Abordagens ecocardiograma e protocolos de Comprehensive Caracterização fenotípica de doença cardíaca valvular em ratos

Resumo

This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.

Resumo

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.

Introdução

O envelhecimento está associado com aumentos progressivos na calcificação cardiovascular ^1. Estenose da valva aórtica hemodinamicamente significativa afeta 3% da população com idade superior a 65 ^2, e os pacientes com estenose da válvula aórtica, mesmo moderada (velocidade de pico de 3-4 m / s) têm uma sobrevida livre de eventos em 5 ano de menos de 40% ^3. Atualmente, não existem tratamentos eficazes para retardar a progressão da calcificação da válvula aórtica e substituição da válvula aórtica cirúrgica é o único tratamento disponível para a estenose da válvula aórtica avançada ^4.

Estudos destinados a ganhar uma compreensão mais profunda dos mecanismos que contribuem para o início e progressão de calcificação da válvula aórtica é um primeiro passo fundamental no caminho para métodos farmacológicos e não-cirúrgicos para gerenciar estenose da valva aórtica ^{5, 6.} Genéticocamundongos ly-alteradas têm desempenhado um papel importante no desenvolvimento de nossa compreensão dos mecanismos que contribuem para uma variedade de doenças e agora estão vindo à tona de estudos sobre os mecanismos que visam a compreensão da biologia da estenose da válvula aórtica ^{6, 7, 8.} Ao contrário de outras doenças cardiovasculares, tais como aterosclerose e insuficiência cardíaca onde-protocolos padrão para avaliar a função ventricular e vascular são, na maior parte bem estabelecida-existem desafios únicos associados com a fenotipagem in vivo da função de válvula de coração em ratinhos. Enquanto comentários recentes têm proporcionado debates aprofundados sobre as vantagens e desvantagens de inúmeras imagens e modalidades invasivos utilizados para avaliar a função da válvula em roedores ^{9, 10, 11,} até à data, não temos conhecimento de uma publicação que fornece uma comprehensive, passo-a-passo protocolo para a função de válvula cardíaca fenotipagem em camundongos.

O objetivo deste artigo é descrever os métodos e protocolos para o fenótipo função de válvula cardíaca em camundongos. Todos os métodos e procedimentos foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional e Use a Mayo Clinic. Os principais componentes deste protocolo incluem a profundidade da anestesia, a avaliação da função cardíaca, bem como a avaliação da função de válvula cardíaca. Esperamos que este relatório não só servirá para orientar os investigadores interessados ​​em prosseguir a investigação no domínio da doença da válvula do coração, mas também vai iniciar um diálogo nacional e internacional relacionada com a padronização do protocolo para garantir a reprodutibilidade dos dados e validade neste campo de rápido crescimento. Importante, uma imagem com o uso de sistemas de ultra-som de alta resolução exige um conhecimento prático dos princípios da ultra-sonografia (e terminologia comumente utilizados em ultra-sonografia), uma compreensão do princip fundamentaisles da fisiologia cardíaca e experiência significativa com a ultra-sonografia para permitir a avaliação precisa e tempo-eficiente da função cardíaca em roedores.

Protocolo

1. Prepare os materiais e equipamentos (Tabela 1 e Figura 1)

1. Ligue a máquina de ultra-som. Digite o ID do animal, data e hora (para experimentos com imagens de série) e outras informações relevantes.
2. Use um transdutor de ultra-sons de alta freqüência, 40 MHz para os ratos de imagem inferior a ~ 20 g ou 30 MHz para ratos maiores que ~ 20 g.
3. Conectar-se a plataforma para o eletrocardiograma (ECG) monitorar ECG gating de imagiologia para certas modalidades.
   NOTA: criticamente, este também permite o cálculo instantânea da frequência cardíaca (HR), que pode ser utilizado como um de vários índices de uma profundidade adequada da anestesia.
4. Pré-aquecer a plataforma a 37 ° C.
   NOTA: Todas as máquinas de ultra-som disponíveis comercialmente têm um painel de controle que fornece controles de aquisição de imagem e controles de gerenciamento de estudo para B-mode, modo-M, e ecocardiograma Doppler. A ferramenta de medição cardíaca é incorporado na máquina durante a medição automáticae cálculo de parâmetros ecocardiográficos comuns de funções cardíacas e valvulares.

