Name: the ex vivo colon organ culture and its use in antimicrobial host defense studies
Uploaded: 2017-02-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pelo financiamento da Fundação de Crohn e Colite da América, (CCFA; 3711) Prevenção de Câncer e Instituto de Pesquisa de Texas (CPRIT; RP160169) e UT Southwestern Medical Center dado a MHZ

Todos os experimentos aqui descritos foram realizados utilizando camundongos 6-8 semanas de idade do sexo masculino de tipo selvagem (C57BL6 / J) mantido em um free (SPF) instalação de patógenos específicos no Centro de Recursos Animal (ARC), UT Southwestern Medical Center. Todos os estudos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Animal Care and Use (IACUC) e foram conduzidos de acordo com as diretrizes IACUC e do National Institutes of Health Guide para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. 1. Recolha e Preparação do Colon <ol><li> Eutanásia ratos com asfixia com CO 2, seguida por deslocação cervical. </li><li> Spray de ratos com 70% de etanol e fixá-membros a uma placa prendendo mantendo lado o rato dorsal para baixo no tabuleiro. </li><li> Usando tesouras e pinças pré-esterilizados dissecando, fazer uma incisão na linha média no peritônio do abdômen. Abra o abdómen dobrando o peritônio com uma pinça. </li><li> Remover o intestino a partir da cavidade abdominal with dissecando pinça e tesouras. Separa-se o cólon a partir do intestino delgado através do corte na parte inferior do ceco e a outra extremidade no recto. </li><li> Colocar o cólon numa placa de Petri estéril contendo PBS gelado. Lavar o conteúdo do lúmen do cólon com PBS arrefecido em gelo, utilizando uma seringa de 20 ml que prende uma agulha G 20 ou uma agulha de gavagem oral até que as fezes no interior do lúmen do cólon é completamente removido. </li><li> Corte do cólon com uma tesoura longitudinalmente. Lavar o cólon, mediante agitação vigorosa em PBS arrefecido com gelo numa placa de Petri estéril. </li><li> Corte o tecido do cólon em pedaços de aproximadamente 1 cm de comprimento, utilizando um bisturi ou tesoura estéril. </li><li> Registar o peso das peças do cólon. NOTA: Todas as etapas na Seção 1 pode ser realizada dentro ou fora de uma cabine de segurança biológica. Uma vez que dois pontos estão prontos para a cultura, todas as etapas devem ser executadas dentro de uma cabine de segurança biológica para manter a esterilidade. </li></ol> 2. Colon Orguma Cultura <ol><li> Coloque um filtro celular (100 um) sobre uma placa de cultura celular de 6 poços. Transferir todas as peças do cólon recolhidos a partir de um rato para o filtro de células. </li><li> Adicionar 5 ml de meio DMEM / F12 contendo FBS a 5%, penicilina-estreptomicina (1x), e gentamicina (20 ug / ml). Completamente cobrir os pedaços do cólon com a mídia. </li><li> Incubar durante 2 horas a 37 ° C numa incubadora com 5% de CO 2 e 95% de ar. </li><li> Levante o filtro de células e aspirar a mídia. </li><li> Coloque o filtro de células de volta no bem e adicionar 5 ml meio fresco sem quaisquer antibióticos. Levante o filtro de células e aspirar a mídia. </li><li> Repetir o passo de lavagem acima (Passo 2.5) duas vezes mais (total de 3x) para remover todos os antibióticos residuais. </li><li> Transferir as peças do cólon a partir de um único filtro de células em um único poço de uma placa de cultura celular de 12 poços estéreis. </li><li> Adicionar meio DMEM / F12 contendo FBS a 5% (sem antibióticos). Ajuste o volume do meio com o weigHT das peças do cólon, por exemplo, 1 ml de meio por 100 mg de tecido. Incubar durante 12 h a 37 ° C numa incubadora de injecção de 5% de CO 2 e 95% de ar. </li><li> Recolhe-se o sobrenadante de cultura num tubo esterilizado de 1,5 mL. </li><li> Centrifuga-se a 12000 xg, a 4 ° C durante 5 min. Separa-se o sobrenadante para um novo tubo de 1,5 mL para uso nas bactérias matando ensaio e / ou outros ensaios imunológicos. O sobrenadante pode ser armazenado a -80 ° C até o ensaio. </li><li> Recolher as peças de cólon em um tubo para o isolamento de RNA. </li></ol> 3. E. coli Ensaio Killing <ol><li> Inocular E. coli em 5 mL de meio de Luria-Bertani (LB) num tubo de 15 ml e incuba-se a 37 ° C com agitação a 200 rpm durante a noite. Mantenha a tampa do tubo de cultura levemente solto. </li><li> Centrifuga-se o tubo de cultura bacteriana a 1.200 xg durante 10 min a 4 ° C. Remover o sobrenadante e ressuspender o sedimento de bactérias em 5 ml de PBS arrefecido com gelo. </li><li> Transferir 1 ml do Bactsuspensão erial em uma OD cuvete e medida a 600 nm. Use PBS como branco. </li><li> Calcula-se a unidade de formação de colónias (ufc) utilizando uma curva padrão predeterminada. Aqui, assumir que uma OD = 2 x 10 9 cfu / mL (aproximadamente). </li><li> Dilui-se a suspensão bacteriana para fazer a suspensão de 1 x 10 5 CFU / mL. </li><li> Transferir o sobrenadante de cultura do cólon órgão (500 ul / poço) recolhida na secção 2.10 em poços duplicados de uma placa de cultura celular de 24 poços. </li><li> Adiciona-se 10 uL de cultura de E. coli (1000 cfu) para um poço contendo 500 uL do cólon sobrenadante da cultura de órgãos. Deixar o outro bem sem qualquer inoculação de E. coli para confirmar que o sobrenadante de cultura do cólon órgão não contém qualquer contaminação. </li><li> Incubar o mesmo número de bactérias (1000 cfu) no meio de cultura (DMEM / F12 + 5% de FBS) sem quaisquer antibióticos como um controlo. </li><li> Incubar a 37 ° C durante 1 h. </li><li> Transferir 50 uL de cada amostra gota-wise em placas de ágar MacConkey. Incubar as placas de ágar de MacConkey a 37 ° C durante a noite. </li><li> Contar o número de colónias e calcular a CFU / ml. </li></ol> 4. O efeito de fatores extrínsecos e intrínsecos no cólon Antimicrobianos respostas de defesa do hospedeiro NOTA: O ensaio de morte antimicrobiano, tal como descrito aqui pode ser adoptada para examinar o efeito de padrões de agentes patogénicos associados moleculares (PAMPs) e citocinas sobre a actividade bactericida de sobrenadante de cultura de órgãos. Um exemplo de tal experiência usando IL-1β e IL-18 é descrita abaixo. <ol><li> Recolha dois pontos de camundongos como descrito na Seção 1. </li><li> Coloque os dois pontos em uma toalha de papel estéril. Corte do cólon longitudinalmente em três partes com uma tesoura (Figura 2). </li><li> Lave cada parte do cólon em PBS gelado como descrito na Seção 1. </li><li> Corte cada parte do cólon em pedaços pequenos e pesam de forma asséptica. Transferir as peças de cada partedo cólon em três filtros celulares separadas (100 um) colocadas em três poços de uma placa de cultura de células de 6 poços (Figura 2). </li><li> Adicionar 2 ml de meio DMEM / F12 contendo FBS a 5%, penicilina-estreptomicina (1x), e gentamicina (20 ug / ml). </li><li> Incubar durante 2 horas a 37 ° C numa incubadora de injecção de 5% de CO 2 e 95% de ar. </li><li> Lavam-se as peças do cólon tal como descrito no 2,4-2,6. Transferir as peças de cólon de um único filtro de células em um único poço de uma placa de cultura celular de 12 poços estéreis. Os três poços contendo três partes do cólon a partir de um único rato deve ser designado como não tratada, a IL-1β, e IL-18 (Figura 2). </li><li> Adicionar meio DMEM / F12 contendo FBS a 5% (sem antibióticos). Ajustar o volume do meio com o peso das peças do cólon, por exemplo, 1 mL de meio por 100 mg de tecido. </li><li> Estimular a cultura de órgãos cólon com IL-1β (20 ng / ml) ou IL-18 (20 ng / mL) durante 12 h. Os dois pontos não tratados<html> cultura de órgãos serve como controlo. </li><li> Após 12 h de incubação a 37 ° C numa incubadora de injecção de 5% de CO 2 e 95% de ar, recolher o sobrenadante da cultura em um tubo de 1,5 ml estéril. </li><li> Transferir 500 uL de sobrenadante de cultura em poços duplicados de uma placa de 24 poços. </li><li> Inocular E. coli (1.000 ufc) no cólon órgão sobrenadante de cultura, conforme descrito na Seção 3. Para cada condição, inocular E. coli em um único poço. A outra cavidade contendo sobrenadante de cultura de órgãos mesmo sem E. coli vai servir como um controlo para a contaminação bacteriana. </li><li> Incubar a mesma quantidade de bactérias em meios de cultura sem nenhum antibiótico como um controlo. </li><li> Incubar a 37 ° C durante 1 h. </li><li> Coloque 50 mL de cada amostra gota a gota, em placas de ágar MacConkey. Incubar as placas de agar MacConkey para a noite a 37 ° C. </li><li> Contar o número de colónias e calcular o CFU / mL (Figura 4). </li></ol>e_title &quot;&gt; 5. Medição da expressão de genes antimicrobianos <ol><li> Após incubação durante a noite (12 h) de cultura de órgão do cólon tal como descrito nas secções 2 e 4, lavar as peças do cólon com 2 ml de PBS arrefecido com gelo (2x). </li><li> Recolher as peças do cólon em um tubo livre com tampa de rosca 2 mL RNase / DNase. Colocar os tubos em gelo. </li><li> Adicionar 1 ml de reagente Trizol comercial e lisar os grânulos da matriz para dentro do tubo. </li><li> Lise do tecido utilizando um homogeneizador de tecido automatizada. </li><li> Recolhe-se o lisado de tecido para um novo tubo de microcentrifugação. </li><li> Isolar RNA usando o protocolo padrão. </li><li> Medir a concentração de ARN. </li><li> Diluir apropriadamente ARN com água desionizada e utilizar 500 ng de ARN para sintetizar ADNc. </li><li> Usar o cDNA para a análise em tempo real de RT-PCR dos genes alvo antimicrobianas, citocinas, quimiocinas, e outros genes de interesse. </li></ol>

