Questa metodologia può essere utilizzata per generare riproducibilmente tumori della vescica usando l'agente cancerogeno BBN e per immaginare le dimensioni e l'estensione del peso del tumore della vescica attraverso la risonanza prima. Questa tecnica utilizza un approccio di imaging rapido indipendente dall'operatore con brevi tempi di acquisizione ad alta qualità diagnostica per condurre test ad alta produttività dei topi nelle fasi intermedie dello sviluppo tumorale. Per indurre la formazione di tumori del cancro alla vescica, aggiungere lo 0,05% di BBN a un contenitore opaco di acqua potabile e fornire l'acqua ai sei topi neri C57 di 6 settimane ad libitum.
Quindi monitorare gli animali due volte a settimana per il segno di angoscia associato ai tumori della vescica in conformità con le linee guida locali della IACUC. Da 16 a 24 settimane dopo l'esposizione, caricare una siringa millilitro dotata di un ago calibro da 25 a 27 con da 100 a 200 microlitri di soluzione salina sterile e iniettare la soluzione salina sottocutaneamente in un animale trattato con BBN. Dopo 10 minuti, trasferire il mouse nel supporto di imaging di un dispositivo di imaging a risonanza magnetica e inserire una sonda di temperatura rettale collegata al computer di registrazione fisiologico per monitorare la temperatura corporea dell'animale.
Quindi, posizionare una bobina del ricevitore di quadratura a 4 canali sopra l'addome inferiore del mouse e avviare regolazioni automatiche nel software di imaging integrato per acquisire un set triassiale di immagini di tutto il corpo del mouse. Da questo insieme di riferimenti di immagini, identificare la regione di interesse e acquisire tre serie di immagini affettate ortogonali lungo i piani assiale, coronale e sagittale. Utilizzando la vera immagine veloce con sequenza di imaging di progressione in stato stazionato, impostare tr su 900 millisecondi, TE su due millisecondi e fa su 70, 14 medie.
Quindi selezionare i parametri geometrici appropriati all'interno del software della piattaforma di imaging per ottenere una serie di fette su tutta la vescica di spessore di 0,5 millilitri e una risoluzione in piano di 0,148 millimetri. Una volta ottenute tutte le immagini, esportare il set di fette che coprono l'intera vescica in un appropriato programma software di analisi delle immagini mediche e scorrere le immagini generate per individuare una fetta nel punto centrale della vescica che consente la visualizzazione della parete della vescica e del lume per selezionare la vista assiale rappresentativa al centro della vescica per l'analisi quantitativa. Quindi traccia i confini attorno al bordo esterno e al lume interno della vescica per delineare attentamente la regione di interesse all'interno della vista assiale rappresentativa selezionata e sottrarre il lume interno dal bordo esterno per calcolare l'area di superficie della parete della vescica.
20 settimane dopo l'esposizione al BBN, pulire l'area di incisione con il 70% di etanolo e utilizzare le forcep per sollevare la pelle della parete addominale. Fare un'incisione della linea mediana dalla sinfisi pubica al processo xifoide e afferrare il peritoneo per consentire una forte incisione della cavità peritoneale. Identificare la vescica nell'addome inferiore della linea mediana, usando le forcep per afferrare la cupola della vescica.
Sezionare la vescica lontano dalle strutture circostanti, comprese le vescicole seminali, il retto e il grasso. Tagliare il legamento ombelicale mediano che collega la cupola della vescica all'ombelicale e alla parete addominale. Tagliare gli ureteri vicino alla vescica e sollevare il cefalato vescica, tagliare l'uretra per rimuovere la vescica.
Quindi sciacquare la vescica asportata con PBS e pesare immediatamente il tessuto su un bilanciere. Qui, vengono mostrate immagini rappresentative di risonanza magnetica a progressione dello stato stazionario delle ricostruzioni 3D della parete della vescica e immagini patologiche di un topo con un grande tumore e di un topo di controllo senza tumore. Lo spessore della parete vescicale derivato dalla risonanza magnetica è correlato settimanalmente con le misurazioni del peso della vescica ottenute ex vivo.
L'esame dello spessore della parete vescicale derivato dalla risonanza prima e dei dati del peso della vescica ottenuti ex vivo dimostra anche un'associazione con lo stadio tumorale e un'associazione quando si stratifica la patologia da cancro alla vescica invasivo non muscolare e cancro della vescica invasivo muscolare. Tieni presente che è meglio acquisire le immagini nei topi quando hanno una vescica piena. Dopo l'imaging MR dei tumori della vescica, i topi possono essere divisi in coorti con caratteristiche tumorali simili, a caso.
Questa tecnica consente ai ricercatori di esplorare nuove immunoterapie e altri trattamenti per migliorare i risultati per i nostri pazienti. È importante ricordare che il BBN è cancerogeno e che la precauzione appropriata deve sempre essere presa quando si maneggia questo composto.