2. Prepare o mouse for Imaging e indução da anestesia

1. Gentilmente pegar o rato pela cauda e segurar firmemente o animal na nuca de seu pescoço.
2. Orientar o nariz do animal para o cone do nariz. Inicie o fluxo de anestesia em 1% isoflurano. Certifique-se de que o animal é sedado dentro de 3-5 segundos de exposição ao gás.
3. Rapidamente e com precisão colocar o animal na plataforma em decúbito dorsal, certificando-se de que as patas dianteiras e patas traseiras mentir sobre os sensores de ECG da plataforma.
4. Suavemente prender o animal com fita adesiva em todos os quatro membros, levemente aplicar fita adesiva para estabilizar a cabeça do aparelho de cone de nariz, e aplicar a fita adesiva para estabilizar a cauda. Ambas as patas traseiras e patas dianteiras deve estar nivelado para garantir a aquisição do sinal ECG estável e clara pelo sistema de imagem fisiológica.
5. Verifique o HR. Faça isso usando uma imaplataforma ging com capacidades de ECG ou com dispositivos de ECG externo. Certifique-se que a linha de base HR é entre 600-700 bpm. Certifique-se de que o HR não caia abaixo de 450 bpm em qualquer circunstância.
   Nota: Durante o procedimento, o RH pode diminuir ligeiramente, devido à anestesia, mas deve ser acima de 500 bpm na maioria dos casos.
6. Ajustar o fluxo de anestesia em pequenos incrementos em conformidade (~ 0,1% incrementos a cada 15 s até que um estado estável de anestesia é atingido).
   NOTA: um estado estável de anestesia é uma condição na qual os parâmetros cardíacos acima mencionados são mantidos (ver passo 2.5) e o animal não responder aos estímulos abertamente a partir da colocação da sonda em várias janelas de imagem. Importante, este não é um plano cirúrgico de anestesia, o que resulta em cardiodepression acentuado em ratinhos. Para as sessões de imagem prolongados, a aplicação do veterinário unguento para os olhos para evitar a secura é recomendado.
7. Verifique a temperatura do corpo usando um termômetro retal. Manter a temperatura entre 36,5 ° C e 38 ° C.
   NOTA: Numa sala de ambiente controlado-forma apropriada e em uma plataforma aquecida, a temperatura corporal (por via rectal medido) mantém-se constante durante todo o processo e, consequentemente, não é um factor contaminante influenciando cardiovasculares hemodinâmica ao longo do tempo.
8. Raspar o cabelo do peito usando um clipper elétrico projetado para uso com o cabelo fino. Limpe a caixa com uma toalha de papel úmido. O animal está pronto para imagiologia.
   Nota: Durante a remoção química do cabelo também pode ser realizada, evitar a utilização de tais compostos, uma vez que podem causar irritação significativa da pele ao longo do tempo em experiências a longo prazo. Além disso, a aplicação e a remoção de tais produtos de remoção de cabelo com base em quimicamente apropriado pode prolongar a duração da exposição a anestesia por 2-3 min (~ 10-20%). O tempo total desde a indução da anestesia até à conclusão da preparação para a pele deverá ter menos de 3 minutos.

_title "> 3. Siga Princípios e Diretrizes Básicos em adquirir Cardiac Ultrassom Imagens

NOTA: Existem três modalidades de ultra-som utilizados em adquirir as imagens: B-mode / 2-D, M-mode, e Doppler (Doppler pulsátil espectral e Doppler de fluxo em cores). Há duas posições de transdutor básicos usados para adquirir imagens das válvulas do coração e do coração: o para-esternal e janelas apicais (Figura 2).

