Extração de DNA de amostras de escarro humano para a detecção rápida de patógenos bacterianos usando um chip microfluídico

Para começar, limpe a cavidade oral e os dentes com água limpa. Peça aos pacientes com dentaduras para removê-las. Instrua o paciente a tossir com força para expelir o escarro respiratório profundo para um recipiente de escarro.

Para extrair o DNA, adicione um volume apropriado de hidróxido de sódio a 10% à amostra com base em sua viscosidade. Vortex a suspensão por 15 segundos e, em seguida, incube-a a 37 graus Celsius por 30 minutos para liquefazer a amostra. Em seguida, pipete um mililitro da amostra liquefeita em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro.

Centrifugue a amostra a 15.777 G por cinco minutos a dois a seis graus Celsius. Em seguida, pipetar o sobrenadante para descartá-lo. Agora, adicione um mililitro da solução de lavagem ao tubo e vórtice para levantar o precipitado do fundo do tubo.

Depois de centralizar e descartar o sobrenadante como antes, pipetar 100 microlitros de solução de extração de ácido nucleico para o palete. Com uma pipeta, aspire e misture bem o precipitado com a solução. Transfira o líquido e precipite juntos para um tubo de extração de ácido nucleico.

Coloque o tubo em um misturador de vórtice em velocidade média por cinco minutos. Em seguida, transfira o tubo para um banho de metal a uma temperatura constante de 100 graus Celsius por cinco minutos. Finalmente, centrifugue as amostras a 15.777 G por cinco minutos a dois a seis graus Celsius antes de continuar experimentando.