This work was supported by a Howard Hughes Medical Institute Education Grant and an internal grant from the Saint Joseph's University chapter of Sigma Xi. We would also like to thank the three anonymous reviewers who helped strengthen the protocol and interpretations.

Os seguintes metodologias para a habitação, cuidados, e estudo do peixe-zebra foram aprovados pela Universidade IACUC do Saint Joseph. 1. Zebrafish alojamento e cuidados <ol><li> Obter o peixe-zebra assunto a partir de um fornecedor local, ou a partir de populações selvagens capturados. Por favor, note que a habitação o peixe-zebra está sujeito às diretrizes IACUC e autorizações adicionais são necessários para as populações selvagens capturados habitacionais. </li><li> Identificar e peixe-zebra em separado de acordo com o sexo. Como alternativa, ignore este passo ou substituir com um método diferente de separação com base na hipótese do estudo. NOTA: características sexuais são difíceis de determinar no peixe-zebra, especialmente nas fêmeas. Referem-se a estas diretrizes 10 ou manuais on-line úteis para distinguir o sexo. </li><li> Aleatoriamente separar as populações mais para dentro da proporção apropriada de peixe peixes focal ao estímulo. Nota: peixes Focal são os assuntos de teste seguido através da série de behavioensaios de RAL, e peixes de estímulo são as pessoas que irão ocupar as câmaras de estímulo nos ensaios agressão e empolamento. NOTA: Tradicionalmente, entre 1 e 5 estímulo peixe peixes por focal em ensaios de empolamento e uma mistura 1: estímulo proporção de 1: peixes focal em ensaios de agressão 14,17 são usados. No entanto, o pesquisador precisa projetar especificamente o estudo com a hipótese em mente (ou seja, deve estímulo peixes ser mantida constante para manter a consistência no comportamento dos peixes focal, ou deveria estímulo peixes ser rodado entre cada ensaio para assegurar a randomização adequada). </li><li> Armazenar todos os peixes nas prateleiras habitação peixe-zebra (27,5-28,5 ° C) sob uma 00:12 ciclo de luz / escuridão rigorosa. Alimentar todos os alimentos focal e estímulo peixes floco diária e semanal camarão de água salgada, em dias não-investigação. </li><li> Certifique-se de que todos os testes é feito entre ZT1 e ZT5 (hora zeitgeber) para evitar os efeitos do ritmo circadiano 26. </li></ol> 2. A randomização e tanque de Setup <ol><li> Randomize todos os indivíduos a priori a uma sequência específica de ensaios comportamentais. Configurar um esquema de randomização consistente usando um gerador de seqüência aleatória on-line 27 ou um gerador de seqüência aleatória de um pacote de software estatístico (R). <ol><li> Rotular cada ensaio 1-3 e manter essa atribuição consistente. Atribuir uma sequência aleatória para cada indivíduo e mapear a sequência de acordo com a etiqueta de ensaio comportamental. Por exemplo, para três ensaios totais (1 mapeados para shoaling, 2 mapeado para a ousadia, e 3 mapeados para Agressão), um determinado indivíduo pode ter uma sequência aleatória de &#39;2,3,1&#39;, que vai obrigá-los a realizar o específico ensaios comportamentais na seqüência especificada. </li></ol></li><li> Configurar os tanques de ensaio (ousadia, agressão e empolamento) no laboratório em lugares que minimizam a possibilidade de estímulos externos adversos e certifique-se de ter espaço suficiente para uma câmara de vídeo para capturar todo o tanque. Certifique-se de que a câmara de vídeo enough clareza para ver etiquetas tanque, bem como ser capaz de distinguir comportamentos sutis do peixe focal e configuração da câmara de vídeo nesta posição. </li><li> Grave todos os ensaios comportamentais com a câmera mantida na mesma posição com uma vista completa do tanque especificado para minimizar as diferenças inesperadas na pontuação comportamental, como resultado de gravações diferenciais. NOTA: Evite colocar tanques nas áreas de tráfico pesadas e por portas como o movimento e som irá afetar o comportamento do peixe-zebra. </li><li> Estabelecer protocolos jWatcher únicas 24 por conseguir cada ensaio comportamental. Consulte o manual jWatcher para aprender como criar arquivos mestres focais para atribuir comportamentos a teclas e ficheiros de análise focais para resumir dados coletados. NOTA: jWatcher é software de pontuação comportamental que permite a pontuação comportamental, confiável e repetível personalizado 24. </li><li> Definir um sistema de rotulagem para rastrear a data, número de peixes, e número de ensaio para todos os ensaios comportamentais (por exemplo,&#39;F5-B-123115&#39; implicando Peixe 5, ensaio Ousadia, no dia 31 de dezembro de 2015) e rotular o exterior do tanque com fita em vista e no foco da câmera. Manter e gravar essas informações em um caderno de anotações para referência rápida e controle de qualidade futuro. </li><li> Defina-se um tanque de aclimatação que vai ser utilizada entre todos os ensaios, bem como imediatamente após os indivíduos são retirados da carcaça cremalheira. NOTA: Os tanques de aclimatação e tanques do terminal estão aquários pequenos (40 cm x 20 cm x 25 cm) com cascalho e um filtro que se assemelham a cremalheira habitação. </li><li> Após os ensaios estão todos concluídos, transferir o indivíduo para um tanque de um terminal separado, que servirá como o tanque de destino final para todos os indivíduos focais usados. Use um tanque que é grande o suficiente para abrigar um grupo de indivíduos para o resto de suas vidas (por exemplo, 25 litros). NOTA: