Essa metodologia pode ser usada para gerar tumores de bexiga reprodutivelmente usando o cancerígeno BBN e para imaginar o tamanho e extensão da carga tumoral da bexiga através da ressonância magnética. Esta técnica utiliza uma abordagem de imagem rápida independente do operador com curtos tempos de aquisição em alta qualidade diagnóstica para realizar ensaios de alto rendimento de camundongos em estágios intermediários de desenvolvimento de tumores. Para induzir a formação de tumores de câncer de bexiga, adicione 0,05% BBN a um recipiente de água potável opaco e forneça a água para c57 preto de 6 semanas de idade seis camundongos ad libitum.
Em seguida, monitore os animais duas vezes por semana para sinais de aflição associados a tumores de bexiga de acordo com as diretrizes locais da IACUC. 16 a 24 semanas após a exposição, carregue uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 25 a 27 com 100 a 200 microliters de soro fisiológico e injete o soro fisiológico subcutâneamente em um animal tratado com BBN. Após 10 minutos, transfira o mouse para o suporte de imagem de imagem de ressonância magnética e insira uma sonda de temperatura retal conectada ao computador de gravação fisiológica para monitorar a temperatura corporal do animal.
Em seguida, coloque uma bobina receptora de quadratura de 4 canais sobre o abdômen inferior do mouse e inicie ajustes automáticos no software de imagem integrado para adquirir um conjunto triaxial de imagens de todo o corpo do mouse. A partir deste conjunto de referência de imagens, identifique a região de interesse e adquira três conjuntos de imagens fatiadas ortogonais ao longo dos planos axial, coronal e sagital. Usando a imagem real e rápida com sequência de imagem de progressão de estado estável, defina o TR para 900 milissegundos, o TE para dois milissegundos, e o FA para 70, 14 médias.
Em seguida, selecione os parâmetros geométricos apropriados dentro do software da plataforma de imagem para obter uma série de fatias em toda a bexiga de 0,5 mililitros de espessura e uma resolução no plano de 0,148 milímetros. Quando todas as imagens tiverem sido obtidas, exporte o conjunto de fatias que cobrem toda a bexiga para um programa de software de análise de imagem médica adequado e role as imagens geradas para localizar uma fatia no ponto médio da bexiga que permite a visualização da bexiga e do lúmen para selecionar a visão axial representativa no centro da bexiga para análise quantitativa. Em seguida, rastreie os limites ao redor da borda externa e do lúmen interno da bexiga para delinear cuidadosamente a região de interesse dentro da vista axial representativa selecionada e subtrair o lúmen interno da borda externa para calcular a área superficial da parede da bexiga.
20 semanas após a exposição ao BBN, limpe a área de incisão com 70% de etanol e use fórceps para levantar a pele da parede abdominal. Faça uma incisão midline da sífise púbica para o processo xifoide e segure o peritônio para permitir uma incisão acentuada da cavidade peritônica. Identifique a bexiga no abdômen inferior da linha média, usando fórceps para agarrar a cúpula da bexiga.
Dissecar a bexiga longe das estruturas circundantes, incluindo as vesículas seminal, o reto e a gordura. Corte o ligamento umbilical mediano ligando a cúpula da bexiga ao umbigo e à parede abdominal. Corte os ureteres perto da bexiga e levante a cefaleia da bexiga, corte a uretra para remover a bexiga.
Em seguida, enxágue a bexiga excisada com PBS e pesar imediatamente o tecido em um equilíbrio. Aqui, são mostradas imagens representativas de imagens rápidas de ressonância magnética de progressão de estado constante de reconstruções da parede da bexiga 3D e imagens patológicas de um rato com um tumor grande e de um rato de controle sem tumor. A espessura da parede da bexiga derivada da ressonância magnética se correlaciona semanalmente com as medidas de peso da bexiga obtidas ex-vivo.
O exame da espessura da parede da bexiga derivada da ressonância magnética e os dados de peso da bexiga obtidos ex-vivo também demonstram associação com o estágio tumoral, bem como uma associação ao estratificar a patologia por câncer de bexiga invasivo não muscular e câncer de bexiga invasivo muscular. Tenha em mente que é melhor adquirir as imagens em camundongos quando eles têm uma bexiga cheia. Após a imagem de RESSONÂNCIA magnética dos tumores da bexiga, os camundongos podem ser divididos em coortes com características tumorais semelhantes, conforme apropriado.
Essa técnica permite que os pesquisadores explorem novas imunoterapias e outros tratamentos para melhorar os resultados de nossos pacientes. É importante lembrar que o BBN é um cancerígeno e que a precaução adequada deve ser sempre tomada ao manusear este composto.
