The present study was supported by grants from Kidney Research UK (ST4/2011), the Cunningham Trust (CT11/14) and the Mrs EA Hogg's Charitable Trust.

NOTA:. Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos impostos pelos Animais (Scientific Procedures) Act 1986 procedimentos foram realizados utilizando (autoclavados) instrumentos e consumíveis cirúrgicos estéreis. Embora o modelo de murino de IRI renal apresentado aqui foi realizada num macho de 8 semanas de idade Balb / c do rato pode ser executada de forma reprodutível em uma variedade de estirpes de murinos de ambos os sexos com idades compreendidas tipicamente entre 7-15 semanas, com a idade ser óptima 8 semanas. Os dados apresentados na seção de resultados representante foi obtido de ambos Balb / c e camundongos FVB. A aplicação de uma solução salina aquecida é usada para manter os intestinos e área cirúrgica húmido mas deve ser cuidadosamente controlada e mantida a um mínimo, como uma aplicação excessiva de fluidos pode levar a um artefacto abaixamento do soro ou plasma, os níveis de creatinina, o que é um importante leitura experimental. 1. Preparação Animal e Laparotomia &lt;ol&gt; <li> Anestesiar o rato com cloridrato de cetamina (70 mg / kg) e cloridrato de medetomidina (1 mg / kg) por via intraperitoneal e confirmar a profundidade da anestesia, pela perda de reflexos por exemplo, aperto do dedo do pé. A duração do plano anestésico resultante é de 4 horas. Isto é suficiente para realizar todo o procedimento cirúrgico e sem anestesia suplementar se necessário. </li><li> Remova o cabelo em torno da área de incisão, garantir que a área está livre de cabelos soltos, e higienizar a pele abdominal utilizando uma solução diluída de clorexidina. </li><li> Posicione o mouse sobre um bloco cirúrgico aquecido em decúbito dorsal e corrigir os membros superiores e inferiores para a plataforma usando fita adesiva de baixa aderência. Certifique-se de que as extremidades superiores sejam mantidas na sua posição normal para evitar a compressão do pulmão. Durante todo o processo monitorar o mouse para queimaduras térmicas. Se possível, é recomendado que uma fonte de calor não-eléctrico ser utilizado. </li><li> Administrar o cloridrato de analgésico de buprenorfina (0,06 mg / kg)subcutânea e aplicar lubrificante ocular para os olhos para evitar o ressecamento da córnea. Analgésicos são administrados no pré-operatório, a fim de auxiliar a recuperação pós-cirúrgica. </li><li> Usando tecido separando tesoura ou lâmina de bisturi fazer uma incisão na linha laparotomia e sem rodeios separar a pele do peritônio. Isto permite que a pele e do peritoneu para ser suturada separadamente durante o fechamento da ferida. Uma incisão da alba avascular linea é feito dando acesso à cavidade peritoneal. </li><li> Para criar uma visão clara da área cirúrgica inserir um afastador e armar o mouse. </li></ol> 2. Divisão Ureter e nefrectomia direita <ol><li> Com cuidado, empurre o intestino para o lado esquerdo da cavidade abdominal usando cotonetes esterilizados autoclavados umedecidas com soro fisiológico para expor o rim e do ureter direito. Cubra os intestinos com cortinas umedecido para evitar a secagem. </li><li> Levante o ureter direito com uma pinça em ângulo. Ligadura do ureter direito duas vezes, utilizando 6/0 silsutura k-trançado. Para os experimentos de longo prazo, utilizar suturas absorvíveis para todas as cirurgias abdominais. </li><li> Dividir o ureter entre as suturas. Embora a junção vesico-ureteral deve evitar que a urina escorra para o peritoneu da bexiga do ureter é ligado como uma salvaguarda contra qualquer fuga no pós-operatório durante as experiências de longo prazo. </li><li> Para permitir o acesso mais fácil ao realizar a nefrectomia direita, empurre o fígado para cima e para a direita com um cotonete umedecido e mantenha no lugar usando gaze umedecida para expor a artéria renal direita e veia. </li><li> Bluntly dissecar o tecido conectivo e a gordura ao longo do aspecto medial do rim direito quanto à artéria renal direita, e a veia. </li><li> Criar um canal de debaixo da artéria e veia renal cuidadosamente a pinça deslizante angulares por baixo dos vasos sanguíneos. Orientar a pinça por baixo com as pontas fechadas e remover suavemente com as pontas abertas, a fim de facilitar a formação do canal.