Para começar, coloque os solventes diluídos a 60% para extração assistida por micro-ondas na plataforma de trabalho. Pese 0,67 gramas da casca de prata do café e misture com 20 mililitros de solvente de extração na proporção de um para 30 em um recipiente de reação. Adicione uma barra de agitação magnética ao recipiente para garantir a distribuição uniforme do calor e do solvente dentro da amostra.
Feche o recipiente firmemente com uma ferramenta especial e coloque-o na câmara de extração assistida por micro-ondas. Para configurar o método, clique no ícone da caixa de ferramentas na barra superior do monitor e selecione o rotor SK eT na seção de acessórios. Em seguida, clique na agitação e digite 20% para definir a taxa de agitação.
Clique no setor da fechadura da porta e configure-o para ativar em temperaturas superiores a 80 graus Celsius. Em seguida, clique no ícone da tabela na barra superior e defina o gradiente de temperatura T1 para uma duração de extração de 10 minutos. Potência de microondas de 1800 watts e temperatura de 120 graus Celsius.
Para ativar a agitação, clique no botão de agitação e aguarde até que a luz verde apareça. Defina a velocidade do ventilador para o nível três. Para manter o tempo de extração, selecione a temperatura de extração desejada T2 definindo a duração da extração para 15 minutos, a potência do micro-ondas para 1800 watts e a temperatura para 120 graus Celsius.
Agora, clique no botão de resfriamento no canto inferior esquerdo da tela e selecione o tempo de resfriamento de 10 minutos. Clique no ícone Salvar no canto superior direito da tela. Inicie o processo de extração escolhendo o número de recipientes usados.
Após a extração, centrifugue os extratos a 9072g por 15 minutos a quatro graus Celsius. Recolha o sobrenadante com uma pipeta de vidro de 10 mililitros e guarde-o a menos 20 graus Celsius. Dilua os extratos de casca de prata do café dez vezes com água destilada em uma placa de 96 poços.
Misturar 10 microlitros da amostra diluída com 20 microlitros de reagente de folin-ciocalteu não diluído e deixar reagir durante três minutos. Em seguida, adicione 100 microlitros de solução de carbonato de sódio a 7,5% à mistura em cada poço de uma placa de 96 poços. Preparar diferentes concentrações para a gama de concentração padrão do ácido gálico diluindo com água destilada.
Misture-os com 20 microlitros de reagente folin-ciocalteu e deixe-os reagir por três minutos. Em seguida, adicione 100 microlitros de solução de carbonato de sódio a 7,5% à mistura em cada poço de uma placa de 96 poços. Incubar a reação por 30 minutos no escuro em temperatura ambiente.
Em um leitor de microplacas, meça a absorbância da mistura de reação em 765 nanômetros. Traçar a curva de calibração padrão utilizando as concentrações do padrão e a absorvância a 765 nanómetros. Exprimir os resultados em miligramas de equivalente ácido gálico por grama de amostra.
A extração aquosa de hexanodiol 1, 2 produziu o maior teor de fenólicos totais e a extração com água rendeu o menor. A extração aquosa de hexanodiol 1, 2 produziu o maior teor de flavonóides totais e a extração aquosa de isopentildiol produziu o menor. A extração aquosa de hexilenoglicol exibiu o maior valor de ensaio de DPPH e a extração aquosa de etanol exibiu o menor.
A extração aquosa de pentilenoglicol resultou no maior valor de ensaio ABTS e a extração de água resultou no menor. A extração aquosa de hexilenoglicol apresentou o maior valor de FRAP e a extração de água apresentou o menor.