1. A partir de cada posição do transdutor, obter múltiplas imagens tomográficas do coração em relação aos seus longas e curtas eixos de rotação e angulação do transdutor manualmente.
   NOTA: refere-se a rotação de rotação ou torção, o transdutor a partir de uma posição fixa na parede da caixa, enquanto angulação refere-se ao movimento de lado-a-lado do transdutor a partir de um ponto fixo na parede do peito. Todos os transdutores de ultra-som tem um marcador de índice de imagem na forma de uma ranhura (notch), nervuras externo ou botão.
2. Certifique-se de que o sig de ultra-somnal é perpendicular à estrutura alvo ajustando a posição do transdutor em conformidade.
3. Optimizar o fluxo de cor e os sinais de velocidade de pico, alinhando a ultra-sons transmitidos feixe paralelo ao fluxo. O ângulo entre o feixe de ultra-som e o fluxo deve ser inferior a 60 °.
4. Otimizar a qualidade da imagem usando os controles do painel de controle. Apenas a área de interrogatório deve preencher a exibição da imagem.
   NOTA: Os ajustes finos em posições do transdutor e da plataforma são quase sempre necessário obter imagens nítidas. Mesmo em condições ideais, os movimentos respiratórios, anatomia da parede torácica (por exemplo, o espaçamento costela pequeno), e variações na anatomia interna (tanto inerente e induzida por doença) pode limitar a janela acústica e fazer aquisição de imagem muito desafiador.
5. Ao medir as dimensões do ventrículo esquerdo em modo M e 2-D / B-mode, coloque a pinça de medição na linha de eco mais contínua.
6. Ajuste a um setor Doppler coloridovolume da amostra d para a zona de interrogação através do ajuste do controle do sector, que se encontra no painel.
   NOTA: O esquema de codificação de cores em estudos Doppler indica a velocidade e direcionalidade do fluxo sanguíneo. sinais Doppler que são vermelhas indicam o fluxo sanguíneo laminar para o transdutor. sinais de Doppler que são azuis indicam o fluxo laminar de distância a partir do transdutor. Um padrão de cor "mosaico" indica regiões de fluxo sanguíneo turbulento ou não laminar (o que normalmente ocorre na estenose valvar ou regurgitação valvular).
7. Grave um mínimo de dois 5 s tiras (ou 100 frames) de B-modo em tempo real / 2D eco de cada janela de imagem para análise offline.
   NOTA: máquinas de eco comercialmente disponíveis têm definições de aquisição de imagens que capturam um número pré-definido de quadros ou tamanhos cine-laço. As configurações de aquisição de imagem pode ser modificado de modo a que os anéis cine mais longas podem ser adquiridos. Aquisição de imagens de alta qualidade requer uma vasta experiência e experimentação. Investigators deve encontrar a combinação certa de colocação de transdutor e ângulo de plataforma para obter imagens a partir de muitos pontos de vista e janelas acústicas.

4. Avaliação da Válvula Aórtica (AV) Função

NOTA: A avaliação da função da válvula aórtica incluem avaliações qualitativas da válvula (por exemplo, espessura cúspide percebido, ecogenicidade aumentada devido à calcificação valvular, ea presença ou ausência de jatos regurgitantes usando Doppler colorido) e medidas quantitativas de função de válvula (por exemplo, transvalvar pico velocidade e distância de separação cúspide).