<ol>
	<li>Maloy, K. J., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+homeostasis+and+its+breakdown+in+inflammatory+bowel+disease.">Intestinal homeostasis and its breakdown in inflammatory bowel disease.</a> Nature. 474, 298-306 (2011).</li><li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Vaishnava, S., Behrendt, C. L., Ismail, A. S., Eckmann, L., Hooper, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells+directly+sense+gut+commensals+and+maintain+homeostasis+at+the+intestinal+host-microbial+interface.">Paneth cells directly sense gut commensals and maintain homeostasis at the intestinal host-microbial interface.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 20858-20863 (2008).</li><li>Kamada, N., Chen, G. Y., Inohara, N., Nunez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+pathogens+and+pathobionts+by+the+gut+microbiota.">Control of pathogens and pathobionts by the gut microbiota.</a> Nat Immunol. 14, 685-690 (2013).</li><li>Wu, H. J., Wu, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+gut+microbiota+in+immune+homeostasis+and+autoimmunity.">The role of gut microbiota in immune homeostasis and autoimmunity.</a> Gut Microbes. 3, 4-14 (2012).</li><li>Zimmerman, N. P., Vongsa, R. A., Wendt, M. K., Dwinell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+chemokine+receptors+in+mucosal+homeostasis+at+the+intestinal+epithelial+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Chemokines and chemokine receptors in mucosal homeostasis at the intestinal epithelial barrier in inflammatory bowel disease.</a> Inflamm Bowel Dis. 14, 1000-1011 (2008).</li><li>Elliott, D. E., Siddique, S. S., Weinstock, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+disease.">Innate immunity in disease.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 12, 749-755 (2014).</li><li>Chopra, D. P., Dombkowski, A. A., Stemmer, P. M., Parker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells+in+vitro.">Intestinal epithelial cells in vitro.</a> Stem Cells Dev. 19, 131-142 (2010).</li><li>Autrup, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+culture+of+human+colon.">Explant culture of human colon.</a> Methods Cell Biol. 21, 385-401 (1980).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+gut+microbial+gene+catalogue+established+by+metagenomic+sequencing.">A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing.</a> Nature. 464, 59-65 (2010).</li><li>Wildenberg, M. E., vanden Brink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+advance+in+ex+vivo+intestinal+organ+culture.">A major advance in ex vivo intestinal organ culture.</a> Gut. 61, 961-962 (2012).</li><li>Leushacke, M., Barker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+the+intestinal+epithelium:+strategies+and+applications.">Ex vivo culture of the intestinal epithelium: strategies and applications.</a> Gut. 63, 1345-1354 (2014).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li><li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease:+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model.">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. 61, 1007-1015 (2012).</li><li>Haque, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+interactions+of+Salmonella+enterica+serovar+typhimurium+with+human+small+intestinal+epithelial+explants.">Early interactions of Salmonella enterica serovar typhimurium with human small intestinal epithelial explants.</a> Gut. 53, 1424-1430 (2004).</li><li>Hicks, S., Candy, D. C., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+enteroaggregative+Escherichia+coli+to+pediatric+intestinal+mucosa+in+vitro.">Adhesion of enteroaggregative Escherichia coli to pediatric intestinal mucosa in vitro.</a> Infect Immun. 64, 4751-4760 (1996).</li><li>Knutton, S., Lloyd, D. R., Candy, D. C., McNeish, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+adhesion+of+enterotoxigenic+Escherichia+coli+to+human+intestinal+epithelial+cells+from+mucosal+biopsies.">In vitro adhesion of enterotoxigenic Escherichia coli to human intestinal epithelial cells from mucosal biopsies.</a> Infect Immun. 44, 514-518 (1984).</li><li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture.">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J Anat. 134, 459-469 (1982).</li><li>Smollett, K., Shaw, R. K., Garmendia, J., Knutton, S., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+distribution+of+EspG2,+a+type+III+secretion+system+effector+of+enteropathogenic+Escherichia+coli.">Function and distribution of EspG2, a type III secretion system effector of enteropathogenic Escherichia coli.</a> Microbes Infect. 8, 2220-2227 (2006).</li><li>Bareiss, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypical+tissue+cultures+from+adult+murine+colon+as+an+in+vitro+model+of+intestinal+mucosa.">Organotypical tissue cultures from adult murine colon as an in vitro model of intestinal mucosa.</a> Histochem Cell Biol. 129, 795-804 (2008).</li><li>Tsilingiri, K., Sonzogni, A., Caprioli, F., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+culture+and+polarized+stimulation+of+human+intestinal+mucosa+explants.">A novel method for the culture and polarized stimulation of human intestinal mucosa explants.</a> J Vis Exp. , e4368 (2013).</li><li>Hu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DNA+Sensor+AIM2+Maintains+Intestinal+Homeostasis+via+Regulation+of+Epithelial+Antimicrobial+Host+Defense.">The DNA Sensor AIM2 Maintains Intestinal Homeostasis via Regulation of Epithelial Antimicrobial Host Defense.</a> Cell Rep. 13, 1922-1936 (2015).</li><li>Moorghen, M., Chapman, M., Appleton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ-culture+method+for+human+colorectal+mucosa+using+serum-free+medium.">An organ-culture method for human colorectal mucosa using serum-free medium.</a> J Pathol. 180, 102-105 (1996).</li><li>Dame, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+colon+tissue+in+organ+culture:+preservation+of+normal+and+neoplastic+characteristics.">Human colon tissue in organ culture: preservation of normal and neoplastic characteristics.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 46, 114-122 (2010).</li><li>Grant, A. J., Woodward, J., Maskell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ex+vivo+organ+culture+model+using+human+gastro-intestinal+tissue+and+Campylobacter+jejuni.">Development of an ex vivo organ culture model using human gastro-intestinal tissue and Campylobacter jejuni.</a> FEMS Microbiol Lett. 263, 240-243 (2006).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

