Apoio: Esta pesquisa foi apoiada pelo National Institutes of Health (DK064862, NS058525 e AA019357 a GGF).

1. Curto prazo LMA Set Up and Procedure <ol><li> Curto prazo LMA gaiola configurar <ol><li> Teste LMA curto prazo dentro da gaiola de um rato alojados individualmente. Para facilitar a análise de imagens VTS-dependente, usar roupa de cama em alto contraste com a cor do mouse (ou seja, roupa de cama de cor escura para ratos brancos e luz de cama colorida para ratos pretos). </li><li> Durante os testes de LMA de curto prazo, cobrir gaiolas com ¼ claro em acrílico com 11 x ¼ em furos de diâmetro para suportar a ventilação adequada. </li></ol></li><li> Curto prazo sala de testes LMA <ol><li> Teste ratinhos num ambiente limpo, em que tenham sido aclimatados durante pelo menos a 24 horas 8. </li><li> Para iluminar o ambiente de teste, use chocadeira luzes braçadeira com lâmpadas vermelhas (&lt;125 lumens). Antes de videografia, ajustar o ângulo ea posição das luzes para remover o brilho ou reflexos dos topos de gaiola de acrílico. </li><li> Remover ou evitar o ruído ambienteacima de 70 dB. Use um gerador de ruído branco se o ruído de fundo intermitente é inevitável durante o teste de mouse. </li><li> Cubra a superfície de teste no qual as gaiolas são colocadas na sala de testes com o açougueiro ou laboratório de banco de papel de cor semelhante à da cama gaiola, caso o chão da gaiola é exposto durante videografia. </li></ol></li><li> Curto prazo LMA videografia <ol><li> Centro e coloque a noite câmera de vídeo com capacidade de visão do tecto com pelo menos 120 GB de memória acima da área de gravação na sala de testes. Não exceda a capacidade de resolução dos VTS usados, colocando muitas gaiolas dentro da câmera quadro de visualização de vídeo (por exemplo, Ethovision XT 7 por Noldus Tecnologia da Informação (Leesburg VA) pode rastrear simultaneamente oito camundongos em tempo real). </li></ol></li><li> Procedimento de teste LMA curto prazo <ol><li> Teste LMA curto prazo durante a fase ativa / escuro do ciclo de luz. Certifique-se o tempo em relação ao ciclo de luz é the mesmo para todos os grupos, como LMA segue um padrão crepuscular, com mais actividade durante os períodos de início e depois do ciclo de escuro 1. Incluir tanto os sujeitos experimentais e controle em cada grupo de camundongos gravadas para garantir os potenciais efeitos das diferenças temporais na LMA são minimizados. </li><li> Individualmente casas e aclimatar os ratos, pelo menos, 24 horas antes do início do teste de LMA 8. </li><li> Coloque as divisórias de gaiolas e jaulas (contendo camundongos individuais) diretamente sob a câmera. Remova todo o material de nidificação / enriquecimento das gaiolas, pois isso pode obstruir a visão do mouse (por exemplo, se o mouse tocas / cobre-se com o material do assentamento) e interferir com VTS precisão. Coloque uma tampa de acrílico claro em cada gaiola gravado. </li><li> Quando videoing várias gaiolas ao mesmo tempo, certifique-se de que a resolução é compatível com os VTS escolhidos. Para facilitar a análise VTS, posicione as gaiolas de forma idêntica em cada um divisor (ou seja, canto superior direito). </li><li> Iniciar a gravação. Comece cada vídeo com uma lousa que identifica todas as informações experimental relevante para assegurar a identificação correcta do vídeo independente de qualquer documentação não-vídeo adicional. Use um temporizador ou cronômetro para acompanhar o tempo de LMA testes (5-10 min). Se a informação de tempo é perdida, recuperá-lo a partir do registro de vídeo. </li><li> Para as medidas repetidas usando a curto prazo método LMA, permitir ratos acesso a comida e água durante os intervalos de medição não. </li><li> Durante o teste, manter todos os experimentadores fora da vista dos ratos de modo a não agir como um sinal visual externo. </li><li> Quando o teste estiver concluído, o retorno / substitua o material do assentamento / enriquecimento, para reduzir o potencial de desenvolvimento da ansiedade-como o comportamento 8. </li></ol></li><li> LMA análise de curto prazo <ol><li> Armazenar as gravações de vídeo da sessão de testes para uma mídia de arquivamento compatíveis com os VTS usados. Para Ethovision XT 7, uma unidade de disco rígido (HDD) é usado. </li><li> Reproduzir os vídeos no VTS usando seu player de mídia associada, analisando os vídeos em tempo real. Na Figura 1, as variáveis ​​de detecção eram: 2 cm / seg começa rastreamento e 1,75 cm / s rastreamento pára. </li><li> Inicialmente, escolher todo o chão da gaiola, como a região de interesse (ROI) para o rastreamento. Para as análises avançadas, tais como a avaliação de tigmotatismo, criar várias ROIs intra-gaiola. </li><li> Para os estudos de alto rendimento, analisar todas as gaiolas no vídeo simultaneamente com piso ROIs all-gaiola individual. </li><li> Usar o VTS para calcular a distância total movida (cm), a velocidade de movimento (cm / seg) e da duração do movimento (seg). Para Ethovision XT 7, exportar os dados gerados em Microsoft Excel para armazenamento e análise adicional. </li></ol></li></ol> 2. Teste LMA longo prazo Configurar e Procedimento <ol><li> LMA testes de construção de gaiola de longo prazo <ol><li> Corte um buraco de diâmetro 5,5 centímetros na parede de curto-endde uma gaiola padrão mouse. Criar uma cobertura para o buraco com ¼ de malha de aço galvanizado. Corte a malha, criando vários ½ nas aberturas para permitir o acesso do rato à alimentação. Polir qualquer malha corte para remover bordas afiadas. </li><li> Use malha adicional para criar uma tremonha externa directamente ligada à malha utilizada para cobrir a abertura de 5,5 cm. Conecte o funil para a malha usada para cobrir o buraco, e anexar a montagem da gaiola usando rebites de alumínio. </li><li> Construir uma garrafa de água a partir de um padrão de 50 ml cônico (Corning) e uma rolha de borracha 1-hole (Fisher), que é o excesso de perfuração para permitir a inserção de não-gotejamento tubo sipper (Sistemas de Sta-Pure). Fixe a garrafa de água para a gaiola com fita de velcro (3M) e inserir o tubo sipper através da abertura coberta mesh. </li><li> Durante os testes de LMA de longo prazo, cobrir gaiolas com ¼ claro em acrílico com 11 x ¼ em furos de diâmetro para suportar a ventilação adequada. </li></ol></li><li> Longo prazo sala de testes LMA<ol><li> Longo prazo sala de testes LMA criado é idêntico ao LMA curto prazo. Consulte a seção 1.2 para procedimento. </li></ol></li><li> Longo prazo LMA videografia <ol><li> Center e colocar um tecto montado no infravermelho, de estilo de segurança, a câmara directamente ligado a um PC por cima da área da gravação na sala de teste. Apenas registrar o número de gaiolas de uma vez que resulta em resolução gaiola indivíduo dentro da