1. Comece a imagem da válvula aórtica, selecionando-mode B de aquisição de imagem.
2. Com o animal presa de forma segura na plataforma e a cabeça virada para longe do investigador, inclinar a mesa de 15-20 ° para a esquerda. Isso fará com que o coração para a frente e para a esquerda, mais perto da parede do peito. Aplique uma quantidade generosa de gel de ultra-som no transdutor ou diretamente no umpeito de nimal.
3. Posicionar o transdutor parasternally, cerca de 90 ° perpendicular com o eixo longitudinal do coração, com o marcador de índice de imagem do transdutor apontando posterior (Figura 2). Enquanto no modo B 2D /, deslize a cefálica transdutor até que a AV vem na vista. Esta é a visão "eixo curto" da válvula aórtica.
   NOTA: Uma válvula aórtica normal tem três cúspides finas que se abrem amplamente durante a sístole e fechar adequadamente durante a diástole de modo que não há nenhuma regurgitação de sangue de volta para o ventrículo esquerdo. As cúspides são muito fina, se movem muito rapidamente, e muitas vezes pode ser difícil de visualizar.
4. Girar a transdutor até que os pontos de índice de imagem do marcador caudal. Observe a raiz da aorta, valva aórtica, via de saída do ventrículo esquerdo, a válvula mitral, átrio esquerdo, e parte da via de saída do ventrículo direito no visor de imagem.
   NOTA: Esta é a vista "eixo longo paraesternal" da AV. O ultra-sonografista deveverificar que existem duas cúspides da válvula aórtica visíveis durante todo o ciclo cardíaco nas imagens de modo-B, o que vai permitir a subsequente imagem Modo M e a análise (ver infra).
5. Avaliar a raiz da aorta neste ponto de vista. Cuidadosamente varra para trás e para a frente de modo a que as imagens da raiz da aorta contêm as maiores dimensões da raiz da aorta. Medir a maior dimensão antero-posterior da aorta usando o paquímetro electrónico relacionado com a ferramenta de medição incorporado na máquina.
6. Localize a válvula aórtica no eixo longo. Reduzir a largura da imagem de modo que apenas a válvula aórtica é no visor da imagem, ajustando imagem do botão largura no painel de controle. Posicionar a linha do modo-M de interrogatório, onde se cruza as pontas da válvula aórtica para avaliar com precisão a separação cúspide da válvula aórtica.
7. No visor do modo-M da válvula aórtica, medir a distância de separação cúspide (aparência semelhante a caixa na sístole) usando o compasso electrónico associado ao MEASURferramenta ement incorporado na máquina.
   Nota: A maior vantagem de criação de imagens de modo-M é a resolução temporal muito elevada, o que é essencial para a avaliação da função da válvula aórtica. Enquanto as imagens em modo-M do AV pode ser adquirida em ambos os pontos de vista de curto e longo do eixo, o eixo maior para-esternal é geralmente preferida, porque o plano de imagem permite que a sonographer para identificar prontamente a orientação e localização das pontas do cúspides durante a sístole.
8. Enquanto ainda na vista eixo longo paraesternal da válvula aórtica, pressione a tecla de controle com Doppler colorido no painel de controle. Aplicar Doppler a cores para a região da válvula aórtica.
   NOTA: fluxo normal do ventrículo esquerdo através da válvula aórtica durante a sístole é para o transdutor e, assim, é codificado vermelho.
9. Documentar a presença ou ausência de regurgitação aórtica.
   NOTA: regurgitação aórtica é um fluxo anormal que ocorre durante a diástole e é direcionado para longe do transducer; Assim, é codificado azul.
10. Pressione a tecla de controle de Doppler pulsátil. Usando a bola faixa localizada no painel de controlo, colocar o volume da amostra de onda pulsada na aorta ascendente proximal, imediatamente acima da válvula da aorta, certificando-se que o ângulo entre o feixe de ultra-som e o fluxo de sangue é menos do que 60 °, inclinando o plataforma e / ou o transdutor. Se possível, obter o pico de velocidade através da válvula aórtica da janela fúrcula.
11. Medida da velocidade de pico do visor espectral utilizando as pinças electrónicos associados com o instrumento de medição incorporado na máquina (Figura 3C e 3F).
    NOTA: A cor do mosaico denota alta velocidade de fluxo que é susceptível de conter padrões de fluxo não laminar.

5. Avaliação da válvula mitral (VM) Função

NOTA: A avaliação da função da válvula mitral inclui avaliações qualitativas da válvula (por exemplo, porespessura cúspide beu, ecogenicidade aumentada devido à calcificação valvular, presença ou ausência de jatos regurgitantes usando Doppler colorido) e medidas quantitativas de função de válvula.

1. Colocar o transdutor na posição apical em modo-B. Posicionar o transdutor de modo a que ele é inclinado na direcção da cabeça do rato (Figura 2C). Observe o ventrículo direito (VD), ventrículo esquerdo (VE), átrio direito (AD), e do átrio esquerdo (AE) no visor de imagem. incline manualmente a plataforma um pouco para que o animal está em uma posição de "cabeça para baixo" para visualizar a válvula mitral, uma vez que se abre para o LV.
   NOTA: O apical de 4 câmaras é a visão ideal para o exame velocidade do sangue através do válvulas mitral e tricúspide, bem como a velocidade do tecido do anel mitral. Esta é também uma boa vista para avaliar o movimento e tamanho da RV e septo interventricular.
2. Do apical de 4 câmaras, trazer a válvula mitral em foco, reduzindo a largura da imagem.Observa-se que os folhetos da válvula mitral aparecem como dois filamentos, móveis finos abrindo e fechando durante cada ciclo cardíaco.
   NOTA: folhetos mitral de um rato "normal" pode ser difícil de visualizar se as imagens é feito em RH fisiológica (isto é,> 450 bpm).
3. Coloque o cursor do modo-M através da válvula mitral para avaliar a espessura dos folhetos.
   NOTA: O folheto anterior é melhor visualizado na sístole, quando é perpendicular ao feixe de ultra-sons (Figura 4).
4. Usando o apical de 4 câmaras, aplicar Doppler colorido para a imagem do fluxo do átrio esquerdo através da válvula mitral durante a diástole. Observar o desenvolvimento de regurgitação mitral.
   NOTA: O fluxo é dirigido para o transdutor e, por conseguinte, é codificado vermelho. Fluxo Regurgitante serão codificados e azul ocorre durante a sístole (Figura 5).
5. Usando a visão de longo eixo apical, alternar para o modo pulsátil. Mover o volume da amostra de Doppler para as pontas dofolheto da válvula mitral. Observe os dois picos da exibição ingresso espectral mitral. Se os folhetos não são bem visualizado, utilizar o Doppler colorido para identificar regiões com padrões de cor vermelha ou mosaico brilhantes e colocar o volume da amostra naquele ponto.
   NOTA: O visor espectral do fluxo mitral tem dois picos na lenta horas (<450 bpm). Em RHs normais (> 450 bpm), a precoce (E) e tardia de enchimento fluxos (A) são fundidos. O visor Doppler espectral do fluxo através da válvula mitral é utilizado na avaliação da função diastólica do ventrículo esquerdo (veja o passo 7.5).

