Uma técnica cirúrgica modificada para transplante de rim em camundongos

Resumo

Este protocolo apresenta uma nova técnica cirúrgica de transplante de rim de camundongos com foco em uma estratégia de anastomose arterial modificada. Uma técnica de sutura vascular, incluindo um método simples e mais seguro de anastomose ureter-bexiga também é apresentada. Essas modificações reduzem o tempo de operação e melhoram a taxa de sucesso do procedimento de transplante renal do camundongo.

Resumo

O transplante de rim em camundongos é um procedimento cirúrgico complicado e desafiador. Há muito poucas publicações demonstrando os principais passos desta operação. Por isso, este artigo introduz a técnica e aponta as ressalvas cirúrgicas associadas a esta operação. Além disso, modificações importantes em relação ao procedimento convencional são demonstradas. Em primeiro lugar, um pedaço da aorta abdominal é cortado e preparado para que as bifurcações proximais da artéria renal, incluindo a artéria ureteral sejam transectadas juntamente com o rim doador em bloco. Isso reduz o risco de necrose ureter e evita o desenvolvimento de uma oclusão do trato urinário. Em segundo lugar, demonstra-se um novo método de anastomose vascular que permite ao operador aumentar ou diminuir flexívelmente o tamanho da anastomose após a reinfusão do transplante renal. Isso evita o desenvolvimento de restrições de vasos e sangramento intraabdominal. Em terceiro lugar, é mostrada uma técnica que possibilite a anastomose do delicado doador e da bexiga receptora que não causa um trauma. A adoção deste protocolo pode reduzir o tempo de operação e reduzir os danos à bexiga do receptor, aumentando significativamente a taxa de sucesso da operação para os camundongos receptores.

Introdução

Desde que Sakowitz et al. desenvolveram modelos de transplante de rim em 1973 pela primeira vez¹, provou-se como uma importante ferramenta experimental para estudar os mecanismos de lesão isquêmica de transplante e rejeição aoimune, bem como para o desenvolvimento de novos tratamentos destinados a prolongar a sobrevivência do aléxico e possivelmente para alcançar a tolerância imunológica. No entanto, a técnica cirúrgica tem se mostrado complexa e muito exigente, às vezes tendo complicações como restrições anastomóticas vasculares que levam à insuficiência pré-renal não imunológica², falha pós-renal causada por isquemia e....

Protocolo

Todos os experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes da diretiva 2010/63/UE do Parlamento Europeu sobre proteção de animais usados para fins científicos (Cartão de ética animal: Baixo Ministério da Proteção e Segurança de Drogas da Saxônia, nº 33.9-42502-04-11/0492). Realizar procedimentos utilizando instrumentos cirúrgicos e consumíveis estéreis (autoclaved) e tentar manter a área de operação o mais estéril possível.

NOTA: Os camundongos machos C57BL/6J serviram como doadores e receptores (modelo de transplante sintérico), enquanto os camundongos Balb/c serviram como receptores de aoenxerto renal (modelo para estud....

Resultados

Quatro semanas após o transplante, tanto a técnica modificada quanto a técnica convencional apresentaram sinais moderados de atrofia tubular renal^14,15 quando comparada aos rins contralaterais receptores nativos (Figura 1). O grau de atrofia dos túbulos renais não demonstrou diferença significativa entre as duas técnicas diferentes. A coloração tricrática de Masson Goldner ^14,15

Discussão

Embora o modelo de transplante de pele em camundongos seja simples e fácil de realizar para estudar eventos de rejeição aoimune, as técnicas cirúrgicas para investigar mais especificamente as alterações inflamatórias relacionadas ao aoimune após o coração¹⁶ e o transplante de rim¹⁰ tem se mostrado complexo e muito exigente. Do ponto de vista do nefrologista transplantado, o estabelecimento de um modelo de transplante renal de camundongos estável eficaz e de long.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
30G-needles	Braun	456300	-
acepromazine	CP Pharma	Tranquisol P	-
Bepanthen eye ointment	Haus-Apotheke	PZN 01578675	-
Bonn Micro Forceps	FST	11083-07	-
Box for insulation and oxygen supply device	RUSKINN	INVIV	-
C57BL/6J  mice	Charles River. Germany	no catalog number	-
Carprofen	Zoetis	Rimadyl 50 mg/ml	-
CATHETER-FEP 26G	TERUMO	Surflo-W	-
Clip Applicator Forceps Style	FST	18057-14	-
Curved forceps	WPI	14114-G	-
Cutasept skin disinfection	VWR	BODL980365	-
Dehydrator	DIAPATH	Donatello	-
electrosurgical pen	Bovie	CHANGE-A-TIP	-
Embedding machine	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-P5	-
Ethanol	Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD	100092683	-
Frozen platform	Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd	JB-L5	-
gauze pads, cotton swabs	Lohmann-Rauscher	13353	-
Glass slide	Servicebio	G6004	-
HE dye solution set	Servicebio	G1003	-
Heating mat	THERMO MAT PRO 30W	HTP-30	-
hemostatic sponge	CuraSpon	J1276A	-
heparine-solution	Haus-Apotheke	PZN 03029820	-
ice box	PETZ	No Catalog Number available	-
Imaging system	Nikon	Nikon DS-U3	-
Inhalation anesthesia device	GROPPLER	BKGM 0616	-
isoflurane	CP Pharma	Isofluran CP 1 ml/ml	-
ketamine	Zoetis	no catalog numer	-
Masson dye solution set	Servicebio	G1006	-
metamizole	WDT	no catalog numer	-
Micro scissors	FST	15000-00,15000-10	-
Micro Serrefine ( Clamp ) Angled / 16 mm	FST	18055-06	-
Microscope	Leica	LEICAMZ6	-
Microscope light	SCHOTT	KL2500LED	-
Neutral gum	SCRC	10004160	-
Oven	Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., Ltd	GFL-230	-
Pathology slicer	Shanghai Leica Instrument Co., Ltd	RM2016	-
Saline solution (NaCl 0.9 %)	Haus-Apotheke	PZN 06178437	-
scissors	Peha Instruments	991083/4	-
Slides	Servicebio		-
small Petri dish	Sarstedt	8,33,900	-
straight forceps	WPI	14113-G	-
surgical tape	BSN	4120	-
Suture Tying Forceps - 10 cm	FST	18025-10	-
Sutures(10-0)	Medtronic	N2540	-
Sutures(4-0)	ETHILON	V4940H	-
Sutures(7-0)	ETHILON	1647H	-
Syringe (0,3 mL)	BD	324826	-
Syringe (1 mL)	BD	320801	-
Tissue spreader	Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd	KD-P	-
Upright optical microscope	Nikon	Nikon Eclipse E100	-
xylazine	Bayer	Rompun	-
Xylene	Sinopharm Group Chemical Reagent Co. LtD	10023418	-