Para começar, tome folhas de choupo inoculadas com cancro mantidas em sacos plásticos. Remova cuidadosamente as películas protetoras plásticas das folhas e remova suavemente os inoculantes de micélio das superfícies das folhas. Observe e identifique os patótipos foliares de cada clone de choupo, examinando a forma e a cor das manchas necróticas.
Em seguida, coloque as folhas em uma régua em um fundo preto. Fotografe a superfície inferior das folhas com uma câmera ou digitalize-as usando um scanner para obter imagens com resolução de mais de 300 pontos por polegada. Abra as imagens das folhas doentes no software ImageJ, 1.54G.
Defina a escala em ImageJ de acordo com a régua visível nas imagens de folha. Em seguida, usando a ferramenta Varinha no ImageJ, identifique as lesões nas folhas e meça a área de cada ponto necrótico. Depois de medir todas as manchas necróticas, registre os valores da área e exporte esses valores como uma planilha para análise posterior.
Se as lesões ao redor dos locais de pares cobertos de micélio forem significativamente maiores do que aquelas ao redor dos locais cobertos de PCA, classifique-os como locais de doença. Se os locais de pares cobertos de micélio mostrarem alterações como cor da lesão, estruturas semelhantes a hifas, picnídios e conídios, defina-os como locais de doença. Calcule a área média de manchas de lesão de PDA efetivas para cada clone híbrido de choupo.
Divida as manchas inoculadas com micélio em duas categorias, início e não início. Em seguida, calcule a taxa de incidência da doença do clone de choupo testado. Calcule a área média das manchas doentes nas folhas.
Com base nas áreas médias de manchas doentes em todos os clones de choupo testados, defina um padrão de classificação de doença de cinco níveis. Calcule o índice de doença de cada clone de choupo usando o padrão de classificação de doença de cinco níveis. Em seguida, usando o teste de Shapiro-Wilk, verifique a distribuição normal do número de clones de choupo em diferentes níveis de resistência.
Com base no índice da doença, classifique todos os clones de choupo testados em cinco ou sete grupos de resistência. Resistência muito alta, alta resistência, resistência, sem resistência e sem suscetibilidade, suscetibilidade, alta suscetibilidade e suscetibilidade muito alta. A inoculação do patógeno do cancro do caule induziu lesões necróticas e até mesmo estruturas semelhantes a picnídios nas folhas do choupo.
Além disso, as posições das folhas e as condições de luz das folhas afetam a severidade da doença das folhas.
