Sonication and Biotin Pull-Down of Scarce Cells DNA

Depois de purificar o DNA, comece tomando cromatina digerida ligada e descruzada das células escassas. Ajuste o sonicador em banho-maria em um fator de trabalho de 20% de potência de incidência de pico de 50 a 200 ciclos por explosão por 65 segundos e uma faixa de temperatura de 6 a 10 graus Celsius, e sonice a cromatina digerida ligada e descruzada. Após o término do reparo da amostra, transfira 150 microlitros de esferas de estreptavidina C1 por amostra para um tubo de 1,5 mililitro.

Coloque-os em um ímã de tubo de 1,5 mililitro e espere até que todas as contas fiquem presas à parede. Em seguida, remova o sobrenadante, deixando as contas para trás. Em seguida, lave as contas adicionando 400 microlitros de tampão Tween e ressuspendendo-as com vórtice suave.

Coloque o tubo de volta no ímã até que todas as contas fiquem presas à parede. Em seguida, remova o sobrenadante, deixando as contas para trás. Após ressuspender as contas, em 300 microlitros de buffer 2X No-Tween ou NTB, combine-as com os 300 microlitros da amostra.

Finalmente, incubar por 15 minutos girando à temperatura ambiente para puxar para baixo os fragmentos informativos de DNA com biotina.