As células do epitélio intestinal são muito sensíveis em termos das suas necessidades de crescimento e, por conseguinte, difícil de cultura. As células epiteliais isoladas por tratamento com EDTA não sobrevivem no meio de cultura celular convencionais, tais como DMEM 8. Portanto, estudos de interação patógeno-hospedeiro usando cripta isolados ou células epiteliais primárias são muito desafiador. Recentemente, Sato et ai. descrito um sistema de cultura organï¿½de cripta, que é mui...

O intestino representa um sistema dinâmico, que actua como uma barreira para os microrganismos comensais, luta contra os agentes patogénicos invasores, e regula a composição microbiana 1. As células epiteliais do intestino, que consiste em enterócitos, células caliciformes, células de Paneth e células enteroendócrinas, são as principais populações de células que fornecem respostas de defesa do hospedeiro contra a microbiota intestinal. As células caliciformes produzir mucinas que criam uma zona desmilitarizada na parte superior da camada epitelial 2. As células de Paneth e enterócitos produzem peptídeos antimicrobianos, citocinas e espécies de oxigênio e nitrogênio reativos que constituem respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos e contribuir para a definição da composição microbiana intestinal 3, 4. Em adição às células epiteliais, as células do sistema imunológico, incluindo macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, células assassinas naturais, os linfócitos e inna<html> células linfóides te na lâmina própria e submucosa desempenhar um papel crítico na resposta de defesa do hospedeiro antimicrobianos intestinais pela produção de citocinas, quimiocinas e outros mediadores 5 - 7. A fim de compreender como o sistema imune da mucosa regula microbiota e fornece protecção contra a infecção microbiana, é importante considerar a interação complexa entre as populações de células heterogéneas do intestino. No entanto, um modelo in vitro que engloba todas as características do intestino não está disponível. Portanto, os estudos moleculares sobre a interação patógeno-hospedeiro no intestino são altamente desafiador. Ao longo dos últimos anos, vários sistemas modelo que mimetizam aspectos da mucosa intestinal tem sido desenvolvido para investigar os processos patofisiológicos envolvidos em doenças inflamatórias do intestino (IBD) e outras desordens gastrointestinais 8 -= &quot;xref&quot;&gt; 14. linhas de células epiteliais intestinais imortalizadas são muitas vezes usadas para estudar as respostas específicas de células epiteliais. No entanto, por causa da expressão diferencial de genes e função de células imortalizadas, os dados obtidos a partir de células usando esses muitas vezes não coincidir com os observados em estudos in vivo. Cripta intestinal organï¿½de cultura surgiu recentemente como um potencial instrumento para avaliar a resposta do epitélio intestinal a diferentes estímulos 13. Neste sistema, as células estaminais criptas são deixadas a crescer e a desenvolver uma estrutura organï¿½de 3D. Enquanto o sistema de cultura organï¿½de é muito útil para estudar muitos aspectos do epitélio intestinal, ele não imitam o complexo interacção de células do sistema imunológico, células epiteliais e produtos microbianos. A cultura ex vivo do tecido intestinal oferece uma melhor representação in vivo de respostas de defesa do hospedeiro. Neste método, uma parte do intestino é cultivada numa placa de cultura de células with meios adequados que permitem que os diferentes tipos de populações de células no intestino para ser metabolicamente activa durante pelo menos 48 h. Assim, uma cultura ex vivo do órgão pode ser utilizado para medir a expressão de genes antimicrobianos e as respostas de defesa do hospedeiro do intestino a um estímulo específico. Os investigadores têm vindo a utilizar o sistema de cultura ex vivo de órgãos para estudar as respostas de defesa do hospedeiro contra a infecção microbiana no intestino 15-21. Nós recentemente adoptado o sistema de cultura de órgãos para estudar o papel da inflammasome nas respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos em dois pontos do rato 22. O inflamassoma é uma plataforma molecular para a activação de caspase-1, o que é necessário para a produção de IL-1β amadurecido e IL-18. Mostrámos que a IL-1β e IL-18 induzem péptidos antimicrobianos que matam eficazmente pathobionts comensais, tais como E. coli </em&gt;. Esta observação foi consistente com aumento da carga E. coli em dois pontos do rato inflammasome defeituoso 22. Este sistema, por conseguinte, pode ser utilizado para estudar o papel de receptores de reconhecimento de padrões (PRRs) e outras moléculas imunitárias inatas em respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos intestinais, bem como patogénese de desordens intestinais, tais como doença inflamatória do intestino (IBD) e cancro colorrectal (CRC). Existem mais de 200 genes de susceptibilidade, IBD e mutações em muitos destes genes estão associados com a composição microbiana alterada no intestino. É de grande importância clínica para determinar o mecanismo preciso através do qual os genes de susceptibilidade IBD-regular a flora intestinal. O objectivo geral do presente método é a introdução de um protocolo básico de cultura de órgãos ex vivo do cólon e demonstrar como este método de cultura pode ser usado para estudar as respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos do intestino.

