Comece analisando as células HEK293T transfectadas usando um microscópio de fluorescência invertido. Uma vez que as células são focadas usando luz de campo brilhante, mude para comprimento de onda de excitação fluorescente mCherry de 587 nanômetros e comprimentos de onda de emissão de 610 nanômetros. Depois de desligar a luz de campo brilhante, verifique a fluorescência das células para confirmar a expressão de ZnT1 mCherry.
Para preparar a solução de carga de corante, tome quatro microlitros de solução de corante fluorescente específica para zinco. Em seguida, adicione quatro microlitros de ácido plurônico a 10%. Misture a solução pipetando para cima e para baixo e transfira-a para um tubo de 1,5 mililitro.
Adicione 750 microlitros de solução de lavagem na solução preparada e agite vigorosamente o tubo. Novamente, adicione 750 microlitros de solução de lavagem. Uma vez vórtice, adicione 750 microlitros desta solução em dois poços de uma nova placa de cultura de seis poços e cubra-a com papel alumínio.
Usando pinças, transfira uma tampa de 13 milímetros da placa de célula HEK293T previamente cultivada para uma placa de seis poços. Depois de cobrir o prato com papel alumínio, agite-o suavemente por 15 a 20 minutos e substitua a solução de carga de corante pela solução de lavagem preparada. Quando o prato estiver coberto, agite-o novamente por 20 minutos.