6. Avaliação da função de válvula cardíaca direita

NOTA: O válvulas tricúspide e pulmonar compreendem as válvulas cardíacas alinhou-direita. A válvula tricúspide pode ser facilmente visualizado na vista eixo longo apical, enquanto a válvula pulmonar podem ser visualizados em vista tanto a longo paraesternal e eixo curto.

1. Do ponto de vista eixo longo apical, incline ou apontar u a ponta do transdutorcantar um movimento oscilante para que o ventrículo direito está no centro do ecrã de imagem. Reduzir a largura da imagem de modo que apenas o ventrículo direito é visível no visor de imagem.
2. No mesmo plano da imagem, visualizar os folhetos da válvula tricúspide, que aparecem, filamentos móveis como finos entre o átrio direito eo ventrículo direito e que abrem e fecham ao longo de cada ciclo cardíaco.
3. Aplicar Doppler colorido na região da válvula tricúspide. Nota para regurgitação tricúspide.
   NOTA: fluxo normal ocorre durante a diástole, é dirigido para o transdutor, e, portanto, é codificado vermelho. fluxo regurgitante anormal ocorre durante a sístole, é direcionado para longe do transdutor e, portanto, é codificado azul. A velocidade de pico da regurgitação é utilizado para estimar a pressão sistólica do ventrículo direito.
4. Mover o transdutor para a posição do eixo curto para-esternal ao nível da válvula aórtica. Acima da válvula aórtica são a OUTF ventricular direitabaixo trato, a válvula pulmonar, a principal artéria pulmonar proximal, ea artéria pulmonar direita e esquerda (Figura 6).
5. Girar a transdutor para uma posição de eixo longo paraesternal modificado. Em seguida, incline o transdutor ligeiramente para cima para obter uma visão de curto eixo da válvula pulmonar.
6. Neste ponto de vista, aplicar imagens do modo-M para avaliar a distância de separação das cúspides da válvula pulmonar (Figura 7).
7. Aplicar Doppler colorido na região da válvula pulmonar para avaliar a regurgitação valvular (, um jacto de alta velocidade em mosaico durante a diástole) e estenose (, um jacto de alta velocidade em mosaico durante a sístole).
8. Pressione a tecla de controle pulsátil e coloque o volume da amostra logo após a válvula pulmonar.
   NOTA: Análise do visor Doppler espectral do fluxo é utilizado para estimar a pressão da artéria pulmonar (Figura 8).

7. Avaliação da função cardíaca

NOTA: A avaliação da função cardíaca inclui avaliações qualitativas da contratilidade ventricular esquerda (por exemplo, estimativa visual da fração de ejeção, a anormalidade de movimento de parede regional, e a espessura percebida das paredes) e medidas quantitativas de ventrículo esquerdo função (por exemplo, a fração de ejeção, a massa ventricular esquerda, função diastólica do ventrículo esquerdo, e os índices de desempenho do miocárdio).