</li><li> Repetir o passo 2.6 até que as pontas das pinças são visíveis através dos tecidos conjuntivos, logo acima da artéria e veia renal. Uma vez visível esfregar suavemente as pontas das pinças contra as pontas de um outro conjunto de pinças anguladas para quebrar delicadamente o tecido conjuntivo. </li><li> Com a artéria e veia renal claramente acessível eles agora podem ser ocluído. Deslize cuidadosamente uma pinça em ângulo abaixo da artéria renal e veia com as pontas fechadas. Uma vez no local abrir as pontas das pinças e orientar o aplicador clipe hemostático entre as pontas e firmemente aplicar um clipe hemostático na artéria e veia renal próxima ao rim. Em alternativa, a artéria e veia renais podem ser ligados utilizando 6/0 de seda trançada sutura. </li><li> Dividir a oclusão da artéria renal e veia perto do rim, o qual pode agora ser removido de qualquer tecido conjuntivo aderente remanescente. </li><li> Remova qualquer gaze usada para manter o fígado e os intestinos substituir com cotonetes. </li></ol><ol><li> Com cuidado, empurre o intestino para o lado direito da cavidade abdominal com cotonetes para expor o rim esquerdo e do ureter e cubra com cortinas umedecidos. Se necessário, os pâncreas pode ser desviado com gaze umedecida para permitir o acesso mais fácil. </li><li> Use dissecção romba para quebrar delicadamente os tecidos conjuntivos anterior e posterior à artéria renal esquerda e veia, e, em seguida, criar um canal sob os vasos de forma semelhante ao descrito no Ureter Divisão e nefrectomia direita passo 2.4. </li><li> Induzir isquémia do rim esquerdo, aplicando um clipe serrafine micro na artéria e veia renal. Isquémia bem sucedida pode ser confirmada visualmente por um escurecimento uniforme gradual do rim. Os vasos sanguíneos para além da artéria renal esquerda e a veia pode, ocasionalmente, fornecer o rim. Se estiver presente, também vai precisar destes vasos sanguíneos adicionais a serem fechados com grampos serrafine micro a fim de sucessoinduzir isquemia de todo o rim. </li><li> Substitua os intestinos e cuidadosamente garantir que não haja torções bruscas que podem levar à isquemia intestinal resultados comprometedores. Temporariamente fechar o peritônio com uma única sutura. </li><li> Após a indução de isquemia colocar imediatamente o rato sobre um cobertor homeotérmicos, com um termistor rectal ligado a uma unidade de controlo que vai manter a temperatura do corpo a 37 ° C durante a duração do período de isquémia. Para definir o comprimento apropriado da isquemia necessária para induzir o desejado grau de lesão renal e insuficiência renal, recomenda-se que uma titulação de ser executada para cada estirpe e operador cirúrgico. </li><li> Pouco antes do final do período de isquemia reabrir o peritoneu e posicionar cuidadosamente o intestino para permitir o acesso ao grampo e visualizar o rim. A inserção do afastador, como mostrado no vídeo, não é necessário e foi apenas realizada para fins de apresentação. </li><li> Retire o clamp após o período de isquemia concluiu. Imediatamente após a remoção do rim vai rapidamente mudar de cor de um marrom escuro para um rosa escuro saudável indicando reperfusão bem sucedida. </li><li> Novamente assegurar que os intestinos não são torcidos antes do fechamento do peritoneu com um ponto cobertor com 6/0 sutura de seda trançada. Em seguida, feche a pele usando clipes de pele metálicos. </li><li> Para minimizar o risco de infecção pós-operatória, aplicam-se um anti-séptico tal como uma solução de iodo / álcool para a área cirúrgica. </li></ol> 4. Pós-operatório de