capacidade dos VTS utilizados (por exemplo, Ethovision XT 7 pode controlar simultaneamente oito camundongos em tempo real). </li></ol></li><li> Procedimento de teste LMA longo prazo <ol><li> Teste LMA longo prazo durante a fase ativa / escuro do ciclo de luz. Certifique-se o tempo em relação ao ciclo de luz é a mesma em todos os grupos, como LMA segue um padrão crepuscular com mais atividade durante os períodos iniciais e depois do ciclo escuro 1. Teste os dois sujeitos experimentais e controle em cada grupo de camundongos gravadas para garantir a minimização do potencialefeitos das diferenças temporais na LMA. </li><li> Individualmente casa e aclimatar os ratos nas gaiolas de teste modificados, para, pelo menos, 24 horas. </li><li> Coloque as divisórias de gaiolas e jaulas (contendo camundongos individuais) diretamente sob a câmera. Remover todo o material de assentamento / enriquecimento das gaiolas para assegurar uma vista desimpedida do do rato. Rato enterrando-se o material de assentamento irá interferir com a capacidade do VTS para controlar o rato. Colocar uma tampa de Plexiglas claro em cada uma das gaiolas a ser gravados. </li><li> Ao gravar várias gaiolas de uma vez, ter certeza que a resolução é compatível com os VTS escolhidos. Para facilitar a análise VTS, posição idêntica gaiolas dentro de cada um divisor (ou seja, canto superior direito). </li><li> LMA testes a longo prazo é geralmente analisada em tempo real, e um registro de vídeo geralmente não é criado. A gravação de vídeo pode ser gravado usando uma câmera secundária, ou através de um gravador de DVD ligado à câmera principal. Certifique-se de manter registros detalhados de indivíduorato e informações sobre o grupo. </li><li> Configure os VTS para análise em tempo real. O chão da gaiola deve abranger todo o ROI para rastreamento. Configure ROIs para todas as gaiolas a ser gravado. Usar o VTS para calcular a distância total movida (cm), a velocidade de movimento (cm / seg) e da duração do movimento (seg). Na Figura 2, as variáveis ​​de detecção eram: 2 cm / seg começa rastreamento e 1,75 cm / s rastreamento pára. </li><li> Começar a gravar rato longo prazo LMA. Monitorar a duração do ensaio de LMA de longo prazo através do relógio associado com o computador analisar. </li><li> Durante o teste, manter todos os experimentadores fora da vista dos ratos de modo a não agir como um sinal visual externo. </li><li> Quando o teste estiver concluído, o retorno / substitua o material do assentamento / enriquecimento, para reduzir o potencial de desenvolvimento da ansiedade-como o comportamento 8. </li></ol></li><li> LMA análise de longo prazo <ol><li> Análise LMA longo prazo podem ocorrer em tempo real, sem a geração de uma gravação de vídeo. Exportar os dados para Microsoft Excel para armazenamento e análise, se estiver usando Ethovision XT 7. </li><li> Para gerar um registro de vídeo para LMA longo prazo, usar uma câmera secundária. Certifique-se a câmera secundária tem ampla capacidade de armazenamento suficiente para armazenar o potencialmente longa de gravação (s). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Goulding, E. H., Schenk, A. K., Juneja, P., MacKay, A. W., Wade, J. M., Tecott, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+robust+automated+system+elucidates+mouse+home+cage+behavioral+structure.">A robust automated system elucidates mouse home cage behavioral structure.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20575-20582 (2008).</li><li>Kent, S., Bluth&#233;, R. M., Kelley, K. W., Dantzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sickness+behavior+as+a+new+target+for+drug+development.">Sickness behavior as a new target for drug development.</a> Trends Pharmacol. Sci. 13, 24-28 (1992).</li><li>Dantzer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine,+sickness+behavior,+and+depression.">Cytokine, sickness behavior, and depression.</a> Immunol. Allergy Clin. North Am. 29, 247-264 (2009).</li><li>Godbout, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exaggerated+neuroinflammation+and+sickness+behavior+in+aged+mice+following+activation+of+the+peripheral+innate+immune+system.">Exaggerated neuroinflammation and sickness behavior in aged mice following activation of the peripheral innate immune system.</a> FASEB J. 19, 1329-1331 (2005).</li><li>York, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biobehavioral+and+neuroimmune+impact+of+low-dose+ionizing+radiation.">The biobehavioral and neuroimmune impact of low-dose ionizing radiation.</a> Brain Behav. Immun. 26, 218-227 (2012).</li><li>York, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individually+ventilated+cages+cause+chronic+low-grade+hypoxia+impacting+mice+hematologically+and+behaviorally.">Individually ventilated cages cause chronic low-grade hypoxia impacting mice hematologically and behaviorally.</a> Brain Behav. Immun. 26, 951-958 (2012).</li><li>Jennings, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+rodent+husbandry:+the+mouse.+Report+of+the+Rodent+Refinement+Working+Party.">Refining rodent husbandry: the mouse. Report of the Rodent Refinement Working Party.</a> Lab. Anim. 32, 233-259 (1998).</li><li>York, J. M., Blevins, N. A., Baynard, T., Freund, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+testing+methods+in+psychoneuroimmunology.">Mouse testing methods in psychoneuroimmunology.</a> Methods in Molecular Biology. 934, 243-276 (2012).</li><li>Dantzer, R., O'Connor, J. C., Freund, G. G., Johnson, R. W., Kelley, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+inflammation+to+sickness+and+depression:+when+the+immune+system+subjugates+the+brain.">From inflammation to sickness and depression: when the immune system subjugates the brain.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9, 46-56 (2008).</li><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+phenotyping+of+rodents.">Behavioral phenotyping of rodents.</a> Comp. Med. 53, 140-146 (2003).</li><li>Karelina, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+isolation+alters+neuroinflammatory+response+to+stroke.">Social isolation alters neuroinflammatory response to stroke.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 5895-5900 (2009).</li></ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Os sintomas da doença em camundongos incluem letargia, perda de interesse em ambientes sociais e ambientais, mal-estar e anorexia 2-3. Em ratos e outros roedores, LMA pode ser utilizado para avaliar a doença após a activação imunitária 4-5. Além disso, LMA longo prazo oferece a capacidade de acompanhar o movimento ao longo de 24 horas (ou mais) período, permitindo a análise de alterações induzidas pelo tratamento no comportamento circadiano ou distúrbios nos padrões de sono / vigília....

