Este protocolo permite a exploração sobre como o estado interno ou a personalidade de um zebrafish influencia a resposta de orientação a pistas vindas do ambiente, como correntes de água ou campos magnéticos. Esta técnica é usada para observar como tanto fatores internos quanto pistas ambientais impactam na orientação dos zebrafish. No entanto, também pode ser aplicado a uma ampla variedade de projetos experimentais.
Esse método poderia fornecer insights sobre a ecologia comportamental da pesquisa de biologia sensorial. E é flexível para que as espécies seja adequada para qualquer animal aquático que nada ativamente. Aconselhamos que, ao realizar os experimentos, você se familiarize com o comportamento do animal que pretende usar e com como minimizar o estresse animal.
Para seleção de personalidade em zebrafish coletar peixes individuais usando um béquer de 250 mililitros em uma rede para movê-los em um tanque de transferência e transferir o peixe para o lado escuro do tanque de seleção de personalidade. Após uma hora de aclimatação abra a porta de correr e permita que os indivíduos saiam do buraco para explorar o lado bom do tanque por 10 minutos. Ao final do período de exploração, recolhe suavemente o peixe em dois recipientes separados, coletando os peixes proativos do lado positivo e após cinco minutos adicionais o peixe reativo da caixa escura.
Para configurar um campo magnético com manipulação de campo magnético unidimensional, mantenha o túnel aberto e ligue a unidade de energia e o magnetômetro. Coloque uma sonda magnética conectada a um medidor de tesla de gás dentro do túnel e verifique a tensão necessária para obter o valor do campo magnético escolhido ao longo do eixo principal do túnel. Em seguida, desconecte a sonda e conecte o túnel de fluxo ao aparelho de natação.
Para configurar um campo magnético com manipulação de campo magnético tridimensional, ligue o computador, conversor digital a analógico em drivers de bobina e defina o campo magnético escolhido nos eixos x, y, z. Em seguida, coloque o túnel no centro do conjunto de pares Helmholtz. Quando o campo magnético que a escolha foi configurado, selecione um a cinco peixes para o teste reotactico.
Transfira o peixe no túnel, defina a vazão no túnel para 4,5 litros por minuto e ligue a bomba. Certifique-se de fechar a válvula de saída antes de sentir o túnel com água e transfira o peixe e abra-o antes de acertar o piso. Depois que os animais se aclimatarem lá no túnel de natação por uma hora, comecem a registrar o comportamento dos peixes dentro do túnel e comecem a etapa aumentando a vazão de acordo com o protocolo experimental escolhido.
O mesmo túnel de natação com a bobina removida, pode ser colocado no centro do conjunto de pares Helmholtz. No final do experimento de reotaxis, tire fotos de peixes individuais em câmara métrica amorfa e abra as fotos na imagem J.Note o sexo do animal. Os zebrafish machos são esbeltos e tendem a ser amarelados, enquanto as fêmeas são mais arredondadas e tendem a ter corantes azuis e brancos.
Em seguida, clique em analisar e definir a escala. Para definir a escala da imagem em centímetros, usando a escala da câmera como referência e com a ferramenta de linha segmentada selecionada, desenhe uma linha da ponta do focinho até o pentagrama coddled para medir o comprimento padrão ou a ponta traseira para o comprimento total. Em seguida, clique em Analisar e medir e registrar o comprimento linear do animal em centímetros.
Para acompanhar a atividade do zebrafish dentro do túnel, abra o programa de software de análise de vídeo e modelagem apropriado. Clique em Arquivo, Importação e vídeo e abra um dos vídeos e clique no sistema de coordenadas para definir as unidades de comprimento em centímetros e as unidades de tempo, em segundos. Clique em coordenar eixos e defina o sistema de referência para rastrear a posição do peixe ao longo do tempo com o eixo x ao longo do túnel, definindo a origem no canto baixo da parede na saída de água.
Clique em rastrear novo na calibração para definir a escala e rastrear o novo ponto em massa, para começar a rastrear um peixe de cada vez. Avançou o vídeo manualmente em meio segundo, cinco intervalos de quadros e marca a hora e a posição do animal em cada curva rio abaixo e em cada curva rio acima. No final de cada sessão de rastreamento selecione os valores X e tempo da tabela.
Clique com o botão direito do mouse nos dados e clique em copiar dados com toda a precisão. Em seguida, salve os valores de tempo e x valores de todas as posições de giro em um arquivo de planilha de modelo. Para calcular o tempo total de upstream e downstream, bem como os valores do índice reotactic e percentuais para cada etapa completa.
Neste experimento representativo, após um período de uma hora de aclimatação no túnel como demonstrado, um show de cada vez foi gravado em vídeo enquanto nadava no túnel na corrente de água foi acelerado com um aumento stepwise na taxa de fluxo por sete passos. Durante esses ensaios, o campo magnético foi controlado em uma dimensão. Durante o tempo rastreado, os termos de cada peixe em cada vazão foram destacados e utilizados como pontos de referência para o cálculo do índice reotactico de cada peixe a toda velocidade.
Quando o índice reotactic é superior a 50% e indica que o animal teve uma resposta reotactica positiva correspondente a uma prevalência de natação a montante, um índice reotactico não significativamente diferente de 50% indica ausência de resposta reotactica. A transformação do índice reotactico médio de todos os cinco peixes neste experimento demonstrou um aumento sigmoidal no valor do índice reotactico quando a velocidade da água aumenta, permitindo a quantificação do reotaxis de zebrafish usando um método matemático simples. A partir dessas curvas, é visível que sob campos magnéticos de diferentes direções, a resposta reotactica de peixes proativos não é afetada e a resposta dos dois grupos experimentais é representada pela mesma curva.
Por outro lado, os peixes reativos alteram a orientação reotactica de acordo com o campo magnético e a resposta é representada por curvas significativamente diferentes. Lembre-se que este é um experimento comportamental e o comportamento dos peixes pode ser afetado pelo estresse. Manusear e transferir peixes pode ser complicado.
Então, treine-se antes dos experimentos. Esta técnica magnética reotactica nos permitiu explorar ainda mais os efeitos da personalidade na sensibilidade magnetal em zebrafish e outros vertebrados e invertebrados aquáticos.
