Para começar, fixar o tecido pulmonar suíno em paraformaldeído a 4% à temperatura ambiente por 48 horas. Em seguida, transferir o tecido pulmonar para um tubo cônico de 50 mililitros contendo 30 mililitros de PBS com azida de sódio a 0,01%. Mantenha um copo plástico, pinça fina e tesoura estéril pronta.
Aqueça a agarose no micro-ondas até atingir o ponto de ebulição. Em seguida, resfrie-o até 42 graus Celsius em banho-maria. Guarde em banho-maria até ficar pronto para uso.
Remova a biópsia pulmonar da solução PBS Azide. Use pinças finas e tesouras estéreis para dissecar cuidadosamente os lobos pulmonares em blocos menores. Em seguida, corte o meio de um copo plástico.
Despeje uma pequena quantidade de agarose no fundo do copo. Coloque a tampa de um tubo cônico de 50 mililitros com seu aro removido sobre a superfície do agaro. Guarde esta configuração a quatro graus Celsius por cinco minutos para permitir que a agarose se solidifique.
Assim que a agarose se solidificar, retire o copo plástico da geladeira. Agora despeje cerca de um mililitro de agarose líquida na tampa. Em seguida, coloque suavemente o bloco de tecido pulmonar sobre a tampa.
Uma vez que a agarose tenha semis solidificado, submergiu lentamente o tecido pulmonar em agarose líquida. Leve à geladeira a quatro graus Celsius por cerca de 15 minutos até que a agarose fique sólida. Use uma lâmina afiada para remover cuidadosamente qualquer excesso de agarose ao redor do tecido pulmonar.