É muito importante para manter as temperaturas e condições consistentes e similares água across todos os tanques. Isso inclui habitação, aclimatação, e todos os tanques de teste. </li></ol> 3. Realização do Ensaio Agressão <ol><li> Realizar o ensaio de agressão em um 19 L tanque retangular medindo 30 cm x 15 cm x 10 cm. Equipar o tanque em partições opacas exterior adjacente de três lados do tanque de agressão, deixando exposta a frente para visualização, para reduzir a estímulos exteriores indesejáveis. Divida o tanque com marcações externas em quatro quadrantes iguais retangulares e fixar um espelho permanentemente (com calafetar silicone) no quadrante inferior esquerdo, inclinado a 22,5 ° formando um triângulo direito contra o lado esquerdo do tanque. </li><li> Certifique-se de que a temperatura da água no tanque de depósito de aclimatação e agressão está dentro de 2 ° C da cremalheira habitação. Para fazer isso, ter água fresca e em idade pré-aquecido a 27,5-28,5 ° C pronto para adicionar ao tanque de agressão. Por favor, note que é importante para mudar a água entre cada ensaio para eliminar injustificadapistas olfactivas. </li><li> Transferir, por escavação, um peixe focal da cremalheira carcaça para um tanque de aclimatação separada onde ele vai aclimatar durante 10 min. NOTA: É importante para reduzir estímulos introduzidos para o peixe através do manuseio inadequado. Indivíduos de transferência como descrito anteriormente 27. <ol><li> Especificamente, manualmente e com cuidado colocar um copo de plástico pequena, transparente para o tanque de interesse. Sem interromper o peixe, tanto quanto a transferência usando uma rede, lentamente recolher o peixe no copo. </li></ol></li><li> Certifique-se de que a câmara de vídeo está pronta para gravar, confirmando que o tanque de ensaio de agressão (veja o passo 3.1) está em foco e imediatamente antes de transferir o indivíduo para o tanque de agressão, pressione registro no dispositivo. Transfira o peixe focal através de escavação a partir do tanque para o tanque de aclimatação agressão. NOTA: É importante registrar antes de o pescado que entra no tanque agressão para controlar o tempo exato de entrada. </li><li> Grave a aggrESSÃO tanque durante 10 min e 30 seg e em seguida, o copo de peixe focal do tanque de agressão de volta para o tanque de aclimatação. </li><li> Ao assistir a gravação, espere 30 segundos depois de o peixe foi introduzido para o tanque como um período de aclimatação adicional antes de comportamentos de pontuação. </li><li> Usando o sistema de pontuação jWatcher definido para comportamentos agressivos, quantificar os seguintes comportamentos para 10 min: O tempo gasto perto do espelho, o número de abordagens espelho, número de dardos, número de tentativas de picadas (abertura da boca na direção do espelho), e número de monitores laterais (dorsal, peitoral, anal, e montagem barbatana caudal) 9. </li><li> Marcar um ensaio de agressão única, pelo menos, duas vezes, até que o ensaio é marcado com alta concordância entre as iterações. </li></ol> 4. Realização da Ousadia Assay <ol><li> Conduzir o ensaio ousadia em um pequeno 1.5 L tanque trapezoidal, medindo 15 cm de altura x 26,5 cm x 22,5 cm topo inferior x 6 cm de largura. Enrole papel opaco em torno de todos os lados of do tanque, mas deixar a frente expostos para visualização. Colocar uma peça única, fina de fita externa ao tanque para demarcar o topo da porção inferior do tanque. </li><li> Assegurar que a temperatura da água no tanque é coragem dentro de 2 ° C da cremalheira caixa (ver passo 3.2) </li><li> Transferir o peixe focal da cremalheira carcaça para o tanque de aclimatação (ver passo 3.3) e deixe aclimatar durante 10 min. </li><li> Certifique-se de que a câmera está pronta para gravar o ensaio ousadia e, uma vez pronto para transferir o peixe focal, pressione registro no dispositivo. Transfira o peixe focal do tanque de aclimatação para o tanque de ousadia e recorde de 8 min e 30 seg. </li><li> Ao assistir a gravação, permitir um período adicional de aclimatação de 30 segundos depois de o peixe é introduzido no tanque antes de marcar. </li><li> Usando o software jWatcher, quantificar comportamentos ousadia para 8 min. Especificamente, quantificar os seguintes comportamentos: Tempo perto da superfície, a latência para entrar porção superior, o número de transitions para a parte superior, e número de movimentos erráticos (dardos) 29. </li><li> Marcar um ensaio audácia única, pelo menos, duas vezes, até que o ensaio é marcado com alta concordância entre as iterações. </li></ol> 5. A realização do Ensaio shoaling <ol><li> Conduzir o ensaio shoaling em um tanque de 76 L que tem três compartimentos divididos por dois divisores de vidro selados com silicone calafetar (as resultantes três compartimentos consistem em duas zonas de estímulo e um compartimento focal). Externamente, marcar duas zonas preferenciais designados 6,35 cm de cada uma divisória de vidro nas zonas de estímulo &quot;, indicativo de dois corpos comprimentos 30. Aplicar divisórias opacas externamente em torno de três lados do tanque shoaling, mas deixe a frente expostos para visualização. NOTA: Esta zona de preferência pode ser personalizado para testar hipóteses específicas para diferentes espécies de tamanho. </li><li> Dependendo da natureza do estudo, seleccione cardumes de estímulo a aclimatar durante pelo menos 12 horas antes da suae testar e permanecem no tanque empolamento durante todo