Recuperação e Cuidados <ol><li> Anestesia parcialmente inversa com cloridrato de atipamezol (2 mg / kg) por via subcutânea e administrar fluidos com uma injecção subcutânea de 1 mL de soro fisiológico aquecido para evitar a desidratação após a cirurgia. </li><li> Acompanhar atentamente os ratos até que tenham recuperado a consciência, parece alerta e são capazes de endireitar-se. </li><li> Permitir ratinhos para recuperar numa caixa aquecida mantida a 29 ° C, locciado em um ambiente tranquilo, por 24 horas. Ratos terá uma capacidade diminuída para regulação térmica devido à anestesia e, por conseguinte, é essencial que eles estão alojados a uma temperatura elevada para permitir a recuperação eficaz. Alimento humedecido também pode ser fornecida para estimular a ingestão de fluidos e da nutrição. </li><li> Para os experimentos de recuperação a longo prazo fornecer analgésicos em curso e retirar grampos de pele 7 dias após a cirurgia. </li></ol> 5. Avaliação Funcional e Estrutural lesão renal e Regeneração <ol><li> O sangue pode ser recolhido a partir da veia da cauda durante as experiências ou por punção cardíaca na hora da eutanásia no final da experiência. Medir a função renal pela creatinina sérica, usando um método baseado creatinase e uréia (BUN) em um analisador bioquímico centrífuga como descrito anteriormente 7. A função renal de ratos normais e saudáveis ​​precisa ser determinado antes de estabelecer um modelo de insuficiência renal, pois isso pode variar acentuadamente depending no método de análise utilizado, por exemplo a reacção de Jaffe e métodos creatinase base para a medição da creatinina dar resultados diferentes. </li><li> Examine estrutura renal por histopatologia em parafina cortes de tecido do rim corados com hematoxilina e eosina (H &amp; E) ou ácido periódico Schiff (PAS). Capturar entre 5 - 10 imagens em 200x de ampliação dentro da faixa externa da medula externa (OSOM) para cada rato. Avaliar o nível de lesão no OSOM como esta região é ferido neste modelo porque é altamente vulnerável à hipóxia. </li><li> Use qualquer um dos dois sistemas de pontuação detalhadas abaixo para medir necrose aguda tubular (RTA) ou regeneração. Morfologia representativa das classificações utilizadas nestes sistemas é ilustrada na Figura 1. </li><li> Use um sistema binário simples para marcar ATN. Com base na integridade celular e marca morfologia e contar túbulos tanto como viável (a morfologia das células intactas) ou necrose (inte célula comprometidagrity, morfologia celular anormal, ou perda de células). <ol><li> Exprime-se o número de túbulos necróticas como uma percentagem do número total de túbulos (necrótica túbulos%). </li></ol></li><li> Classificar regeneração utilizando outro sistema com base na integridade celular, a morfologia e o número de núcleos. Mark e contam túbulos tão saudável, necrótica, feridos ou em recuperação de acordo com os critérios indicados nas etapas seguintes. <ol><li> Tal como acontece com o sistema de pontuação ATN (detalhado no passo 5.4) túbulos marca com células normais saudáveis ​​intactas como túbulos enquanto mostrando a integridade das células comprometidas, morfologia celular anormal ou perda celular evidente devem ser marcados como necrótica. </li><li> Classifique túbulos como feridos se eles têm um citoplasma diluído contendo alguns núcleos. Em contraste, designar túbulos contendo mais núcleos com mais morfologia celular normal, tal como a recuperação. </li><li> Expresse cada classificação túbulo como uma porcentagem do número total de túbulos. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Kinsey, G. R., Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+in+acute+kidney+injury.">Inflammation in acute kidney injury.</a> Nephron Exp Nephrol. 109, (2008).</li><li>Wei, Q., Dong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+ischemic+acute+kidney+injury:+technical+notes+and+tricks.">Mouse model of ischemic acute kidney injury: technical notes and tricks.