1. Obter uma vista do eixo curto do VE em modo-B 2D /, com o transdutor na posição do eixo curto para-esternal ao nível dos músculos papilares. Mova o transdutor para cima e para baixo para fazer a varredura do LV da base para o ápice. Observar o desenvolvimento de anormalidades de movimento de parede.
2. Do ponto de vista paraesternal eixo menor do ventrículo esquerdo, pressione o botão de modo M, localizado no painel de controle. Usando a bola faixa, posicionar o cursor do modo-M no centro da cavidade do ventrículo esquerdo ao nível dos músculos papilares e obtin imagens em modo-M.
3. Medir a dimensão da cavidade do ventrículo esquerdo na diástole final, em que a distância entre a parede posterior e da parede anterior é o maior, e no final da sístole, em que o movimento para dentro de ambas as paredes anterior e posterior é máxima (Figura 9).
4. Medir a espessura da parede anterior e posterior ao final da diástole e final da sístole.
   NOTA: Enquanto os músculos papilares são um marco essencial para garantir o plano de imagem correta, tenha cuidado para não incluí-los em qualquer medição.
5. Mover o transdutor para a janela apical. Veja o passo 5.1. Avaliar a função diastólica do ventrículo esquerdo utilizando Doppler pulsátil do fluxo de sangue através da válvula mitral na vista eixo longo apical.
6. Coloque o volume da amostra nas pontas dos folhetos da válvula mitral. Medir a velocidade do fluxo mitral pico do visor espectral de velocidades Doppler pulsátil através da válvula mitral.
7. Posicione o volume da amostra entre LV inflow e saída. Nota mitral e sinais de fechamento da válvula e abertura da aorta. Medir o tempo isovolumétrica relaxamento, tempo de contração isovolumétrica e tempo de ejeção ventricular esquerda (Figura 10).
8. Execute doppler tecidual (TDI) do anel mitral na vista eixo longo apical. Pressione a tecla de controle TDI e coloque o volume da amostra na face medial do anel mitral. Certifique-se que o volume da amostra não invada os folhetos mitral. Manter o tamanho do volume de amostra Doppler entre 0,21 mm e 0,27 mm. Medir a velocidade diastólica precoce (E ') do anel mitral (Figura 11).

8. Etapas finais

1. Reveja as imagens adquiridas. Verificar que todas as imagens requeridas foram obtidos.
2. Remover qualquer gel de ultra-som em excesso a partir do peito do rato e remova cuidadosamente a fita de segurança o animal no lugar. Desligue a anestesia.
3. Colocar o animal em uma toalha de papel absorvente(Não roupa de cama, que pode ser aspirada ou pode bloquear vias aéreas durante a recuperação). Observar o animal até decúbito esternal é atingido. Se a anestesia é administrada de forma adequada, a recuperação deve ocorrer dentro de 30 a 60 s.

Resultados

Exemplos de imagens que são rotineiramente obtidos a partir de animais imagiologia ultra-sons cardíacos são incluídos neste manuscrito. Uma ilustração do posicionamento do transdutor sobre o peito do animal é fornecida para dar ao leitor uma compreensão clara de que o transdutor está posicionado para obtenção de imagens tal como descrito. Uma fotografia do laboratório de ultra-som set-up também está incluído para enfatizar a importância do equipamento adequado, especialme...

Discussão

A indução da anestesia

indução e manutenção de anestesia adequada é fundamental para a avaliação precisa das mudanças na válvula cardíaca e função cardíaca em ratos. Dada a rápida indução da anestesia induzida por isoflurano eo tempo de wash-out relativamente longo deste anestésico após anestesia profunda, não usamos uma câmara de anestesia stand-alone para a indução. Em vez disso, tal como referido em pormenor acima, os animais são guiados directamente...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
High resolution ultrasound machine	VisualSonics, Fujifilm	Vevo 2100
Isoflurane diffuser (capable of delivering 1 % to 1.5 % isoflurane mixed with 1 L/min 100% O2	VisualSonics, Fujifilm	N/A
Transducers for small mice (550D) or larger mice (400)	MicroScan, VisualSonics, Fujifilm	MS 550D, MS 400
Animal platform	VisualSonics, Fujifilm	11503
Advanced physiological monitoring unit	VisualSonics, Fujifilm	N/A
Isoflurane	Terrell	NDC 66794-019-10
Nose cone and tubing connected to isoflurane diffuser and 100% O2	Custom Engineered in-house	--
Hair razor	Andis Super AGR+ vet pack clipper	AD65340
Ultrasound gel	Parker Laboratories	REF 01-08
Electrode gel	Parker Laboratories	REF 15-25
Adhesive tapes	Fisher Laboratories	1590120B
Paper towels