o decurso da experiência. NOTA: cardumes estímulo são colecções de peixes individuais que são usados ​​para avaliar a forma como o peixe focal comporta-se na presença ou na ausência desses bancos de areia. Diferentes combinações estímulo cardume pode ser seleccionado para testar um número de diversas hipóteses de empolamento. Certifique-se de que os cardumes de estímulo são rodados entre cada zona de estímulo para evitar viés de lado e também estão autorizados a aclimatar durante pelo menos 12 horas antes do teste. </li><li> Transferir o peixe focal para dentro do tanque de aclimatação como previamente descrito (ver passo 3.3) </li><li> Transferir, por escavação, o peixe focal do tanque de aclimatação intermédia para o compartimento central do tanque de empolamento. </li><li> Permitir para um período de aclimatação de 10 minutos antes de um período de observação live-scoring 10 min. Alternativamente, gravar os ensaios de empolamento e marcar mais tarde usando jWatcher. Os peixes são determinado a ser shoaling quando estão dentro da zona de preferência na câmaraabrigando o cardume alvo. </li><li> Quantificar o tempo gasto em cada zona de preferência e tempo gasto no volume central. </li><li> Como medida descritivas adicionais, calcule &#39;força da shoaling&#39; (SOS). Atribuir um valor entre -1 e +1, onde a magnitude descreve quantas vezes um cardumes de peixes individuais. </li><li> Calcula-se a razão entre o tempo gasto empolamento dividida pela área das zonas de empolamento e subtrair a percentagem de tempo gasto não empolamento e a área das regiões não-empolamento. Coloque esta quantidade através da soma do tempo gasto em cada zona, dividido pelo volume de cada zona individual. Mais informações sobre este cálculo pode ser encontrado em um estudo anterior 14. </li></ol> 6. Controle de Qualidade de Dados <ol><li> Analisar dados usando dados tradicionais ferramentas de análise de 31-32. </li><li> Teste de homogeneidade de variância por meio do teste não paramétrico de Levene para todos os comportamentos. Se um comportamento é não homogênea executar uma log-transformação33. </li><li> Confirmar que não há nenhum efeito de sequência (ou seja, que a ordem de randomização não afectou o comportamento dos indivíduos), utilizando um ANOVA de Kruskal-Wallis nos dados homogéneas 34. </li><li> Confirmar que não há desvios laterais para o ensaio de empolamento criando modelos lineares gerais univariadas em índices SoS com o lado como um fator fixo 35. NOTA: Se houver pouca ou nenhuma problemas com os dados, as análises a jusante pode ser conduzida. Se houver problemas, conciliar com transformações adicionais, racionalizar com explicações biologicamente plausível, e / ou aumentar o tamanho das amostras. </li></ol> 7. Analisar dados <ol><li> Calcule bicaudal de Spearman correlações 36 para todos os comportamentos separadamente nos ensaios de ousadia e agressividade. </li><li> Calcule os coeficientes de correlação intraclasse (CCI) como um modelo misto de duas vias com consistência para ensaios comportamentais que foram realizados mais de um time para um determinado indivíduo 36. Neste cenário, o TPI é uma medida de como consistentemente um peixe comportou-se de um dado ensaio mediu mais de uma vez. </li><li> Preprocess ousadia e agressividade comportamentos de centragem e normatização todos os comportamentos para se preparar para a entrada para a análise de componentes principais (PCA) 25. NOTA: Pré-processamento das medições pela centralização e normatização é um passo vital. Sem este passo de pré-processamento comportamentos que ocorrem com mais frequência e mais variável irá influenciar excessivamente as interpretações dos componentes extraídos. O processo de centralização e normatização irá remover esse viés. </li><li> Execute um APC com uma matriz de correlação para determinar se a ousadia e agressividade estão ligadas entre si como uma síndrome comportamental. Interpretar cargas comportamentais de cada componente significativo em&gt; 0,6. Veja Budaev 2010 24 para um guia completo para relatar PCA para estudos comportamentais. A trama scree vai ser informativo em que eigenvectors deve ser mantido para a interpretação. </li><li> Usando software estatístico, como R ou SPSS 31,32, extrair pontuações para cada componente para cada indivíduo. As contagens representam a quantidade de comportamento do indivíduo dado pode ser explicado por o componente em particular. </li><li> Calcule Spearman correlações entre os escores de regressão de fatores e a força de empolamento 36. NOTA: A síndrome comportamental é considerado presente se ousadia e agressividade comportamentos carregar no mesmo componente ou, se algum componente com cargas interpretáveis ​​significativas correlaciona-se com a força de empolamento. Além disso, observe que a força de shoaling não está incluído no PCA para permitir melhores interpretações das quantificações comportamentais mais complexos (ousadia e agressividade). A APC ortogonalmente colapso ousadia e agressividade apresenta em vectores próprios para maximizar a quantidade de variação explicada e é bem adequado para estas medições complexas. interpretaçãoo que resulta autovetores e regredindo a nossa força de medições empolamento em cada um deles dá uma interpretação muito mais intuitiva de como cada um dos comportamentos complexos (ousadia e agressividade) referem-se a uma medição shoaling binário mais bem definida (ou seja, o peixe é empolamento ou não shoaling). </li></ol>

