A pressão constante dentro do dispositivo de fixação mantém os pulmões em um estado razoavelmente inflado gerando um espécime pulmonar histológico adequado para avaliar enfisema leve induzido pela fumaça do cigarro. A principal vantagem deste modelo é que ele pode consertar muitos pulmões ao mesmo tempo usando a mesma pressão constante sem colapso pulmonar ou deflação. Demonstrando o procedimento será Naoko Arano uma estudante de pós-graduação do meu laboratório.
Depois de confirmar a falta de resposta ao movimento reflexo fazer uma incisão na pele e tecido muscular ao longo da linha medial do camundongo, visando a região cefálica, e cortar lateralmente para criar um espaço de trabalho mais amplo. Depois de expor a camada de diafragma perfurar o tecido com fórceps e abrir o espaço torácico. Corte a área severa permitindo que os pulmões e o coração sejam visualizados.
E corte o átrio esquerdo e o ventrículo direito. Insira uma cânula de 24 bitola conectada a uma bomba de perfusão na área do ventrículo direito e direcione a cânula para a área cefálica até atingir a artéria pulmonar. Em seguida, ligue a bomba e perfunda o tecido com aproximadamente 200 mililitros de PBS por uma hora até que todo o tecido pulmonar tenha mudado para uma cor branca.
No final da perfusão corte o tecido conjuntivo ao redor da traqueia, pulmões e coração, e use uma sutura para amarrar o brônquio principal direito. Em seguida, colher todos os lóbulos individuais do pulmão direito e colocar o coração e os lóbulos do pulmão esquerdo em seringas individuais de 10 mililitros contendo um fixador apropriado. Retraia o êmbolo criando um vácuo na seringa para inflar os pulmões e remover o pulmão da seringa.
Insira uma cânula de 20 bitolas na traqueia e use uma sutura para fixar a cânula no lugar. Conecte uma seringa de um mililitro cheia de fixação à cânula e encha o pulmão com fixação adicional para verificar se há vazamentos. Certifique-se de que o local de inserção foi fixado para evitar que a amostra pulmonar se desprende da placa pulmonar durante a fixação.
Em seguida, transfira o tecido para o equipamento de pressão de fixação pulmonar, removendo a amostra e amarrando a traqueia com um nó no final do período de fixação. O componente inferior do equipamento de pressão de fixação pulmonar no qual a amostra pulmonar está inserida está conectado através de 20 bitolas de bitola à ponta do fluxo de formalina com uma torneira de três vias. A pressão é gerada a partir dos diferentes níveis de superfície do fixador entre os compartimentos inferior e superior.
A diferença de pressão é de 25 centímetros de água, mas o botão de ajuste de altura pode ser usado para ajustar a pressão para entre 25 e 30 centímetros de água. Uma bomba conecta os recipientes inferiores e superiores, preservando uma diferença de 25 centímetros na altura da superfície fixa, e direciona o fluxo do agente. Após 48 horas de fixação, os pulmões de ratos eliminatórios SMP30 expostos ao ar ambiente não exibem um alargamento marcado do espaço aéreo.
O alargamento significativo do espaço aéreo e a destruição da parede alveolar, no entanto, são observados em camundongos eliminatórios SMP30 expostos à fumaça crônica do cigarro. Além disso, a interceptação linear média e o índice destrutivo dos espécimes pulmonares são significativamente maiores na fumaça exposta smp30 ratos nocaute do que no ar expostos animais. Nosso laboratório usa 10% de formalina, mas os pesquisadores podem usar outros agentes de fixação de acordo com suas necessidades experimentais.
Como relatamos usando o sistema de fixação demonstrado, amostras pulmonares podem ser colhidas de vários modelos de enfisema de camundongos para sua avaliação morfométrica. Como os agentes de fixação podem ser perigosos sempre use os equipamentos de proteção pessoal adequados e trabalhem em uma sala bem ventilada.
