Este trabalho foi financiado pelo NIH concede R01 HL109420 para WM e AHA 9320033N para LY.

Rato do enxerto e modelo de transplante de enxerto singênico Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Institutional Animal Care e comitês de uso, da Universidade de Yale. Para o modelo do enxerto, segmentos da aorta torácica do homem, 4-5 semanas de idade WT (C57BL/6J) ou IFN-γR-KO foram interpostas na aorta abdominal do receptor do sexo feminino, 8-12 semanas de idade WT com um fim-de -end técnica de anastomose microcirúrgica (ver ao lado para mais detalhes). Para o modelo de enxerto singênico, segmentos da aorta torácica de homens, 4-5 semanas camundongos WT idade foram interpostas na aorta abdominal de macho, 8-12 semanas de idade IFN-γR1-KO usando uma técnica de anastomose microcirúrgica end-to-end. Em 1 semana pós-operatória, os animais foram inoculados com Ad5.CMV iv-murganho IFN-γ ou Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) a 1 x 10 9 UFP. Soro de ratinho de IFN-γ foram medidos por ELISA (eBioscience) em 1 e 5 semanas após a administração de adenovírus. Alguns animais receberam BrdU(Sigma-Aldrich) a 100 mg / kg sc, durante 2 semanas antes do sacrifício. End-to-end técnica de anastomose microcirúrgica (Video será levado para esta parte): 1. Procedimento doador <ol><li> Anestesiar os ratinhos dadores com injecções intraperitoneais de cetamina (50 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). </li><li> Depois de assegurar a anestesia adequada, coloque os ratos doadores sob o microscópio cirúrgico em X8-30 ampliação em uma bandeja em uma posição supina, e usar iodo Prep Pad e Prep Álcool Pad para a preparação da parede torácica. </li><li> Faça uma incisão na parede anterior do tórax através das costelas e diafragma para expor o coração. </li><li> Abra o átrio direito, injecta-se 10 ml de heparina (100 U / ml), solução salina no ventrículo esquerdo para lavar os murganhos utilizando uma seringa de 10 ml com uma agulha de calibre 25. </li><li> Ressecar o coração e os pulmões para expor todo o comprimento da aorta torácica. </li><li> Dissecar a aorta torácica com cuidado para minimizar o trauma direto, while identificar, ligadura e dividir os ramos de madeira, utilizando 11-0 sutura perto da aorta. </li><li> Uma vez que a aorta torácica é livre de tecido circundante, consumo de toda a aorta torácica para transplante. </li><li> Lave a extremidade cortada da aorta do doador com heparina (100 U / ml), solução salina, e armazená-la na mesma solução em gelo (até 6 horas), até ao transplante. </li></ol> 2. Procedimento Destinatário <ol><li> Injectar os ratinhos receptores com ip cetoprofeno (5 mg / kg) para a analgesia, e thenanesthetize os ratinhos ip com cetamina (50 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). Os ratinhos receptores são anestesiados profundamente dentro de 10 minutos para uma duração de 60-90 min. Durante a cirurgia, o nível de anestesia é avaliada a cada 15 min, apertando a parede abdominal anterior utilizando uma pinça ou o pé. Se o animal reage aos estímulos nocivos a qualquer momento durante a cirurgia, uma dose adicional de cetamina e xilazina (1/4 ou 1/3 da dose inicial) será administrado por via sc ou im </li><li> Depois de assegurar a anestesia adequada, raspar a pele na parede abdominal anterior usando um barbeador elétrico, limpe a pele com iodo Prep Pad e Álcool Prep Pad, cobrir os olhos com pomada oftálmica. Durante a cirurgia, as seguintes técnicas assépticas será utilizada para as operações de limpeza, incluindo a mesa de operações com lixívia a 10%, com luvas estéreis e utilizando instrumentos de microcirurgia (instrumentos esterilizados a vapor esterilizado durante o início da operação, depois de vidro quente talão esterilizado instrumentos entre várias operações, etc.) </li><li> Colocar os ratinhos receptores sob o microscópio de exploração com uma ampliação de X8-30 num tabuleiro numa posição supina. </li><li> Faça uma incisão na parede abdominal na linha média a partir de xifóide até púbis, e espalhar a parede abdominal distante usando um micro-retractor para expor a cavidade abdominal. </li><li> Recolha os intestinos superiormente e enrole com uma gaze umedecida com solução salina. Os ratos receptores ficam refrigerados pela perda de heat através intestinos externalizados. É importante manter o calor animal. No entanto, a placa de aquecimento não é usado durante a cirurgia como hipotermia modesta é benéfica na prevenção da lesão espinhal durante a oclusão do fluxo sanguíneo na aorta assim como existe uma transferência de calor ineficaz com ausência de fluxo sanguíneo para a metade inferior do corpo de ratos. </li><li> Mova os órgãos reprodutivos inferiormente, envolva as áreas no abdômen de ratos destinatário com solução salina, gaze umedecida, e usá-lo para retirar o reto para o lado direito do abdômen. Os tecidos expostos são irrigados periodicamente com soro fisiológico durante o transplante. </li><li> Dissecar sem rodeios um segmento da aorta infra-renal entre o vaso renal proximal e distal da bifurcação aórtica e separar-se da veia cava inferior (IVC) cuidadosamente. </li><li> Identificar e ligar todos os ramos pequenos provenientes deste segmento de aorta abdominal utilizando 11-0 poliamida