Para começar, adquira imagens multivisualização de embriões de peixe-zebra em estágio inicial usando um microscópio de folha de luz. Assim que os pontos de interesse forem detectados, selecione todas as visualizações, clique com o botão direito do mouse e escolha Registrar usando pontos de interesse. Para verificar a precisão com que o registro funcionou, selecione duas exibições consecutivas.
Vá para a região sobreposta e alterne entre as duas visualizações para observar se as contas fotografadas de diferentes ângulos estão sobrepostas. Após o registro bem-sucedido, clique em Salvar na janela do explorador de várias visualizações para salvar o arquivo XML atualizado. Agora abra o cordão.
XML em um editor de texto de sua escolha e copie todo o bloco em registros de visualização. Abra o embrião. XML e substitua o bloco de registros de exibição pelo bloco copiado do arquivo de contas.
Em seguida, abra o embrião. XML no Big Stitcher e verifique cuidadosamente se o registro funcionou com sucesso para o embrião. Repita o mesmo para as contas, verificando a sobreposição de estruturas de interesse a cada duas vistas consecutivas.
Para executar a deconvolução de múltiplas vistas, selecione todas as vistas no arquivo de cordão, clique com o botão direito do mouse e escolha as funções de dispersão de ponto e as opções de extração. Prossiga com os tamanhos de função de dispersão de pontos padrão e clique em OK. Em seguida, salve novamente o arquivo XML. Em seguida, abra o embrião.
XML e atribua a função de difusão de pontos para cada vista separadamente. Clique com o botão direito do mouse em uma exibição, clique em Funções de propagação de pontos, escolha Atribuir e selecione Avançado, seguido por Atribuir novo PSF a todas as exibições selecionadas. Clique em Procurar, vá para o caminho do arquivo XML e abra a pasta PSF.
Na vista selecionada, escolha a função de difusão do ponto correspondente com o ID correspondente e clique em OK. Depois que a função de difusão de pontos tiver sido atribuída a todas as vistas, clique com o botão direito do mouse e escolha a deconvolução de várias vistas. Selecione a caixa delimitadora como vistas selecionadas no momento. A 70% de epibolia, os embriões assumiram orientações horizontais, verticais ou oblíquas dentro do tubo polimérico, sendo a horizontal a menos representada, enquanto as posições vertical e oblíqua foram igualmente observadas.
Quando as amostras foram preparadas antes da gastrulação, cerca de 25% dos embriões exibiram orientação horizontal. O restante dos embriões exibiu várias outras orientações no estágio de brotação. No entanto, muitos deles foram reorientados para a posição horizontal durante a formação inicial do smito.
Uma comparação das imagens infundidas com informações da escala celular não mostrou diferença significativa nas informações dos núcleos, mas os limites das células foram melhor resolvidos no conjunto de 30 graus. Em comparação com as imagens de entrada originais, as imagens segmentadas continham erros. O software não conseguiu detectar um limite de célula ou desenhou limites de célula inexistentes.
O número de erros aumentou drasticamente as imagens infundidas obtidas a partir de imagens em intervalos angulares de 45 e 60 graus em comparação com 30 graus.