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P., Krause, J., Couzin, I. D., Pitcher, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+fish+shoals+meet:+outcomes+for+evolution+and+fisheries.">When fish shoals meet: outcomes for evolution and fisheries.</a> Fish Fish. 4, 138-146 (2003).</li><li>Brown, M. B., Forsythe, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+Tests+for+the+Equality+of+Variances.">Robust Tests for the Equality of Variances.</a> J Am Stat Assoc. 69 (346), (1974).</li><li>Kruskal, W. H., Wallis, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Ranks+in+One-Criterion+Variance+Analysis.">Use of Ranks in One-Criterion Variance Analysis.</a> J Am Stat Assoc. 47 (260), 583-621 (1952).</li><li>Nelder, J. A., Wedderburn, R. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalized+Linear+Models.">Generalized Linear Models.</a> J Roy Stat Soc A Sta. 135, 370-384 (1972).</li><li>Iman, R. L., Conover, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+distribution-free+approach+to+inducing+rank+correlation+among+input+variables.">A distribution-free approach to inducing rank correlation among input variables.</a> Commun Stat Simulat. 11 (3), 311-334 (1982).</li><li>Fleiss, J. L., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Equivalence+of+Weighted+Kappa+and+the+Intraclass+Correlation+Coefficient+as+Measures+of+Reliability.">The Equivalence of Weighted Kappa and the Intraclass Correlation Coefficient as Measures of Reliability.</a> Educ Psychol Meas. 33 (3), 613-619 (1973).</li><li>Ruhl, N., McRobert, S. P., Currie, W. J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shoaling+preferences+and+the+effects+of+sex+ratio+on+spawning+and+aggression+in+small+laboratory+populations+of+zebrafish+(Danio+rerio).">Shoaling preferences and the effects of sex ratio on spawning and aggression in small laboratory populations of zebrafish (Danio rerio).</a> Lab Animal. 38 (8), 264-269 (2009).</li><li>Bell, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+differences+between+individuals+and+two+populations+of+stickleback+(Gasterosteus+aculeatus).">Behavioural differences between individuals and two populations of stickleback (Gasterosteus aculeatus).</a> J Evolution Biol. 18 (2), 464-473 (2005).</li><li>Wilson, A. D. M., Godin, J. -. G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boldness+and+behavioral+syndromes+in+the+bluegill+sunfish,+Lepomis+macrochirus.">Boldness and behavioral syndromes in the bluegill sunfish, Lepomis macrochirus.</a> Behav Ecol. 20 (2), 231-237 (2009).</li><li>Brodin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+syndrome+over+the+boundaries+of+life--carryovers+from+larvae+to+adult+damselfly.">Behavioral syndrome over the boundaries of life--carryovers from larvae to adult damselfly.</a> Behav Ecol. 20 (1), 30-37 (2008).</li><li>Noldus, L. P., Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EthoVision:+a+versatile+video+tracking+system+for+automation+of+behavioral+experiments.">EthoVision: a versatile video tracking system for automation of behavioral experiments.</a> Behav Res Methods Instrum Comput. 33 (3), 398-414 (2001).</li><li>Cote, J., Fogarty, S., Weinersmith, K., Brodin, T., Sih, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personality+traits+and+dispersal+tendency+in+the+invasive+mosquitofish+(Gambusia+affinis).">Personality traits and dispersal tendency in the invasive mosquitofish (Gambusia affinis).</a> Proc R Soc B. 277 (1687), 1571-1579 (2010).</li><li>Fraser, D. F., Gilliam, J. F., Daley, M. J., Le, A. N., Skalski, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explaining+leptokurtic+movement+distributions:+intrapopulation+variation+in+boldness+and+exploration.">Explaining leptokurtic movement distributions: intrapopulation variation in boldness and exploration.</a> Am Nat. 158 (2), 124-135 (2001).</li><li>Dingemanse, N. J., Wright, J., Kazem, A. J. N., Thomas, D. K., Hickling, R., Dawnay, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+syndromes+differ+predictably+between+12+populations+of+three-spined+stickleback.">Behavioural syndromes differ predictably between 12 populations of three-spined stickleback.</a> J Anim Ecol. 76 (6), 1128-1138 (2007).</li></ol>