<table><tbody><tr><td>Advanced DMEM/ F12</td><td>Life Technologies</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s phosphate buffered saline, modified, w/o Calcium chloride &amp;amp; Magnesium chloride</td><td>Sigma</td><td>5634</td><td></td></tr><tr><td>FBS, heat inactivated</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin solution</td><td>Sigma</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-1b recombinan</td><td>Reprokine</td><td>RKP10749</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-18 recombinant</td><td>Reprokine</td><td>RKP70380</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Difco Luria-Bertani Broth&amp;nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>BD&amp;nbsp;Difco Dehydrated Culture Media: MacConkey Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0075-17-1</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 Spectrophotometer</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Uded to measure RNA concentration</td></tr><tr><td>UV/Vis Spectrophotometer</td><td>BECKMAN</td><td>DU 530</td><td>Used to determine E. coli count</td></tr><tr><td>iScript RT Supermix, 100 rxns</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td></td></tr><tr><td>iTaq Univer SYBR Green Supermix&amp;nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1725125&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lysing Matrix S (1/8&quot;), 2 ml Tube</td><td>MP Biomedicals</td><td>116925500</td><td>Used to homgenize colon organ for RNA isolation</td></tr><tr><td>FastPrep-24 5G System</td><td>Bio-Rad</td><td>116005500</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 15 mm Petri Dish</td><td>Falcon</td><td>5687</td><td></td></tr><tr><td>Plate 6 well ps TC CS100, Cellstar, 6w, tc, F-bottom (Flat), w/lid, sterile</td><td>Cellstar</td><td>5085</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;mu;m cell strainer</td><td>Falcon</td><td>5698</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 21R Centrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST40R Centrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forma Scientific orbital shaker</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the ex vivo colon organ culture and its use in antimicrobial host defense studies

O intestino tem uma arquitectura de estruturas cripta repetitivas que consistem em diferentes tipos de células epiteliais, lâmina própria contendo células do sistema imunológico, e estroma. Todas estas células heterogéneas contribuem para a homeostase intestinal e participar na defesa do hospedeiro antimicrobiana. Portanto, a identificação de um modelo substituto para estudar a resposta imune e atividade antimicrobiana do intestino em um ambiente in vitro é extremamente desafiador. Os estudos in vitro utilizando linhas de células epiteliais do intestino imortalizadas ou cripta mesmo primária organï¿½de cultura não representam a fisiologia exata do intestino normal e seu microambiente. Aqui, nós discutimos um método de cultura de tecido do cólon do rato numa placa de cultura e como este sistema de cultura ex vivo de órgãos pode ser implementado em estudos relacionados com as respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos. Em experiências representativas, que mostrou que dois pontos em cultura de órgão expressar peptídeos antimicrobianos em response de IL-1β e IL-18. Além disso, as moléculas efectoras antimicrobianos produzidos pelos tecidos do cólon em cultura de órgãos a matar eficientemente Escherichia coli in vitro. Esta abordagem, portanto, pode ser utilizada para dissecar o papel de padrões moleculares pathogen- e associada ao perigo e os seus receptores celulares na regulação de respostas imunes inatas intestinais e as respostas de defesa do hospedeiro antimicrobianos.