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 303, (2012).</li><li>Ferenbach, D. A., Kluth, D. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage/monocyte+depletion+by+clodronate,+but+not+diphtheria+toxin,+improves+renal+ischemia/reperfusion+injury+in+mice.">Macrophage/monocyte depletion by clodronate, but not diphtheria toxin, improves renal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Kidney Int. 82, 928-933 (2012).</li><li>Ferenbach, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+expressing+heme+oxygenase-1+improve+renal+function+in+ischemia/reperfusion+injury.">Macrophages expressing heme oxygenase-1 improve renal function in ischemia/reperfusion injury.</a> Mol Ther. 18, 1706-1713 (2010).</li><li>Keppler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+creatinine+determination+in+mice+and+rats:+an+enzymatic+method+compares+favorably+with+a+high-performance+liquid+chromatography+assay.">Plasma creatinine determination in mice and rats: an enzymatic method compares favorably with a high-performance liquid chromatography assay.</a> Kidney Int. 71, 74-78 (2007).</li><li>Vinuesa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+involvement+in+the+kidney+repair+phase+after+ischaemia/reperfusion+injury.">Macrophage involvement in the kidney repair phase after ischaemia/reperfusion injury.</a> J Pathol. 214, 104-113 (2008).</li><li>Friedewald, J. J., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+cells+in+ischemic+acute+renal+failure.">Inflammatory cells in ischemic acute renal failure.</a> Kidney Int. 66, 486-491 (2004).</li><li>Gandolfo, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3++regulatory+T+cells+participate+in+repair+of+ischemic+acute+kidney+injury.">Foxp3+ regulatory T cells participate in repair of ischemic acute kidney injury.</a> Kidney Int. 76, 717-729 (2009).</li><li>Burne, M. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+suppress+innate+immunity+in+kidney+ischemia-reperfusion+injury.">Regulatory T cells suppress innate immunity in kidney ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 1744-1753 (2009).</li><li>Li, L., Okusa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages,+dendritic+cells,+and+kidney+ischemia-reperfusion+injury.">Macrophages, dendritic cells, and kidney ischemia-reperfusion injury.</a> Semin Nephrol. 30, 268-277 (2010).</li><li>Lin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+Wnt7b+is+critical+for+kidney+repair+and+regeneration.">Macrophage Wnt7b is critical for kidney repair and regeneration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 4194-4199 (2010).</li><li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair.">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22, 317-326 (2011).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+ameliorates+renal+ischemia-reperfusion+injury.">Dexamethasone ameliorates renal ischemia-reperfusion injury.</a> J Am Soc Nephrol. 20, 2412-2425 (2009).</li><li>Sharples, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythropoietin+protects+the+kidney+against+the+injury+and+dysfunction+caused+by+ischemia-reperfusion.">Erythropoietin protects the kidney against the injury and dysfunction caused by ischemia-reperfusion.</a> J Am Soc Nephrol. 15, 2115-2124 (2004).</li><li>Gueler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statins+attenuate+ischemia-reperfusion+injury+by+inducing+heme+oxygenase-1+in+infiltrating+macrophages.">Statins attenuate ischemia-reperfusion injury by inducing heme oxygenase-1 in infiltrating macrophages.</a> Am J Pathol. 170, 1192-1199 (2007).</li><li>Delbridge, M. S., Shrestha, B. M., Raftery, A. T., ElNahas, A. M., Haylor, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+temperature+in+a+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury.">The effect of body temperature in a rat model of renal ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Proc. 39, 2983-2985 (2007).</li></ol>