monofilamento sutura. </li><li> Clampeamento do segmento isolado de umaorta bdominal usando dois grampos vasculares aproximadamente, 5 mm entre si, um em cada extremidade. </li><li> Transecto da aorta abdominal entre os grampos afiados usando micro-tesoura para criar os sites de anastomose. </li><li> Ressecção de um pequeno segmento de aorta abdominal (até 0,4 mm de comprimento) a partir de uma extremidade cortada da aorta destinatário seccionado para acomodar a prótese aórtica doador. </li><li> Lave os segmentos da aorta, entre grampos utilizando solução salina heparinizada para remover o sangue residual. Os segmentos de aorta entre grampos e o dador do enxerto aórtico são periodicamente irrigada com (100 U / ml), solução salina heparinizada (até 40 ml / kg) durante a anastomose. </li><li> Transecão ambos os lados da aorta do doador com micro-tesoura afiada para criar um segmento de enxerto de 2,5 mm de comprimento para a transplantação. </li><li> Coloque a prótese aórtica doador em posição ortotópica, anastomose da extremidade proximal e distal do enxerto doador para proximal e distal de extremidade cortada do destinatário da aorta abdominal, respectivamente, com um fim-to padrão-end usando 11-0 poliamida monofilamento sutura. </li><li> Para as suturas contínuas, coloque as suturas de ancoragem em 3 e 09:00 posições em primeiro lugar. Entre duas suturas estadia em cada lado do enxerto, anastomose ambas as bordas cortadas em 3-4 pontos com as suturas em execução e amarrar as suturas correndo para suturas com um nó duplo. Uma vez que ambas as camadas de fecho são contínuos, o risco de deiscência é aumentada. O enxerto da aorta do doador deve ser de comprimento apropriado para conectar proximal e distal extremidade cortada do destinatário da aorta abdominal. </li><li> Para as suturas interrompidas, construir quatro anastomose em 3 e 09:00 posições em ambos os lados do enxerto em primeiro lugar, e anastomosar ambas as bordas cortadas em 3-4 pontos entre duas suturas estadia em cada lado do enxerto. </li><li> Solte a braçadeira de distal para permitir que o fluxo retrógrado em enxerto, identificar os locais de sangramento e fazer pontos adicionais dentro de 3 minutos. </li><li> Depois de verificar a hemostasia satisfatória, solte a braçadeira proximal. </li><li> Confirma a perviedade do enxerto pelo presença de pulsação vigorosa no enxerto e o segmento adjacente proximal da aorta abdominal nativa, em particular, no segmento adjacente da aorta abdominal distai e na artéria mesentérica inferior. Considere trombose em locais de anastomose se a pulsação diminuir dentro de alguns minutos após a restauração do fluxo sanguíneo. </li><li> Retorno dos intestinos para a cavidade abdominal. </li><li> Sutura fechar a parede abdominal com fio de nylon 5-0 na sutura da camada muscular e camada de pele, respectivamente. </li><li> Colocar os ratinhos receptores em uma gaiola limpa em cima de uma almofada de aquecimento, e esperar 1-2 horas para que os ratos a recuperar a consciência e recuperar da anestesia. É importante manter a animais durante a recuperação de calor adequado. Mantenha os ratos na gaiola quente e seco antes de wake animais da anestesia. </li><li> Avaliar a função motora dos membros posteriores após a recuperação ratos, e novamente no segundo dia. A cirurgia de transplante bem sucedido será confirmada if sem disfunção dos membros posteriores é observada em ratinhos receptores no segundo dia. </li><li> Administrar os ratinhos receptores com cetoprofeno em água potável (5 mg / kg / d = 27 ug / ml em água potável) durante 48 horas. Se algum camundongos receptores sofrem de dor não aliviada pelo uso de analgésicos no pós-operatório como evidenciado pela perda de mobilidade, a falta de noivo, anormal agrupados postura, etc, eles serão sacrificados. Os animais serão sacrificados aos predefinidos fim-pontos depois de 1-60 dias. </li></ol> Análise do enxerto Enxertos de artéria do enxerto foram adquiridos em 4 semanas e enxertos no modelo de enxerto singênico foram seis semanas de pós-operatório (5 semanas após a infecção viral) e analisados ​​por técnicas histológicas padrão para Elastica-van Gieson coloração (EVG), hematoxilina e eosina (HE) e coloração de imunofluorescência. Imagens foram feitas usando um sistema de microscópio de imunofluorescência (Zeiss). A contagem das células de núcleo rodeado por imunocoloração positiva foi executared em alta ampliação e média de cinco cortes transversais para cada enxerto. As medições do lúmen (dentro do endotélio), íntima (entre o endotélio e lâmina elástica interna, IEL), meios (entre o LIE e lâmina elástica externa, EEL), a espessura da parede (entre o endotélio e lâmina elástica externa) da área de enxerto e navio inteiro (dentro da EEL) foram calculados a partir de 5 de série transversais, 150 mM de distância para cada enxerto, usando análise de imagem assistida por computador e NIH Imagem 1,60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). A análise estatística Todos os dados são expressos como média ± SEM. Bicaudal, teste t pareado e uma análise de variância de dois fatores foram realizadas utilizando o programa Prism (GraphPad Software). Diferenças com P &lt;0,05 foram considerados para indicar significância estatística.

