병 특이적 마이크로를 모니터링하는데 기여한다. 뇌 미세 투석 기술은 마취되지 않은 쥐의 특정 뇌 영역에서 간질 뇌액의 역동적이고 지속적인 조사를 달성합니다. 마취된 쥐를 정위 뇌 탐지기에 고정하고 수술 전에 면도한 수술 부위를 포비돈 요오드와 에탄올 면봉으로 세 번 닦습니다.

그런 다음 수술 용 가위로 중간에 1.5cm 두개골 안면 절개를하고 수술 용 가위와 안과 겸자를 사용하여 골막을 제거합니다. 브레그마를 기저 위치로 간주하여 두개골 드릴을 사용하여 내두개를 뚫어 해마 CA1 영역에 2mm 구멍을 뚫습니다. 이제 카테터 스틸렛을 정위 뇌 탐지기의 그리퍼에 고정하고 전후, 내측 및 등쪽 복부 위치에서 미세 투석 케이싱의 위치를 조정합니다.

뇌 입체 탐지기의 배측 밸브를 조정하고 미세 투석 케이싱을 3.5mm 깊이의 CA1 영역에 이식합니다. 직경이 2mm인 조리개 3개를 더 뚫어 3개의 구멍이 프로브 구멍이 중앙에 위치하는 삼각형을 형성하도록 합니다. 1mm 깊이의 구멍에 나사를 이식하고 프로브 카테터를 치과 용 시멘트로 고정합니다.

그런 다음 4-O 수술 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다. 미세 투석 펌프 미세 주사기를 ACSF 각성 활동 장치 및 극저온 s와 연결하십시오.amp제조업체의 지침에 따라 수집기. 다음으로, 파이프 라인의 공기를 배출하기 위해 미세 투석 펌프를 분당 1 마이크로 리터의 속도로 설정하십시오.

그런 다음 파이프라인과 뇌 미세 투석 프로브를 연결하고 분당 1마이크로리터의 속도로 미세 투석 펌프를 작동하여 프로브 표면이 약간 촉촉해질 때까지 프로브에 ACSF를 주입합니다. 후속 사용을 위해 프로브를 헤파린 나트륨 주입 용액에 담그십시오. 깨어 있는 쥐에게서 HECF를 수집하려면 뇌 미세 투석 프로브를 프로브 카테터에 삽입하고 쥐가 자유롭게 움직일 수 있도록 패딩이 있는 챔버에 쥐를 넣습니다.

쥐가 자유롭게 움직이는 동안 미세 투석 파이프 라인이 얽히지 않도록 다중 채널 회전 컨트롤러를 켭니다. 그런 다음 마이크로 주사기 펌프를 켜고 분당 1 마이크로 리터의 속도로 ACSF를 펌핑하십시오. 미세투석 HECF 수집 시스템의 60분 평형 후, 주기적으로 HECF를 수집한다.

샘플링 종료 후 프로브 카테터에서 뇌 미세 투석 프로브를 꺼냅니다. 프로브를 탈이온수에 담그고 탈이온수로 12시간 동안 세척하여 파이프라인과 프로브에서 좌초된 염 침전물을 제거합니다. 프로브를 제거하고 섭씨 4도에서 0.05% 트립신 용액에 넣습니다.

뇌 미세 투석 기술로 획득 한 해마 세포 외액은 물과 같고 무색이며 설정된 샘플링 속도에서 투명합니다. 가장 중요한 절차는 미세 투석을 CA1 영역에 조심스럽게 이식하고 프로브를 팝 카테터에 삽입하는 것입니다. 미세 투석 기술은 특정 뇌 영역에서 질병 마커의 동적 변화, 약물 효능의 물질 및 약물 성분의 조직 이화 작용을 도울 수 있습니다.