Para começar, extraia o DNA de amostras de tecido formais e fixas embebidas em parafina. Em seguida, centrifugue o pó seco do primer a 5.400 a 8.400 G por dois a três minutos e adicione o volume apropriado de água bidestilada ao longo da parede do tubo de primer. Adicione cinco microlitros de cada primer direto e reverso a 50 microlitros de estoque de primer tipo selvagem e 40 microlitros de água destilada dupla.
Depois de misturar duas a três vezes, vortex o tubo e centrifugue-o brevemente. Para a reação em cadeia da polimerase ou procedimento de PCR, adicione os reagentes necessários a cada tubo de reação. Vórtice para misturar e centrifugar brevemente.
Coloque o tubo de PCR no instrumento de PCR para amplificação. Defina o programa do ciclo térmico e execute-o. Em seguida, execute a eletroforese em gel no produto de PCR usando 2% de agarose para verificar se o fragmento alvo é amplificado.
Para purificar os produtos de PCR, centrifugue brevemente o purificado um e o purificar dois que foram levados à temperatura ambiente e prepare a mistura da reação de purificação. Coloque o tubo de PCR no instrumento de PCR e opere a máquina com os parâmetros predefinidos.
