Diese Methode kann verwendet werden, um Blasentumoren mit dem BBN-Karzinogen reproduzierbar zu erzeugen und die Größe und Erweiterung der Blasentumorbelastung durch MRT abzubilden. Diese Technik verwendet einen bedienerunabhängigen Schnellbildansatz mit kurzen Erfassungszeiten in hoher diagnostischer Qualität, um Hochdurchsatztests von Mäusen in Zwischenstadien der Tumorentwicklung durchzuführen. Um die Bildung von Blasenkrebstumoren zu induzieren, fügen Sie 0,05%BBN zu einem undurchsichtigen Trinkwasserbehälter hinzu und geben Sie das Wasser für 6 Wochen alte C57 schwarze sechs Mäuse ad libitum.
Dann überwachen Sie die Tiere zweimal pro Woche auf Anzeichen von Not im Zusammenhang mit Blasentumoren in Übereinstimmung mit den lokalen IACUC-Richtlinien. 16 bis 24 Wochen nach der Exposition eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 25 bis 27-Spurnadel mit 100 bis 200 Mikroliter na-Steril-Saline beladen und die Saline subkutan in ein BBN-behandeltes Tier injizieren. Übertragen Sie die Maus nach 10 Minuten in den bildgebenden Halter eines Magnetresonanzbildners und legen Sie einen rektalen Temperaturfühler ein, der mit dem physiologischen Aufzeichnungscomputer verbunden ist, um die Körpertemperatur des Tieres zu überwachen.
Als nächstes legen Sie eine 4-Kanal-Quadratur-Empfängerspule über den Unterbauch der Maus und initiieren sie automatische Anpassungen in der integrierten Bildgebungssoftware, um einen triaxialen Satz von Bildern des gesamten Mauskörpers zu erfassen. Identifizieren Sie aus diesem Referenzsatz den Interessenbereich und erfassen Sie drei Sätze orthogonal geschnittener Bilder entlang der axialen, koronalen und sagittalen Ebenen. Mit der echten schnellen Bildgebung mit stationärer Progressions-Bildsequenz stellen Sie den TR auf 900 Millisekunden, den TE auf zwei Millisekunden und den FA auf 70, 14 Durchschnitte.
Wählen Sie dann die entsprechenden geometrischen Parameter innerhalb der Imaging-Plattform-Software aus, um eine Reihe von Scheiben über die gesamte Blase mit einer Dicke von 0,5 Millilitern und einer In-Plane-Auflösung von 0,148 Millimetern zu erhalten. Wenn alle Bilder erhalten sind, exportieren Sie den Satz von Scheiben, die die gesamte Blase abdecken, in ein geeignetes medizinisches Bildanalyse-Softwareprogramm und scrollen Sie durch die erzeugten Bilder, um eine Scheibe in der Mitte der Blase zu finden, die die Visualisierung der Blasenwand und des Lumens ermöglicht, um die repräsentative axiale Ansicht in der Mitte der Blase für die quantitative Analyse auszuwählen. Verfolgen Sie dann die Grenzen um den äußeren Rand und das innere Lumen der Blase, um den Interessenbereich innerhalb der ausgewählten repräsentativen axialen Ansicht sorgfältig abzugrenzen und das innere Lumen von der äußeren Kante zu subtrahieren, um die Oberfläche der Blasenwand zu berechnen.
20 Wochen nach DER BBN-Exposition reinigen Sie den Einschnittbereich mit 70% Ethanol und verwenden Sie Zangen, um die Bauchwandhaut zu heben. Machen Sie einen Mittellinienschnitt von der Schamsymphyse zum xiphoiden Prozess und greifen Sie das Peritoneum, um einen scharfen Schnitt der Peritonealhöhle zu ermöglichen. Identifizieren Sie die Blase in der Mittellinie Unterbauch, mit Zangen, um die Kuppel der Blase zu greifen.
Sezieren Sie die Blase weg von den umgebenden Strukturen einschließlich der Samenbläschen, Rektum, und Fett. Schneiden Sie das mittlere Nabelband, das die Kuppel der Blase mit dem Nabel und der Bauchwand verbindet. Schneiden Sie die Harnleiter in der Nähe der Blase und heben Sie die Blase Cephalad, schneiden Sie die Harnröhre, um die Blase zu entfernen.
Dann spülen Sie die ausgeschnittene Blase mit PBS und wiegen Sie sofort das Gewebe auf einem Gleichgewicht. Hier werden repräsentative, echte schnelle Bildgebung mit stationären Progressions-Magnetresonanzbildern von Blasenwand-3-D-Rekonstruktionen und pathologischen Bildern einer Maus mit einem großen Tumor und einer Kontrollmaus ohne Tumor gezeigt. Die aus der Magnetresonanztomographie abgeleitete Blasenwanddicke korreliert wöchentlich mit den ex-vivo erhaltenen Blasengewichtsmessungen.
Die Untersuchung der MRT-abgeleiteten Blasenwanddicke und der ex-vivo erhaltenen Blasengewichtsdaten zeigen auch einen Zusammenhang mit dem Tumorstadium sowie einen Zusammenhang bei der Schichtung der Pathologie durch nicht-muskelinvasiven Blasenkrebs und muskelinvasiven Blasenkrebs. Denken Sie daran, dass es am besten ist, die Bilder bei Mäusen zu erfassen, wenn sie eine volle Blase haben. Nach der MR-Bildgebung der Blasentumoren können Mäuse gegebenenfalls in Kohorten mit ähnlichen Tumoreigenschaften aufgeteilt werden.
Diese Technik ermöglicht es Forschern, neue Immuntherapien und andere Behandlungen zu erforschen, um die Ergebnisse für unsere Patienten zu verbessern. Es ist wichtig, daran zu erinnern, dass BBN ein krebserregendes ist und dass die geeignete Vorsichtbeim beim Umgang mit dieser Verbindung immer getroffen werden sollte.