The authors have no competing or conflicting interests to disclose.

Renal IRI é uma importante causa de LRA sem tratamento específico disponível. O estudo experimental de IRI renal tem sido altamente informativos com trabalhos anteriores demonstrando o papel de macrófagos, células dendríticas, linfócitos T, células-regulação, assim como outras células e mediadores na indução de tanto a lesão aguda e da fase de cicatrização de 5,8 - 16. Além disso, o IRI renal experimental foi usado para avaliar o efeito de vários agentes terapêuticos 4,17-19. </p...

Isquemia lesão de reperfusão (IRI) é um modo comum de lesão de múltiplos órgãos, incluindo o rim, coração e cérebro. Renal IRI pode levar à lesão renal aguda (LRA) em pacientes e nenhum tratamento específico está disponível. AKI como resultado da IRI tem uma patogênese complicada que envolve tanto a resposta imune inata e adaptativa 1. Um modelo experimental de IRI renal oferece o potencial para dissecar as células-chave e mediadores envolvidos na patogênese da IRA, bem como a regeneração renal subseqüente que segue ao longo de dias subseqüentes. Além disso, os efeitos dos agentes terapêuticos sobre os processos de doença podem ser avaliadas. O objetivo geral do modelo experimental de IRI renal descrito aqui é induzir tanto lesão renal funcional e estrutural aguda. Alguns investigadores utilizaram um modelo que envolve a indução de IRI bilaterais 2. Embora o modelo IRI renal bilateral é de uso, o ren unilateralmodelo al IRI tem a vantagem de uma nefrectomia direita a ser realizado no momento da cirurgia. O tecido nefrectomia direita serve como tecido de controlo valiosa em estudos envolvendo uma etapa de pré-tratamento que tanto induz ou reprime a expressão de um gene ou proteína. Por exemplo, temos usado este modelo para avaliar os efeitos pré-condicionamento do heme arginato (ha) de injeção de 24 horas antes da IRI renal 3. A indução bem sucedida do citoprotector enzima heme-oxigenase-1 (HO-1) por HA antes IRI foi confirmada no tecido controlo nefrectomia direita 4. HA reduzido IRI renal em camundongos idosos, em parte, através de um HO-1 mecanismo dependente. Da mesma forma, temos utilizado o modelo em estudos de depleção de macrófagos para examinar o papel dos macrófagos em IRI renal 5. A análise imunohistoquímica do tecido nefrectomia direita pode ser usado para confirmar a eficácia do método de ablação. O tecido nefrectomia direita pode, portanto, ser utilizada tanto para confirmar e quantificar o nível de induction ou inibição da molécula de interesse de cada animal experimental individual. Este modelo será de interesse para os pesquisadores que estão usando drogas ou outros compostos para modular a expressão de genes ou proteínas, etc, antes da indução da IRI renal. Outros estudos usaram incisões flanco para acessar os rins. O modelo descrito aqui utiliza uma única cirurgia na linha média abdominal para executar tanto a nefrectomia direita e induzir isquemia reperfusão do rim esquerdo. Esta abordagem cirúrgica oferece excelente visualização do campo cirúrgico, incluindo os pedículos renais e alterações de cor que seguem renal fixação do pedículo. A nossa experiência com o modelo publicado 4-6 indica que os ratos se recuperar rapidamente da cirurgia com uma taxa de sobrevivência de perto de 100%. Por fim, a análise da cinética do modelo ao longo de um período de 7 dias, indicam que este modelo exibe restauração de tanto a função renal e integridade tubular, comproliferação de células epiteliais tubulares significativa.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="676">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Tissue scissors</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>14072 - 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro-Adson forceps (Rat toothed)</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;">11019 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">S&#38;T JFA-5bTC Forceps - SuperGrip Angled</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>00649-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Colibri retractor</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>17000 - 04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro clip applicator</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Micro serrafines&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Olsen-Hegar needle holder</td>
			<td style="width:125px;">Fine Science Tools</td>
			<td>12002 - 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Hemoclip Plus Ligating Clips Small</td>
			<td style="width:125px;">Weck</td>
			<td style="width:119px;">533837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Autoclip Wound Clip System, 9mm</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">PY2 52-3748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Silk Black Braided Suture, Size 6-0</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">723288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Standard Heat Matt</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:265px;">Homeothermic Blanket &#38; Control Unit</td>
			<td style="width:125px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Lacri-Lube</td>
			<td style="width:125px;">Allergan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:265px;">Vetasept Chlorhexidine&#160;&#160;</td>
			<td style="width:125px;">AnimalCare</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vetalar : Ketamine hydrochloride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>100mg/ml solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Domitor : medetomidine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;">Vetergesic : Buprenorphine hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Antisedan : Atipamezole hydrochoride</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>5mg/ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration

Renal lesão de isquemia e reperfusão (IRI) é uma causa comum de lesão renal aguda (IRA) em pacientes com oclusão do fluxo sanguíneo renal é inevitável durante o transplante renal. Modelos experimentais de que precisa e reproduzível recapitulam IRI renal são cruciais em dissecar a fisiopatologia da LRA e do desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Apresentado aqui é um modelo do rato do IRI renal que resulta em reprodutível AKI. Isto é conseguido por uma abordagem laparotomia mediana para a cirurgia com uma incisão que permite tanto uma nefrectomia direita que fornece tecido controlo e de aperto do pedículo renal esquerda para induzir isquémia do rim esquerdo. Por cuidadosa monitorização da posição de aperto e a temperatura do corpo durante o período de isquémia este modelo consegue lesão funcional e estrutural reprodutível. Os ratinhos sacrificados 24 horas após a cirurgia demonstrar a perda da função renal com a elevação do nível de creatinina no soro ou no plasma, bem como estruturasdanos nos rins tural com necrose tubular aguda evidente. A função renal melhora e a lesão tecidual aguda resolvida no decurso de 7 dias após o IRI renais tais que este modelo pode ser usado para estudar a regeneração renal. Este modelo de IRI renal tem sido utilizada para estudar a fisiopatologia molecular e celular do AKI, bem como a análise da regeneração renal subseqüente.