Uma imagem representativa de dois pontos em cultura de órgãos é mostrado na Figura 1. As peças do cólon na cultura permanecem metabolicamente e fisiologicamente ativa. Eles responder de forma eficiente aos estímulos exógenas adicionadas ao meio de cultura. Um fluxo da preparação do tecido do cólon para a cultura ex vivo e estimulação com estímulos exógenos, por exemplo, IL-1β e IL-18 de trabalho esquemática, é mostrado na Figura...

Watch this Scientific Journal Video about The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies at JoVE.com

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The ex vivo organ culture allows investigation of biological processes in the context of the intact tissue architecture. Here, we introduce a method of ex vivo culture of the mouse colon, which can be used to study innate immunity and antimicrobial host defense in the intestine.

o<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Órgão Cultura Colon e seu uso em Antimicrobial host Estudos de Defesa

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

the-ex-vivo-colon-organ-culture-its-use-antimicrobial-host-defense

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

14.0K visualizações.  UT Southwestern Medical Center. The ex vivo organ culture allows investigation of biological processes in the context of the intact tissue architecture. Here, we introduce a method of ex vivo culture of the mouse colon, which can be used to study innate immunity and antimicrobial host defense in the intestine. 

Vídeo: The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the gastrointestinal tract, as resident microbiota occurs and prevents colonisation by exogenous bacteria. Indeed, more than 600 species of bacteria are found in the oral cavity, and a single individual may carry around 100 different at any time. Oral bacteria possess the ability to adhere to the various niches in the oral ecosystem, thus becoming integrated within the resident microbial communities, and favouring growth and survival. However, the flow of bacteria into the gut during swallowing has been proposed to disturb the balance of the gut microbiota. In fact, oral administration of P. gingivalis shifted bacterial composition in the ileal microflora. We used a synthetic community as a simplified representation of the natural oral ecosystem, to elucidate the survival and viability of oral bacteria subjected to simulated gastrointestinal transit conditions. Fourteen species were selected, subjected to in vitro salivary, gastric, and intestinal digestion processes, and presented to a multicompartment cell model containing Caco-2 and HT29-MTX cells to simulate the gut mucosal epithelium. This model served to unravel the impact of swallowed bacteria on cells involved in the enterohepatic circulation. Using synthetic communities allows for controllability and reproducibility. Thus, this methodology can be adapted to assess pathogen viability and subsequent inflammation-associated changes, colonization capacity of probiotic mixtures, and ultimately, potential bacterial impact on the presystemic circulation.

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Gut host-microbe interactions were assessed using a novel approach combining a synthetic oral community, in vitro gastrointestinal digestion, and a model of the small intestine epithelium. We present a method that can be adapted to evaluate cell invasion of pathogens and multi-species biofilms, or even to test probiotic formulations&#39; survivability.

Avaliação da viabilidade de um consórcio bacteriano sintético na Interface Host-micróbio em Vitro Gut

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Bioquímica

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

Several human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical polarity, ability to differentiate, and anoikis are not maintained in colon cancer derived cell lines. The present study demonstrates a method for culturing primary mouse colon tumor organoids adapted from Sato T et al. 1, which retains important physiologic features of colon tumors. This method consists of mouse colon tumor tissue collection, adjacent normal colon epithelium dissociation, colon tumor cells digestion into single cells, embedding colon tumor cells into matrigel, and selective culture based on the principle that tumor cells maintain growth on limiting nutrient conditions compared to normal epithelial cells.
The primary tumor organoids if isolated from genetically modified mice provide a very useful system to assess tumor autonomous function of specific genes. Moreover, the tumor organoids are amenable to genetic manipulation by virus meditated gene delivery; therefore signaling pathways involved in the colon tumorigenesis could also be extensively investigated by overexpression or knockdown. Primary tumor organoids culture provides a physiologic relevant and feasible means to study the mechanisms and therapeutic modalities for colon tumorigenesis.

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

A simple method to establish primary murine colon tumor organoid is described. This method utilizes the feature that colon tumor cells survive and grow into organoids in media containing limited growth factors, whereas normal colon epithelial do not.