The authors (GW and SPM) have no competing financial interests or conflicts of interest.

O protocolo irá determinar se existem associações consistentes em ousadia, agressão e comportamentos empolamento em peixes-zebra. Se existem associações consistentes numa dada população entre qualquer um destes comportamentos, em seguida, uma síndrome comportamental está presente. Ao estudar a síndrome comportamental de uma população, os pesquisadores podem ter uma compreensão mais completa da sua dinâmica comportamental, estrutura populacional e história evolutiva, possivelmente, 3. Além dis...

Há um crescente corpo de literatura investigando as associações entre comportamentos distintos dentro animais individuais a partir de uma dada população. Estas associações são denominadas síndromes comportamentais, e as medidas incluem, tipicamente, a ousadia, a agressão, o comportamento exploratório, e sociabilidade 1-5. síndromes comportamentais são valiosos tanto por razões diretos e indiretos. Diretamente, o conhecimento das síndromes comportamentais podem fornecer uma visão mais completa da teoria da evolução, estrutura populacional e dinâmica populacional 3. Indiretamente, o conhecimento sobre as associações comportamentais podem informar campos que quantificam o comportamento tais como farmacologia 6, toxicologia 7, genética comportamental 8,9, e endocrinologia 10. Devido a estes benefícios diretos e indiretos, o aumento do conhecimento das síndromes comportamentais é especialmente valioso em organismos modelo comumente utilizados, tais como o peixe-zebra. Estudos utilizando peixes-zebra são encontrados ina variedade de disciplinas, incluindo a análise das síndromes comportamentais 11-13. Para avançar o conhecimento em pesquisa síndrome comportamental, e por outras disciplinas também usam as medidas comportamentais para o teste de hipóteses, descrições confiáveis ​​e sucintas de comportamento são necessários para análises e interpretações válidas e protocolos padronizados irá facilitar as comparações inter-estudo dentro das espécies. Nosso protocolo foi desenvolvido para medir uma síndrome comportamental ousadia-agressão shoaling em uma população de peixe-zebra criados em laboratório 14. No entanto, a base do protocolo (rastreamento de cada peixe, assegurando randomização apropriada, e análises apropriadas) pode ser facilmente modificado para uma variedade de medidas comportamentais alternativos. Além disso, ensaios de ousadia, agressão ou empolamento pode ser executado individualmente para o teste de hipóteses distintas. Portanto, ao mesmo tempo que é o nosso objetivo para descrever como conduzir um estudo de síndrome comportamental eo protocolo para o sucesso l indivíduoEvel medição comportamental, cada faceta deste procedimento pode ficar sozinho. A literatura sobre síndromes comportamentais abarca diversos grupos taxonómicos, de artrópodes e para os seres humanos 4, a fim de medir uma síndrome comportamental, pelo menos dois contextos de comportamento tem de ser quantificados. Infelizmente, muitas vezes há pouca consistência nos ensaios que são utilizados para quantificar a medida de comportamento entre os eixos de comportamento. Por exemplo, no peixe, coragem pode ser medida utilizando ensaios de labirinto em T, ensaios de campo aberto, ou a introdução de um novo estímulo ou externa 15. Estudos de agressão em peixes pode envolver interacções díade, ensaios de vídeo de estímulo, ou ensaios modelo de argila 12,16,17. Da mesma forma, a análise do comportamento de empolamento, que tipicamente envolve a medição de preferência shoalmate, pode ser realizada em diferentes tipos de tanques, com diferentes métodos para determinar o tempo de associação 21-23. Neste protocolo de um subconjunto específico do OveraLL repertório comportamental ensaio é apresentado. Especificamente, este protocolo apresenta uma metodologia para rastrear indivíduos através de ousadia, agressão e ensaios de empolamento de uma forma que facilita as comparações dentro dos indivíduos para determinar se as comparações são consistentes em todos os indivíduos dentro de uma população. Efetuamos este protocolo com o peixe-zebra e ciclídeos condenado (Amatitlania nigrofasciata) em estudos anteriores 14,18, e ele vai trabalhar com qualquer peixes de água doce de tamanho similar. Os ensaios de negrito são conduzidas num tanque trapezoidal 1,5 L que tem uma linha horizontal delinear áreas de igual tamanho das porções superior e inferior do tanque. comportamentos quantificados incluem o número de transições através do teste de peixe entre a parte superior e inferior do tanque, o tempo gasto em cada porção, o número de dardos, e a latência para entrar na porção superior. O ensaio de agressão é realizada num tanque rectangular 19L, que incluium espelho x 5 polegadas 3 polegadas inclinada a cerca de 22 ° situadas no canto inferior esquerdo do tanque 19. Comportamentos quantificados incluem a quantidade total de tempo gasto pelos peixes-alvo interage com o espelho 20, juntamente com indicadores agressivos específicas - número de picadas, displays laterais, dardos entre os peixes de ensaio e de sua reflexão. Para estes indicadores específicos, mordidas são definidos como estocadas rápidas para o espelho com uma boca aberta, displays laterais são definidos como a queima de lateral, peitorais, anal e dorsal barbatanas na direção do espelho, e dardos são quaisquer movimentos erráticos que são não dirigido para o espelho. Finalmente, o ensaio de empolamento quantifica o comportamento de um peixe teste na câmara de centro de um tanque de câmaras-tri. As câmaras laterais do tanque são ou vazio, ou conter uma &quot;cardume target&quot; de peixes, eo tempo o peixe teste gasta perto de cada câmara lateral é medido 21-23. A pontuação composta única, referido como StrenGTH de empolamento (SOS), é calculada para cada peixe de teste individual, específica para os estímulos, e pode ser utilizado em análises a jusante 14. Todos os comportamentos são marcados por um único visor, ou vários espectadores usando software quantificação comportamental livre conhecido como jWatcher 24. Testando a presença de uma síndrome comportamental é principalmente um esforço estatística, e é aconselhável seguir as orientações tal como apresentado pela Budeav 2010 25. Especificamente, recomenda-se realizar uma análise de componentes principais (PCA) em dados centralizados e normalizados em que o entradas são os vetores de comportamentos de um indivíduo em ensaios com múltiplas medidas comportamentais (ie, ousadia e agressividade). A APC, realizado em uma matriz de correlação, reduz a dimensionalidade das medições comportamentais, e assim extrai o conhecimento mais importante que explica a maioria da variação. Os componentes extraídos podem então ser interpretada based em cargas elevadas de factor para o comportamento individual de interesse e pontuações de regressão pode ser extraído para cada indivíduo na base dos componentes explicativas. Estas pontuações de regressão pode, então, ser comparado com a medição SOS e outras várias medições não-comportamentais, tais como o tamanho do peixe ou sexo. Esse fluxo de trabalho foi implementado em um estudo das síndromes comportamentais peixe-zebra em que uma síndrome comportamental específica do sexo que existe entre ousadia e shoaling 14 foi descoberto. Nesta situação, ousadas machos de peixe-zebra são mais susceptíveis de se associar com a espécie de maior dimensão, mais agressivos (D. albolineatus), mas esta associação é perdida nas fêmeas. Esse fluxo de trabalho também foi implementado em um estudo de presidiário kin juvenil ciclídeos (Amatitlania nigrofasciata) 18 em que uma síndrome comportamental não foi descoberto, potencialmente indicando plasticidade comportamental da espécie. Portanto, o protocolo seguinte é apresentada Wom um objectivo de delinear a natureza dos três ensaios específicos (coragem, agressão, e de empolamento), no âmbito de um estudo síndrome comportamental nível individual.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="783">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Zebrafish Rack System</td>
			<td style="width:224px;">Aquaneering Inc</td>
			<td style="width:119px;">Cat. # ZS550</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pet Valu Tropical Fish Food, 224.0g</td>
			<td>Pet Valu</td>
			<td>Cat. # 31700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Premium Grade Brine Shrimp Eggs, 16 oz</td>
			<td>Brine Shrimp Direct</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 L Trapezoidal Tank</td>
			<td>Pentair Aquatic Ecosystems</td>
			<td>Cat. # itsts-a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19L rectangular tank</td>
			<td>That Fish Place</td>
			<td align="right">211932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">76L rectangular tank</td>
			<td>That Fish Place</td>
			<td align="right">212180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hitachi KP-D20A CCD Camera</td>
			<td>Prescott&#39;s, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nikon AF Nikkor 35-105mm f/305~4.5s MACRO lens</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3&#34;x3&#34;</td>
			<td>Michaels</td>
			<td>Cat. # 10334162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Jwatcher</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPSS Statistics Base</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">R</td>
			<td>The R Foundation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

boldness, aggression, and shoaling assays for zebrafish behavioral syndromes

A síndrome comportamental existe quando comportamentos específicos interagem sob diferentes contextos. Peixe-zebra foram cobaias em estudos recentes e é importante para padronizar protocolos para garantir análises e interpretações adequadas. Em nossos estudos anteriores, temos medido ousadia monitorando uma série de comportamentos (tempo perto da superfície, a latência em transições, número de transições, e dardos) em um tanque trapezoidal 1,5 L. Da mesma forma, nós quantificamos a agressão por mordidas de observação, monitores laterais, dardos e tempo perto de um espelho inclinado em um tanque de 19 L rectangular. Ao dividir um tanque de 76 L em três partes, que também examinou as preferências empolamento. O ensaio shoaling é um ensaio altamente customizável e pode ser adaptado para hipóteses específicas. No entanto, os protocolos para este ensaio também deve ser padronizado, mas suficientemente flexível para personalização. Em estudos anteriores, as câmaras finais eram ou vazio, continha 5 ou 10 peixes-zebra, ou 5 Danios pérola (D. albolineatus). No folmugindo manuscrito, apresentamos um protocolo detalhado e dados representativos que acompanham aplicações bem sucedidas do protocolo, que irá permitir a replicação de experiências síndrome comportamental.