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="586">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21">Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="276">
			<td height="276">Video camera</td>
			<td>Sony</td>
			<td>HDR-XR500V</td>
			<td>Other, similar video cameras may work as well. The file storage format (codec/container) must be compatible with the VTS used. It is recommended when initially establishing a VTS to choose the VTS first and work with the vendor in choosing an appropriate camera, especially with respects to file format and video resolution compatibility.</td>
		</tr>
		<tr height="331">
			<td height="331">Opaque cage dividers</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Custom fabricated based on specific cage dimensions. To facilitate image analysis, dividers should be of a similar color to the cage bedding. Structurally fixed dividers are preferrable because they speed setup between multi-mice experiments, such as those involving repeated measurements. Sturdy transportable cage dividers can be constructed of 1/2 inch opaque plastic and joined via a series of cross laps.</td>
		</tr>
		<tr height="74">
			<td height="74">Light or Dark bedding (opposite of mouse coat color)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Available from several laboratory animal supply distributors, depending on location.</td>
		</tr>
		<tr height="37">
			<td height="37">Clear Plexiglas cage tops</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Custom fabricated based on cage dimensions.</td>
		</tr>
		<tr height="92">
			<td height="92">Automated video tracking software (EthoVision XT 7)</td>
			<td>Noldus Information Technology</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>A variety of VTS manufacturers exist, use of other software may suffice.</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55">PC</td>
			<td>Dell Inc.</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>See VTS software providers minimum PC .requirements</td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83">White noise generator</td>
			<td>Dohm</td>
			<td>DS</td>
			<td>A variety of white noise generators are available, depending on need.</td>
		</tr>
		<tr height="146">
			<td height="146">Brooder clamp lights with red light bulbs</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Several sizes and styles available. Number required depends on room size/lighting needs. Do not exceed 125 lumens in the testing room.</td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62">Lab bench or butcher paper</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Paper should match or be very similar in color to the cage bedding.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse short- and long-term locomotor activity analyzed by video tracking software

Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em ratos e outros roedores. Melhorias no software de monitoramento de vídeo (VTS) ter permitido que ele seja acoplado a LMA testes, melhorando drasticamente a sensibilidade e especificidade quando comparado com o método de cruzamentos de linha com a pontuação manual. Além disso, o VTS permite a experimentação de alto rendimento. Embora semelhante ao controle de vídeo automatizado usado para o teste de campo aberto (OFT), LMA teste é o único que permite a ratos para permanecer em sua gaiola e não utiliza o estímulo ansiogênico de iluminação brilhante durante a fase ativa do claro-escuro ciclo. Tradicionalmente, o LMA tem sido usada durante curtos períodos de tempo (minutos), enquanto os estudos de circulação mais longos (HRS-dia), muitas vezes têm utilizado transmissores e biotelemetria implantado. Com a opção de rastreamento em tempo real, de longo, como testes de LMA de curto prazo, podem agora ser realizados utilizando videografia. LMA testes a longo prazo requer um especialista, Mas facilmente construído, de modo que a gaiola de comida e água (o que é normalmente posicionado na parte superior da gaiola) não obstrua videografia. Importante, videografia e VTS permite a quantificação de parâmetros, como caminho de movimento de mouse, que são difíceis ou inviáveis ​​para medir com a linha de cruzamento e / ou biotelemetria. Em resumo, o teste LMA acoplado a VTS proporciona uma descrição mais completa do movimento do rato e a capacidade de examinar locomoção ao longo de um período de tempo prolongado.

Um exemplo dos resultados de uma série de medidas repetidas, teste de LMA de curto prazo é mostrado na Figura 1. Esta figura mostra que, após administração de lipopolissacarídeo (LPS), ratos alojados em enjaular ventilado individualmente (IVC) recuperar a atividade locomotora de curto prazo mais rápido do que os ratos alojados em ambiente ambiente prendendo (AEC) 6. Enquanto a perda inicial de actividade locomotora é semelhante entre os grupos injectados com LPS, a recuperação de ba...

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Mouse Short- and Long-term Locomotor Activity Analyzed by Video Tracking Software

Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em camundongos. O acoplamento do software de rastreamento de vídeo (VTS) e LMA permite a melhoria da especificidade e sensibilidade, especialmente quando comparado com o manual, o método de análise cruzando a linha de LMA. Além disso VTS permite o acompanhamento a longo prazo de rato LMA.

Rato de curto e longo prazo da atividade locomotora analisados ​​pelo software Rastreamento Vídeo

Locomotor  activity (LMA) is a simple and easily performed measurement of behavior in mice  and other rodents. Improvements in video tracking software ...

mouse-short-long-term-locomotor-activity-analyzed-video-tracking

Research

JoVE Journal

Behavior

20.0K visualizações.  University of Illinois at Urbana-Champaign. Atividade locomotora (LMA) é uma medida simples e de fácil execução de comportamento em camundongos. O acoplamento do software de rastreamento de vídeo (VTS) e LMA permite a melhoria da especificidade e sensibilidade, especialmente quando comparado com o manual, o método de análise cruzando a linha de LMA. Além disso VTS permite o acompanhamento a longo prazo de rato LMA.

Rato de curto e longo prazo da atividade locomotora analisados ​​pelo software Rastreamento Vídeo

Rato de curto e longo prazo da atividade locomotora analisados pelo software Rastreamento Vídeo