Em organoide Cultura in vitro de primário do mouse tumores do cólon

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Medicina

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of the crypt region. IESCs include active stem cells, which self-renew and differentiate into various epithelial cell types, and quiescent stem cells, which serve as the reserve stem cells in the case of injury. Regeneration of the intestinal epithelium is controlled by the self-renewing and differentiating capabilities of these active IESCs. In addition, the balance of the crypt stem cell population and maintenance of the stem cell niche are essential for intestinal regeneration. Organoid culture is an important and attractive approach to studying proteins, signaling molecules, and environmental cues that regulate stem cell survival and functions. This model is less expensive, less time-consuming, and more manipulatable than animal models. Organoids also mimic the tissue microenvironment, providing in vivo relevance. The present protocol describes the isolation of colonic crypts, embedding these isolated crypt cells into a three-dimensional gel matrix system and culturing crypt cells to form colonic organoids capable of self-organization, proliferation, self-renewal, and differentiation. This model allows one to manipulate the environment-knocking out specific proteins such as claudin-7, activating/deactivating signaling pathways, etc.-to study how these effects influence the functioning of colonic stem cells. Specifically, the role of tight junction protein claudin-7 in colonic stem cell function was examined. Claudin-7 is vital for maintaining intestinal homeostasis and barrier function and integrity. Knockout of claudin-7 in mice induces an inflammatory bowel disease-like phenotype exhibiting intestinal inflammation, epithelial hyperplasia, weight loss, mucosal ulcerations, epithelial cell sloughing, and adenomas. Previously, it was reported that claudin-7 is required for intestinal epithelial stem cell functions in the small intestine. In this protocol, a colonic organoid culture system is established to study the role of claudin-7 in the large intestine.

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The present protocol describes establishing a murine colonic organoid system to study the activity and functioning of colonic stem cells in a claudin-7 knockout model.

Cultura tridimensional de criptas colônicas murinas para estudar a função das células-tronco intestinais ex vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...

Pesquisa do câncer

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

o<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultura e Reconhecimento de Padrões Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organóides

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

Imunologia e Infecção

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal epithelium. Due to their closed structures and significant supporting extracellular matrix, 3D cultures are not ideal for host-pathogen studies. Enteroids or colonoids can be grown as epithelial monolayers on permeable tissue culture membranes to allow manipulation of both luminal and basolateral cell surfaces and accompanying fluids. This enhanced luminal surface accessibility facilitates modeling bacterial-host epithelial interactions such as the mucus-degrading ability of enterohemorrhagic E. coli (EHEC) on colonic epithelium. A method for 3D culture fragmentation, monolayer seeding, and transepithelial electrical resistance (TER) measurements to monitor the progress towards confluency and differentiation are described. Colonoid monolayer differentiation yields secreted mucus that can be studied by the immunofluorescence or immunoblotting techniques. More generally, enteroid or colonoid monolayers enable a physiologically-relevant platform to evaluate specific cell populations that may be targeted by pathogenic or commensal microbiota.

Here, we present a protocol to culture human enteroid or colonoid monolayers that have intact barrier function to study host epithelial-microbiota interactions at the cellular and biochemical level.

Colonoid humana monocamadas para estudar interações entre epitélio Intestinal do hospedeiro, comensais e patógenos

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...

A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

Few models currently exist to realistically simulate the complex human intestine's micro-environment, where a variety of interactions take place. Proper homeostasis directly depends on these interactions, as they shape an entire immunological response inducing tolerance against food antigens while at the same time mounting effective immune responses against pathogenic microbes accidentally ingested with food.
Intestinal homeostasis is preserved also through various complex interactions between the microbiota (including food-associated beneficial bacterial strains) and the host, that regulate the attachment/degradation of mucus, the production of antimicrobial peptides by the epithelial barrier, and the "education" of epithelial cells' that controls the tolerogenic or immunogenic phenotype of unique, gut-resident lymphoid cells' populations. These interactions have been so far very difficult to reproduce with in vitro assays using either cultured cell lines or peripheral blood mononuclear cells. In addition, mouse models differ substantially in components of the intestinal mucosa (mucus layer organization, commensal bacteria community) with respect to the human gut. Thus, studies of a variety of treatments to be brought in the clinics for important stress-related or pathological conditions such as irritable bowel syndrome, inflammatory bowel disease or colorectal cancer have been difficult to carry out.
To address these issues, we developed a novel system that enables us to stimulate explants of human intestinal mucosa that retain their in situ conditioning by the host microbiota and immune response, in a polarized fashion. Polarized apical stimulation is of great importance for the outcome of the elicited immune response. It has been repeatedly shown that the same stimuli can produce completely different responses when they bypass the apical face of the intestinal epithelium, stimulating epithelial cells basolaterally or coming into direct contact with lamina propria components, switching the phenotype from tolerogenic to immunogenic and causing unnecessary and excessive inflammation in the area.
We achieved polarized stimulation by gluing a cave cylinder which delimited the area of stimulation on the apical face of the mucosa as will be described in the protocol. We used this model to examine, among others, differential effects of three different Lactobacilli strains. We show that this model system is very powerful to assess the immunomodulatory properties of probiotics in healthy and disease conditions.

We introduce a novel method for the maintenance of human intestinal mucosa in culture and monitoring of the response to various types of stimuli over at least 24 hrs. With our method, the polarity of the tissue is maintained, allowing for a physiological stimulation via the apical route.