Dependendo da natureza do estudo, e protocolo específico empregue, vários resultados distintos são possíveis através de uma experiência síndromes comportamentais. As tabelas e figuras, onde indicado a seguir, são adaptados de nosso estudo anterior publicado na revista Behavioural Processes 14 e do jornal Zebrafish 17. Quando a proposta (como descrito acima) é levada a cabo na sua totalidade, dois conjuntos de resultados, &quot;dentro de correlações de ens...

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Boldness, Aggression, and Shoaling Assays for Zebrafish Behavioral Syndromes

This manuscript describes the setup, implementation, and analysis of boldness, aggression, and shoaling in zebrafish and testing for the presence of a behavioral syndrome. A standardized approach for behavioral quantification will allow for easier comparison across studies. Modifications to this protocol are possible as each assay can be run individually.

Arrojo, agressão e Ensaios shoaling para Zebrafish Síndromes Comportamentais

A behavioral syndrome exists when specific behaviors interact under different contexts. Zebrafish have been test subjects in recent studies and it is ...

boldness-aggression-shoaling-assays-for-zebrafish-behavioral

Research

JoVE Journal

Medicine

10.2K visualizações.  Saint Joseph’s University. This manuscript describes the setup, implementation, and analysis of boldness, aggression, and shoaling in zebrafish and testing for the presence of a behavioral syndrome. A standardized approach for behavioral quantification will allow for easier comparison across studies. Modifications to this protocol are possible as each assay can be run individually.

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Intra-Operative Behavioral Tasks in Awake Humans Undergoing Deep Brain Stimulation Surgery

Deep brain stimulation (DBS) is a surgical procedure that directs chronic, high frequency electrical stimulation to specific targets in the brain through implanted electrodes. Deep brain stimulation was first implemented as a therapeutic modality by Benabid et al. in the late 1980s, when he used this technique to stimulate the ventral intermediate nucleus of the thalamus for the treatment of tremor 1. Currently, the procedure is used to treat patients who fail to respond adequately to medical management for diseases such as Parkinson's, dystonia, and essential tremor. The efficacy of this procedure for the treatment of Parkinson's disease has been demonstrated in well-powered, randomized controlled trials 2. Presently, the U.S. Food and Drug Administration has approved DBS as a treatment for patients with medically refractory essential tremor, Parkinson's disease, and dystonia. Additionally, DBS is currently being evaluated for the treatment of other psychiatric and neurological disorders, such as obsessive compulsive disorder, major depressive disorder, and epilepsy. 
DBS has not only been shown to help people by improving their quality of life, it also provides researchers with the unique opportunity to study and understand the human brain. Microelectrode recordings are routinely performed during DBS surgery in order to enhance the precision of anatomical targeting. Firing patterns of individual neurons can therefore be recorded while the subject performs a behavioral task. Early studies using these data focused on descriptive aspects, including firing and burst rates, and frequency modulation 3. More recent studies have focused on cognitive aspects of behavior in relation to neuronal activity 4,5. This article will provide a description of the intra-operative methods used to perform behavioral tasks and record neuronal data with awake patients during DBS cases. Our exposition of the process of acquiring electrophysiological data will illuminate the current scope and limitations of intra-operative human experiments.

Deep brain stimulation surgery offers a unique opportunity to examine information encoding in the awake human brain. This article will describe intra-operative methods used to perform cognitive and behavioral tasks while simultaneously acquiring physiological data such as EMG, single-unit neuronal activity and/or local field potentials.

Intra-operatórias tarefas comportamentais em humanos Awake Submetidas à Cirurgia de Estimulação Profunda do Cérebro

Deep brain stimulation (DBS) is a surgical procedure that directs chronic, high frequency electrical stimulation to specific targets in the brain through ...

Medicina

Using Visual and Narrative Methods to Achieve Fair Process in Clinical Care

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is respect for patient's values, preferences, and expressed needs. Yet specific approaches to gaining this understanding and translating it to quality care in the clinical setting are lacking. From a patient perspective quality is not a simple concept but is best understood in terms of five dimensions: technical outcomes; decision-making efficiency; amenities and convenience; information and emotional support; and overall patient satisfaction. Failure to consider quality from this five-pronged perspective results in a focus on medical outcomes, without considering the processes central to quality from the patient's perspective and vital to achieving good outcomes. In this paper, we argue for applying the concept of fair process in clinical settings. Fair process involves using a collaborative approach to exploring diagnostic issues and treatments with patients, explaining the rationale for decisions, setting expectations about roles and responsibilities, and implementing a core plan and ongoing evaluation. Fair process opens the door to bringing patient expertise into the clinical setting and the work of developing health care goals and strategies. This paper provides a step by step illustration of an innovative visual approach, called photovoice or photo-elicitation, to achieve fair process in clinical work with acquired brain injury survivors and others living with chronic health conditions. Applying this visual tool and methodology in the clinical setting will enhance patient-provider communication; engage patients as partners in identifying challenges, strengths, goals, and strategies; and support evaluation of progress over time. Asking patients to bring visuals of their lives into the clinical interaction can help to illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships with patients living with chronic conditions such as brain injury, and identify patient-centered goals and possibilities for healing. The process illustrated here can be used by clinicians, (primary care physicians, rehabilitation therapists, neurologists, neuropsychologists, psychologists, and others) working with people living with chronic conditions such as acquired brain injury, mental illness, physical disabilities, HIV/AIDS, substance abuse, or post-traumatic stress, and by leaders of support groups for the types of patients described above and their family members or caregivers.