Lesão tubular e recuperação pode ser avaliada por H &amp; E ou coloração PAS de cortes de tecido seguintes IRI renal. Túbulos localizados dentro do OSOM são classificados como saudável, feridas, necrose ou a recuperação de acordo com a morfologia da célula, a integridade e o número de núcleos (Figura 1). A lesão funcional e estrutural neste modelo é dependente da duração da isquemia. Um aumento progressivo da gravidade da disfunção renal, avaliada pela concentração plasmática de cr...

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Renal Ischaemia Reperfusion Injury: A Mouse Model of Injury and Regeneration

The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

Renal Isquemia Reperfusão: um modelo do rato de lesão e regeneração

Renal ischaemia reperfusion injury (IRI) is a common cause of acute kidney injury (AKI) in patients and occlusion of renal blood flow is unavoidable ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

49.3K visualizações.  University of Edinburgh. The mouse model of renal ischaemia reperfusion injury described here comprises of a right nephrectomy that provides control tissue and clamping of the left renal pedicle to induce ischaemia that results in acute kidney injury. This model uses a midline laparotomy approach with all steps performed via one incision.

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Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused by whole-body hypoperfusion.5,6 Successful reproduction of whole-body hypoperfusion in rodent models has been fraught with 
difficulty.7-9,9,10 Models which employ focal ischemia have repeatedly demonstrated results which do not translate to the clinical setting, and larger 
animal models which allow for whole body hypoperfusion lack access to the full toolset of genetic manipulation possible in the mouse.11,12 However, in recent 
years a mouse model of cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation has emerged which can be adapted to model AKI.13 This model reliably reproduces 
physiologic, functional, anatomic, and histologic outcomes seen in clinical AKI, is rapidly repeatable, and offers all of the significant advantages of a murine surgical 
model, including access to genetic manipulative techniques, low cost relative to large animals, and ease of use. Our group has developed extensive experience 
with use of this model to assess a number of organ-specific outcomes in AKI.14,15

A powerful model for perioperative and critical care related acute kidney injury is presented. Using whole body hypoperfusion induced by cardiac arrest it is possible to nearly replicate the histologic and functional changes of clinical AKI.

Cardiac Arrest normotérmica e Ressuscitação Cardiopulmonar: um modelo do rato de isquemia-reperfusão

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Medicina

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Isquemia-reperfusão modelo de lesão renal aguda e Pós Lesão fibrose em camundongos

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

A Neonatal do rato Spinal Cord Injury Compression Modelo

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modelo murino de isquemia-reperfusão

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

A Mouse Model of Single and Repetitive Mild Traumatic Brain Injury

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal neurological deficits and even amnesia. Athletes participating in contact sports are at high risk of exposure to large number of mTBIs. In terms of the level of injury in a sporting athlete, a mTBI is defined as a mild injury that does not cause gross pathological changes, but does cause short-term neurological deficits that are spontaneously resolved. Despite previous attempts to model mTBI in mice and rats, many have reported gross adverse effects including skull fractures, intracerebral bleeding, axonal injury and neuronal cell death. Herein, we describe our highly reproducible animal model of mTBI that reproduces clinically relevant symptoms. This model uses a custom made pneumatic impactor device to deliver a closed-head trauma. This impact is made under precise velocity and deformation parameters, creating a reliable and reproducible model to examine the mechanisms that contribute to effects of single or repetitive concussive mTBI.

Athletes absorb several hundred mild traumatic brain injuries (mTBI)/concussions every year; however, the consequence of these on the brain is poorly understood. Therefore, an animal model of single and repetitive mTBI that consistently replicates clinically relevant symptoms provides the means to advance the study of mTBI and concussion.

Um modelo de mouse de lesões cerebrais traumáticas leves simples e repetitivas

Mild Traumatic Brain Injury (mTBI) can result in the acute loss of brain function, including a period of confusion, a loss of consciousness (LOC), focal ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Avaliação da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em ratos

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Um modelo pré-clínico do rato para o estudo da lesão da Isquemia-reperfusion na microcirurgia reconstrutiva

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Entrega intramiocárdica atrasada de células-tronco após lesão de reperfusão de Isquemia em um modelo murino

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

Modelo de Lesão de Isquemia/Reperfusão de Pulmão de Rato em Transplante de Pulmão de Rato: Otimizações para Melhorar os Resultados

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...