Um novo método para a Cultura e polarizada Estimulação dos Humanos explantes mucosa intestinal

Few models currently exist to realistically simulate the complex human intestine's micro-environment, where a variety of interactions take place. Proper ...

Biologia

An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for maintaining local and systemic homeostasis; changes to gut microbiota composition (dysbiosis) associate with a wide array of human diseases. Methods for dissecting host-microbiota interactions encompass an inherent tradeoff among preservation of physiological tissue structure (when using in vivo animal models) and the level of control over the experiment factors (as in simple in vitro cell culture systems). To address this tradeoff, Yissachar et al. recently developed an intestinal organ culture system. The system preserves a naive colon tissue construction and cellular mechanisms and it also permits tight experimental control, facilitating experimentations that cannot be readily performed in vivo. It is optimal for dissecting short-term responses of various gut components (such as epithelial, immunological and neuronal elements) to luminal perturbations (including anaerobic or aerobic microbes, whole microbiota samples from mice or humans, drugs and metabolites). Here, we present a detailed description of an optimized protocol for organ culture of multiple gut fragments using a custom-made gut culture device. Host responses to luminal perturbations can be visualized by immunofluorescence staining of tissue sections or whole-mount tissue fragments, fluorescence in-situ hybridization (FISH), or time-lapse imaging. This system supports a wide array of readouts, including next-generation sequencing, flow cytometry, and various cellular and biochemical assays. Overall, this three-dimensional organ culture system supports the culture of large, intact intestinal tissues and has broad applications for high-resolution analysis and visualization of host-microbiota interactions in the local gut environment.

This article presents a unique method for analyzing host-microbiome interactions using a novel gut organ culture system for ex vivo experiments.

Um sistema de cultura de órgãos intestinais para analisar interações hospedeira-microbiota

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

Efeitos epiteliais da inflamação intestinal em colonoides murinos estabelecidos

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic cell layer provides the first line of defense between microbial and immune populations and helps to modulate the intestinal immune response. Disruption of the epithelial barrier is a hallmark of inflammatory bowel disease (IBD) and is of interest for therapeutic targeting. The 3-dimensional colonoid culture system is an extremely useful in vitro model for studying intestinal stem cell dynamics and epithelial cell physiology in IBD pathogenesis. Ideally, establishing colonoids from the inflamed epithelial tissue of animals would be most beneficial in assessing the genetic and molecular influences on disease. However, we have shown that in vivo epithelial changes are not necessarily retained in colonoids established from mice with acute inflammation. To address this limitation, we have developed a protocol to treat colonoids with a cocktail of inflammatory mediators that are typically elevated during IBD. While this system can be applied ubiquitously to various culture conditions, this protocol emphasizes treatment on both differentiated colonoids and 2-dimensional monolayers derived from established colonoids. In a traditional culture setting, colonoids are enriched with intestinal stem cells, providing an ideal environment to study the stem cell niche. However, this system does not allow for an analysis of the features of intestinal physiology, such as barrier function. Further, traditional colonoids do not offer the opportunity to study the cellular response of terminally differentiated epithelial cells to proinflammatory stimuli. The methods presented here provide an alternative experimental framework to address these limitations. The 2-dimensional monolayer culture system also offers an opportunity for therapeutic drug screening ex vivo. This polarized layer of cells can be treated with inflammatory mediators on the basal side of the cell and concomitantly with putative therapeutics apically to determine their utility in IBD treatment.

Autor em destaque: estudando os efeitos epiteliais da inflamação intestinal in vitro em colonoides murinos estabelecidos  

We describe a protocol detailing the isolation of murine colonic crypts for the development of 3-dimensional colonoids. The established colonoids can then be terminally differentiated to reflect the cellular composition of the host epithelium prior to receiving an inflammatory challenge or being directed to establish an epithelial monolayer.

Estudando os Efeitos Epiteliais da Inflamação Intestinal In Vitro em Colonóides Murinos Estabelecidos

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...

o

Resumo

Explore mais vídeos

Capítulos neste vídeo

Avaliação da viabilidade de um consórcio bacteriano sintético na Interface Host-micróbio em Vitro Gut

Em organoide Cultura in vitro de primário do mouse tumores do cólon

Cultura tridimensional de criptas colônicas murinas para estudar a função das células-tronco intestinais ex vivo

o

Colonoid humana monocamadas para estudar interações entre epitélio Intestinal do hospedeiro, comensais e patógenos

Um novo método para a Cultura e polarizada Estimulação dos Humanos explantes mucosa intestinal

Um sistema de cultura de órgãos intestinais para analisar interações hospedeira-microbiota

Estudando os Efeitos Epiteliais da Inflamação Intestinal In Vitro em Colonóides Murinos Estabelecidos

Estudando os Efeitos Epiteliais da Inflamação Intestinal In Vitro em Colonóides Murinos Estabelecidos

Estudando os Efeitos Epiteliais da Inflamação Intestinal In Vitro em Colonóides Murinos Estabelecidos