This paper illustrates an innovative visual approach (photovoice or photo-elicitation) to achieve fair process in clinical care for patients living with chronic health conditions, illuminate gaps in clinical knowledge, forge better therapeutic relationships, and identify patient-centered goals and possibilities for healing.

Usando métodos visual e narrativa para atingir Processo Fair em Cuidados Clínicos

The Institute of Medicine has targeted patient-centeredness as an important area of quality improvement. A major dimension of patient-centeredness is ...

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarcadores em um modelo animal para Revelando correlatos neurais, hematológica e Comportamental do TEPT

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Eye Tracking Young Children with Autism

The rise of accessible commercial eye-tracking systems has fueled a rapid increase in their use in psychological and psychiatric research. By providing a direct, detailed and objective measure of gaze behavior, eye-tracking has become a valuable tool for examining abnormal perceptual strategies in clinical populations and has been used to identify disorder-specific characteristics1, promote early identification2, and inform treatment3. In particular, investigators of autism spectrum disorders (ASD) have benefited from integrating eye-tracking into their research paradigms4-7. Eye-tracking has largely been used in these studies to reveal mechanisms underlying impaired task performance8 and abnormal brain functioning9, particularly during the processing of social information1,10-11. While older children and adults with ASD comprise the preponderance of research in this area, eye-tracking may be especially useful for studying young children with the disorder as it offers a non-invasive tool for assessing and quantifying early-emerging developmental abnormalities2,12-13. Implementing eye-tracking with young children with ASD, however, is associated with a number of unique challenges, including issues with compliant behavior resulting from specific task demands and disorder-related psychosocial considerations. In this protocol, we detail methodological considerations for optimizing research design, data acquisition and psychometric analysis while eye-tracking young children with ASD. The provided recommendations are also designed to be more broadly applicable for eye-tracking children with other developmental disabilities. By offering guidelines for best practices in these areas based upon lessons derived from our own work, we hope to help other investigators make sound research design and analysis choices while avoiding common pitfalls that can compromise data acquisition while eye-tracking young children with ASD or other developmental difficulties.

Eye tracking has long been used to study gaze patterns in typically-developing individuals, but recent technological advancements have made its use with clinical populations, including autism, more feasible. While eye-tracking young children with autism can offer insight into early symptom manifestations, it involves methodological challenges. Suggestions for best practices are provided.

Rastreamento ocular crianças com autismo

The rise of accessible commercial eye-tracking systems has fueled a rapid increase in their use in psychological and psychiatric research. By providing a ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction of cells in the tumor with stem cell properties, termed brain tumor initiating cells (BTICs), possess an ability to differentiate along multiple lineages, self-renew, and initiate tumors in vivo. We applied culture conditions originally used for normal neural stem cells (NSCs) to a variety of human brain tumors and found that this culture method specifically selects for stem-like populations. Serum-free medium (NSC) allows for the maintenance of an undifferentiated stem cell state, and the addition of bFGF and EGF allows for the proliferation of multi-potent, self-renewing, and expandable tumorspheres.
To further characterize each tumor's BTIC population, we evaluate cell surface markers by flow cytometry. We may also sort populations of interest for more specific characterization. Self-renewal assays are performed on single BTICs sorted into 96 well plates; the formation of tumorspheres following incubation at 37 &deg;C indicates the presence of a stem or progenitor cell. Multiple cell numbers of a particular population can also be sorted in different wells for limiting dilution analysis, to analyze self-renewal capacity. We can also study differential gene expression within a particular cell population by using single cell RT-PCR.
The following protocols describe our procedures for the dissociation and culturing of primary human samples to enrich for BTIC populations, as well as the dissociation of tumorspheres. Also included are protocols for staining for flow cytometry analysis or sorting, self-renewal assays, and single cell RT-PCR.

The identification of brain tumor initiating cells (BTICs), the rare cells within a heterogeneous tumor possessing stem cell properties, provides new insights into human brain tumor pathogenesis. We have refined specific culture conditions to enrich for BTICs, and we routinely use flow cytometry to further enrich these populations. Self-renewal assays and transcript analysis by single cell RT-PCR can subsequently be performed on these isolated cells.

Processamento de tecido primário do tumor cerebral para Ensaios de Células Tronco e Fluxo de Classificando

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

Genomic studies of human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered in tumors1,2,3. A challenge arising from these studies is that many genes are altered, and it can be difficult to distinguish genetic alterations that drove tumorigenesis from that those arose incidentally during transformation. To draw this distinction it is beneficial to have an assay that can quantitatively measure the effect of an altered gene on tumor initiation and other processes that enable tumors to persist and disseminate. Here we present a rapid means to screen large numbers of candidate melanoma modifiers in zebrafish using an autochthonous tumor model4 that encompasses steps required for melanoma initiation and maintenance. A key reagent in this assay is the miniCoopR vector, which couples a wild-type copy of the mitfa melanocyte specification factor to a Gateway recombination cassette into which candidate melanoma genes can be recombined5. The miniCoopR vector has a mitfa rescuing minigene which contains the promoter, open reading frame and 3'-untranslated region of the wild-type mitfa gene. It allows us to make constructs using full-length open reading frames of candidate melanoma modifiers. These individual clones can then be injected into single cell Tg(mitfa:BRAFV600E);p53(lf);mitfa(lf)zebrafish embryos. The miniCoopR vector gets integrated by Tol2-mediated transgenesis6 and rescues melanocytes. Because they are physically coupled to the mitfa rescuing minigene, candidate genes are expressed in rescued melanocytes, some of which will transform and develop into tumors. The effect of a candidate gene on melanoma initiation and melanoma cell properties can be measured using melanoma-free survival curves, invasion assays, antibody staining and transplantation assays.

