Dissezione di organi riproduttivi di un topo femmina <ol><li> Animali gravidi sono eutanasia da CO 2 asfissia con gas compresso. </li><li> L&#39;animale giaceva supino sul tampone assorbente e immergerlo in etanolo al 70% per ridurre il rischio di contaminare la dissezione con i capelli del mouse. </li><li> Pizzicare la pelle e fare una piccola incisione laterale alla linea mediana con regolare forbici chirurgiche. Tenere la pelle saldamente sopra e sotto l&#39;incisione e tirare la pelle a parte verso la testa e la coda per esporre l&#39;addome. </li><li> Afferrare il peritoneo con una pinza e taglio per esporre la cavità addominale. </li><li> Individuare gli organi riproduttivi nella regione dorsale della cavità del corpo: due corna uterine, l&#39;ovidotto e le ovaie. </li></ol> Primitivo Streak stadi (6,5 DPC) Dissection <ol><li> Rimuovere il corno uterino afferrando l&#39;utero al di sotto del ovidotto e tagliarlo libero lungo il mesometrium. Luogo utero sezionato in ghiaccio PBS freddo. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Figura 1" width="263" height="132" /> Figura 1 </li><li> Separare ogni embrione, tagliando tra siti d&#39;impianto lungo corno uterino. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Figura 2" width="575" height="171" /> Figura 2 </li><li> Afferrare il rivestimento uterino muscolare facendo scorrere orologiaio pinza tra lo strato muscolare e il tessuto circostante decidua avvolto. Staccare lo strato muscolare, esponendo il decidua. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Figura 3" width="593" height="166" /> Figura 3 </li><li> Clip di una porzione della decidua esposti al vertice (circa 1 / 5 del tessuto decidua), che esporrà la punta midventral o distale dell&#39;embrione racchiuso. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Figura 4" width="589" height="212" /> Figura 4 </li><li> L&#39;embrione può essere sborsato con le punte delle pinze. Pierce decidua con una pinza che circonda l&#39;embrione e pinze aperto a strappare decidua a parte. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Figura 5" width="249" height="200" /> Figura 5 </li><li> Una volta embrione viene rimosso, membrana Reichart può essere ancora attaccato così come il cono ectoplacental (trofoblasto). L&#39;embrione può essere ulteriormente sezionato da dissezione accurata. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Figura 6" width="356" height="222" /> Figura 6 </li></ol>

<ol>
	<li>Nagy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , (2003).</li></ol>

Post-impianto nel topo si verifica tra 4,5 dpc e la nascita. Questo metodo può essere applicato dissezione, essenzialmente come descritto, per isolare prima o dopo gli embrioni scena al 5,5-8,5 dpc.

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Micro Dissecting Forceps serrated, straight</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5130 </td>
<td>2 pairs</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5010 </td>
<td>2 pairs</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (1X) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-757-12 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4% Paraformaldehyde in PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-940 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pregnant female mice </td>
<td>Animal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

dissection of 6.5 dpc mouse embryos

Analisi dei modelli di espressione genica durante le prime fasi di sviluppo embrionale dei mammiferi in grado di fornire importanti indizi circa la funzione del gene, l&#39;interazione cellula-cellula e meccanismi di segnalazione che patterning guida embrionale. Tuttavia, la dissezione dell&#39;embrione mouse dal decidua poco dopo l&#39;impianto può essere un procedimento impegnativo e dettagliato passo-passo la documentazione di questo processo è carente. Qui mostriamo come post-impianto (6,5 DPC) sono isolate da embrioni prima dissezione nell&#39;utero di un topo gravide (rilevamento del tappo vaginale è stato designato giorni 0,5 coitum poist) e poi sezionare l&#39;embrione da decidua materna. La dissezione della membrana Reichert è descritto così come la rimozione del cono ectoplacental.

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Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Isolamento di post-impianto di embrioni allo stadio permette di studiare e analizzare patterning gene cellulari lignaggio processi decisionali durante lo sviluppo embrionale, ma corretta dissezione dell&#39;embrione precoce può essere difficile. Questo protocollo descrive un metodo per isolare primi primitivo-striscia-stadio embrioni (~ 6,5 giorni post coitum [dpc]).

Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

37.9K Views.  Harvard Medical School. Isolamento di post-impianto di embrioni allo stadio permette di studiare e analizzare patterning gene cellulari lignaggio processi decisionali durante lo sviluppo embrionale, ma corretta dissezione dell'embrione precoce può essere difficile. Questo protocollo descrive un metodo per isolare primi primitivo-striscia-stadio embrioni (~ 6,5 giorni post coitum [dpc]).