이 프로토콜은 인간 CAR-T 및 종양 세포를 활용하고 CART19 투여와 관련된 독성을 정확하게 입증합니다. 따라서 클리닉에서 관찰 된 내용을 요약합니다. 이 플랫폼을 사용하는 주요 이점은 인간 T 세포와 종양 세포가 활용되는 번역 가능하고 임상적으로 관련된 모델을 제공한다는 것입니다.
이 모델을 사용하면 CART19 관련 독성을 효율적으로 평가할 수 있을 뿐만 아니라 개선된 치료 전략을 통해 이러한 독성을 극복할 수 있는 방법을 더 잘 이해할 수 있습니다. 시작하려면 CART19 투여 마우스를 하루에 두 번 모니터링하여 운동 약화, 구부러진 신체 및 체중 감소와 같은 웰빙의 변화를 평가합니다. 생쥐가 운동 약화와 체중 감소를 나타내면 말초 혈액을 수집하여 종양 부담을 분석합니다.
및 원고에 기재된 바와 같이 사이토카인에 대한 혈청 분리를 수행한다. 분리 후 혈청 미세 원심분리기 튜브를 섭씨 80도에 보관하고 cera를 사용하여 멀티플렉스 분석을 사용하여 케모카인과 사이토카인을 분석합니다. MRI 영상의 경우 120마이크로리터의 가돌리늄과 880마이크로리터의 식염수를 혼합하고 1밀리리터 인슐린 주사기에 넣습니다.
준비된 용액 100 마이크로 리터를 각 마우스에 복강 내 주입한다. 마우스를 마취시키고 설치류 호환 크래들 프로브에 놓습니다. 그런 다음 바이트 바에 이빨을 걸십시오.
마우스 헤드를 25mm 볼륨 코일로 당기고 이소플루란 마취 시스템에 연결된 노즈 콘을 조정합니다. 바이트 바의 손잡이를 조여 스캔하는 동안 위치를 유지합니다. 호흡 평가를 위해 호흡 모니터링 장치의 프로브를 횡격막 가까이에 부착하고 수술용 테이프로 고정합니다.
마우스의 상태가 안정적으로 유지되도록 호흡 속도를 분당 20-60회 사이로 유지하십시오. Vertical Bore Small Animal MRI 시스템 내의 작은 구멍에 동물 프로브를 삽입하고 코일 중앙에서 동물의 머리를 조정합니다. 잠금 장치를 사용하여 장치를 수직 위치에 고정하고 기기를 컴퓨터에 연결합니다.
그런 다음 ParaVision 소프트웨어를 열어 스캔 위치와 스캔 유형을 설정합니다. 최적의 시상 및 축 위치를 결정하면서 모든 실험 그룹에 대해 일관되게 유지합니다. T1 강조 MRI 데이터를 수집하려면 반복 시간 300밀리초, 에코 시간 9.5밀리초, 시야 4.00 X 2.00 X 2.00cm, 행렬 192 X 96 X 96의 T1 강조 다중 슬라이스, 다중 에코 시퀀스를 사용합니다.
T2 강조 MRI 영상의 경우, 유사한 파라미터를 가진 다중 슬라이스, 다중 에코 시퀀스를 사용합니다. 스캔이 완료되면 보어에서 프로브를 제거하고 바이트 바에서 치아를 제거하여 마우스를 부드럽게 추출합니다. 소프트웨어에서 데이터를 추출한 후 분석 소프트웨어를 사용하여 고강도 영역 CD19+종양 세포 집단의 정량화 및 3D 볼륨 렌더링을 CART19로 처리한 마우스와 유세포 분석을 사용하여 처리하지 않은 마우스 간에 비교했습니다.
CART19 세포로 처리된 마우스에서 현저한 체중 감소가 관찰되었다. 체중 감소는 CART 세포 관련 독성과 관련된 CRS 출현의 증상으로 간주됩니다. 멀티플렉스 분석은 CART19 투여 전후의 NSG 마우스 혈청에서 사이토카인 및 케모카인의 발현을 밝혀냈다.
T2 강조 이미지는 CART19 처리된 마우스에서 신경염증 동안 부종 및 염증 침윤 가능성의 증거를 보여주었습니다. T1 강조 MRI는 뇌 실질 내에서 조영 증강을 보였으며 이는 혈관 투과성이 증가했음을 나타냅니다. 설치류 뇌의 3차원 재구성은 혈관 투과성에 해당하는 T1 고강도 영역을 기반으로 조립되었으며, 이는 뇌의 가돌리늄 누출량을 렌더링합니다.
말초 출혈과 함께 CART19 투여 후 마우스의 일일 신체 모니터링이 CRS 또는 신경 독성을 나타내는 뇌의 변화를 완전히 평가하기 위해 MRI를 진행하는 가장 좋은 지표가 될 것임을 기억하는 것이 중요합니다. 이 기술은 추가적인 CAR-T 세포 요법에 광범위하게 적용 가능하며 과학자들이 새로운 CAR-T 세포에서 발생하는 잠재적 독성을 효율적으로 테스트 할 수 있도록합니다. 이 제안된 모델은 CAR-T 세포 관련 독성을 모니터링, 치료 및 사용하여 새로운 CAR-T 세포 모델을 검증하는 방법을 이해하는 디딤돌입니다.