A rapid way to screen for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model is presented. It takes advantage of the miniCoopR vector which allows for expression of candidate melanoma genes in melanocytes. A method to obtain melanoma-free survival curves, an invasion assay, a protocol for antibody staining of scale melanocytes and a melanoma transplantation assay are described.

Triagem para Modificadores Melanoma usando um modelo de tumor Zebrafish autóctone

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the presence of circulating tumor cells (CTCs). These rare cells have been demonstrated to be of clinical significance in metastatic breast, prostate, and colorectal cancers. The current gold standard in clinical CTC detection and enumeration is the FDA-cleared CellSearch system (CSS). This manuscript outlines the standard protocol utilized by this platform as well as two&#160;additional adapted protocols that describe the detailed process of user-defined marker optimization for protein characterization of patient CTCs and a comparable protocol for CTC capture in very low volumes of blood, using standard CSS reagents, for studying in vivo preclinical mouse models of metastasis. In addition, differences in CTC quality between healthy donor blood spiked with cells from tissue culture versus patient blood samples are highlighted. Finally, several commonly discrepant items that can lead to CTC misclassification errors are outlined. Taken together, these protocols will provide a useful resource for users of this platform interested in preclinical and clinical research pertaining to metastasis and CTCs.

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Circulating tumor cells (CTCs) are prognostic in several metastatic cancers. This manuscript describes the gold standard CellSearch system (CSS) CTC enumeration platform and highlights common misclassification errors. In addition, two&#160;adapted protocols are described for user-defined marker characterization of CTCs and CTC enumeration in preclinical mouse models of metastasis using this technology.

Adaptação do Semi-Automática de circulação Tumor de Células (CTC) Ensaios para aplicações clínicas e pré-clínica de Pesquisa

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone resorption. Osteoclasts can be generated in vitro from monocyte/macrophage precursor cells in the presence of certain cytokines, which promote survival and differentiation. Here, both in vivo and in vitro techniques are demonstrated, which allow scientists to study different cytokine contributions towards osteoclast differentiation, signaling, and activation. The minicircle DNA delivery gene transfer system provides an alternative method to establish an osteoporosis-related model is particularly useful to study the efficacy of various pharmacological inhibitors in vivo. Similarly, in vitro culturing protocols for producing osteoclasts from human precursor cells in the presence of specific cytokines enables scientists to study osteoclastogenesis in human cells for translational applications. Combined, these techniques have the potential to accelerate drug discovery efforts for osteoclast-specific targeted therapeutics, which may benefit millions of osteoporosis and arthritis patients worldwide.

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

Differentiation of precursor cells into osteoclasts is regulated by cytokines and growth factors. Here, a novel gene transfer technique for differentiation of osteoclasts in vivo and cell culture protocols for differentiating precursor cells into osteoclasts in vitro as a method to study the effects of cytokines on osteoclastogenesis are described.

A Novel<em&gt; In vivo</em&gt; Técnica Gene Transferência e<em&gt; In vitro</em&gt; Ensaios baseados em células para o Estudo da perda óssea em Distúrbios Osteomusculares

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

A Novel Model of Mild Traumatic Brain Injury for Juvenile Rats

Despite growing evidence that childhood represents a major risk period for mild traumatic brain injury (mTBI) from sports-related concussions, motor vehicle accidents, and falls, a reliable animal model of mTBI had previously not been developed for this important aspect of development. The modified weight-drop technique employs a glancing impact to the head of a freely moving rodent transmitting acceleration, deceleration, and rotational forces upon the brain. When applied to juvenile rats, this modified weight-drop technique induced clinically relevant behavioural outcomes that were representative of post-concussion symptomology. The technique is a rapidly applied procedure with an extremely low mortality rate, rendering it ideal for high-throughput studies of therapeutics. In addition, because the procedure involves a mild injury to a closed head, it can easily be used for studies of repetitive brain injury. Owing to the simplistic nature of this technique, and the clinically relevant biomechanics of the injury pathophysiology, the modified weight-drop technique provides researchers with a reliable model of mTBI that can be used in a wide variety of behavioural, molecular, and genetic studies.

The modified weight-drop technique is an easy, cost-effective procedure used for the induction of mild traumatic brain injury in juvenile rats. This novel technique produces clinically relevant symptomology that will advance the study of mild traumatic brain injury (mTBI) and concussion.

Um novo modelo de Mild Traumatic Brain Injury para ratos jovens

Despite growing evidence that childhood represents a major risk period for mild traumatic brain injury (mTBI) from sports-related concussions, motor ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with high-throughput cell positioning technology. The targeted tumor cell populations are first preprogrammed to immobilization into an array format, and labeled with green fluorescent cytosolic dyes. Following the cell array formation, antibody drugs are added in combination with human whole blood. Propidium iodide (PI) is then added to assess cell death. The cell array is analyzed with an automatic imaging system. While cytosolic dye labels the targeted tumor cell populations, PI labels the dead tumor cell populations. Thus, the percentage of target cancer cell killing can be quantified by calculating the number of surviving targeted cells to the number of dead targeted cells. With this method, researchers are able to access time-dependent and dose-dependent cell cytotoxicity information. Remarkably, no hazardous radiochemicals are used. The WCA presented here has been tested with lymphoma, leukemia, and solid tumor cell lines. Therefore, WCA allows researchers to assess drug efficacy in a highly relevant ex&#160;vivo condition.

The whole blood cytotoxicity assay (WCA) is a cytotoxicity assay developed by incorporating high-throughput cell positioning technology with fluorescence microscopy and automated image processing. Here, we describe how lymphoma cells treated with an anti-CD20 antibody can be analyzed real-time in human whole blood to provide quantitative cellular cytotoxicity analysis.

Em tempo real de Citotoxicidade em Sangue Total Humano

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...