O modelo de transplante de baço oferece uma grande oportunidade para descobrir o papel das células do baço na regulação de respostas imunes locais e sistêmicas em doenças inflamatórias. A principal vantagem deste protocolo é que, usando camundongos congênicos, o transplante de baço torna possível verificar o destino, a longevidade e a função das células do baço. Antes de iniciar o procedimento, coloque uma cortina descartável estéril sobre a plataforma cirúrgica e confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé no rato doador anestesiado.
Raspe o cabelo de toda a área abdominal e coloque o rato em uma plataforma cirúrgica estéril sob um microscópio operacional a uma ampliação de 6 a 10X. Esterilize a pele exposta com uma almofada de preparação para álcool e fixe os membros com fita cirúrgica. Entre no abdômen através de uma incisão vertical de pele de 3 a 4 centímetros do púbis para o processo xifoide.
Cauterizar os vasos da pele e estender a incisão ao abdômen lateral em ambos os lados para obter melhor exposição. Usando um cotonete estéril, mova os intestinos para o flanco direito do abdômen para expor o baço e use um cautery de baixa temperatura estéril para cauterizar a veia gástrica curta presa ao baço. Coloque um pedaço de gaze estéril embebido com salina Celsius de 37 graus sobre o baço para mantê-lo úmido e separado e mobilizar a veia portal do tecido pancreático.
Ligar os ramos da veia portal como demonstrado. Coloque uma sutura ao redor da veia do portal distal da veia esplênica e gire o baço para o lado direito para expor a aorta e a artéria esplênica no tronco celíaco. Disseque e mobilize as artérias esplênicas celácticas aórticas e coloque uma sutura ao redor da aorta proximal à artéria celíaca.
Injete 100 unidades internacionais de heparina na veia cava inferior ou IVC para heparinar todo o corpo. Após três minutos, liga as artérias hepáticas e gástricas na aorta proximal à artéria celíaca. Transecte a veia portal e perfume todo o corpo com 10 mililitros de salina heparinizada de quatro graus Celsius da aorta abdominal distal ao tronco celíaco.
Colete o enxerto de baço e bloqueie com o segmento esplênico aórtico associado na veia portal junto com o segmento de veia esplênica e uma pequena porção de tecido pancreático. Em seguida, preserve o enxerto em cinco mililitros de salina de quatro graus Celsius. Digite o abdômen receptor por incisão midline após a área cirúrgica ser preparada como é para o doador e remova o baço nativo do receptor ligando a veia esplênica e a artéria.
Cubra os tecidos do intestino com uma gaze encharcada de 37 graus Celsius e mova cuidadosamente o intestino para o lado esquerdo. Dissecar e ligar os ramos lombares da aorta infrarenal no IVC e fixar a aorta infrarenal no IVC com dois grampos microvasculares de quatro mililitros. Coloque uma sutura de nylon 11-0 através da aorta infrarenal e retrate o vaso para permitir a criação de uma aortotomia elíptica com microscisores.
Use uma agulha de calibre 30 para perfurar o IVC para criar uma venotomia elíptica e estender a abertura até o comprimento da veia portal do doador. Lave a aorta e o IVC com 500 microliters de soro fisiológico heparinizado para limpar o sangue intraluminal ou coágulos sanguíneos dos vasos e colocar o enxerto de baço do doador no flanco direito do abdômen receptor. Identifique cuidadosamente o algema aórtica do doador e a veia portal.
Depois de confirmar que os vasos não estão torcidos, cubra o enxerto de baço com gaze salina de quatro graus Celsius encharcada. Usando duas suturas de 11-0, conecte o algema aórtica do doador ao ápice proximal e distal da aortotomia receptora e faça uma anastomose com duas a três mordidas de suturas contínuas de nylon 11-0 entre o algema aórtica do doador e a parede anterior da aortotomia do receptor. Vire o enxerto de baço para o lado esquerdo do receptor e faça a anastomose entre o algema aórtico do doador e a parede posterior da aortotomia receptora.
Realize a anastomose venosa entre a veia do portal do doador e o receptor IVC com quatro a cinco mordidas de suturas contínuas de cada lado. Suturar a parede posterior dentro do lúmen do vaso primeiro e, em seguida, fechar a parede anterior usando a mesma sutura. Complete a anastomose com um nó colocado no canto inferior fora do IVC.
Agora solte os grampos do vaso e use um cotonete estéril para tamponar o sangramento até que a cor do baço seja recuperada. Feche o abdômen com uma sutura vicríl sintética 5-0 em um padrão contínuo e feche a camada da pele com uma sutura de nylon 5-0 em um padrão interrompido. Em seguida, injete 250 microlitadores de soro fisiológico quente subcutâneamente em quatro locais separados e aqueça o rato em uma incubadora controlada pela temperatura de 30 graus Celsius durante as primeiras horas pós-operação com monitoramento até que o animal recupere a consciência suficiente para transferência para a gaiola doméstica.
Hematoxylin e eosina de isoentoxertos de baço dias um e sete após o transplante revelam que a arquitetura dos isoentores de baço permanece intacta durante a primeira semana pós-operatória. A análise citométrica do fluxo para investigar a migração de células do baço de doadores após o transplante demonstra que aproximadamente 50% das células do baço são doadoras derivadas um dia após o transplante e aproximadamente 46% são derivadas do receptor. Sete dias após o transplante, os leucócitos derivados do doador representam aproximadamente 32% do total de células do baço, enquanto as células derivadas do receptor aumentaram até aproximadamente 53% Os leucócitos esplênicos doadores também migraram para os linfonodos, sangue e medula óssea já no primeiro dia e são mantidos até pelo menos o sétimo dia gerando uma Quimera valiosa para a pesquisa de tráfico de esplenócitos.
O uso de camundongos geneticamente modificados como doadores de baço permitirá a investigação dos papéis de mediadores derivados de células de empobrecidas ou caminhos-chave de sinalização em processos de doenças. Este modelo pode ser uma ferramenta poderosa para explorar os mecanismos das populações de células de baço em resposta a patógenos, lesões, inflamações ou rejeição de transplantes.