<ol>
	<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease.">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li><li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis.">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li><li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+rejection.">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li><li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice.">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li><li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart.">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allograft+arteriopathy:+pathogenesis+update.">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li><li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft+vascular+disease:+immune+response+meets+the+vessel+wall.">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li><li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts:+role+of+interferon-gamma.">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li><li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts.">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li><li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients.">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li><li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells.">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+do+some+females+reject+males?+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection.">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li><li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy.">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li><li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis.">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li><li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes.">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li><li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy.">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li><li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation.">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li><li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries.">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li><li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+vascular+rejection:+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models.">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li><li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells.">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li><li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-&#947;-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion.">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-&#947;-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li></ol>

Não temos nada a divulgar.

Os protocolos descritos estão focados em modelos de ratos GA. Os procedimentos podem ser aplicados a outros modelos de transplante de enxerto. Estes incluem os modelos de xenoenxerto humanizada (isto é, segmentos de artérias coronárias humanas interposta em aortas de infra-renal de ratinhos imunodeficientes), eo modelo de rato GA rejeição aguda (isto é, uma aorta do rato a partir de uma estirpe genética em outro recipiente estirpe genética). Nossos modelos de mouse descritos são mais para fec...

Arteriosclerois prótese (GA), também chamadas de doença vascular do enxerto, é uma lesão patológica, que se desenvolve ao longo de meses ou anos em órgãos transplantados caracterizadas por difuso, estenose circunferencial da árvore vascular do enxerto inteiro 7. Os estágios iniciais pode causar obstruções excêntricas e focal, que são mais evidente nas artérias, assim, assemelha-se mais estreitamente estenoses visto na aterosclerose convencional. A perda luminal dos vasos enxertados resultados de expansão da íntima devido à infiltração de células T do hospedeiro e os macrófagos e, especialmente, a uma acumulação de matriz extracelular e de músculo liso, tal como as células provenientes de enxerto, central ou ambos 5, 13, 19, que não está suficientemente compensada pela remodelação navio para fora. Em aloenxertos cardíacos, as lesões mais clinicamente significativas são aquelas nas artérias coronárias epicárdicas e intramio. Em última análise, GA das artérias coronárias irá causar insuficiência cardíaca isquémica. GA é a principal causa de gr cardíaca tardeperda de popa. As estenoses de GA parar nas linhas de sutura, implicando fortemente a resposta do hospedeiro à aloantigenes enxerto em sua patogênese e que nos leva a classificar GA como uma forma de rejeição crônica 3. No entanto, outras formas de lesão arterial pode aumentar o risco de GA, quer através do aumento da carga líquida de lesão ou através da intensificação e / ou modulação da resposta aloimune. A célula (CE) revestimento endotelial das artérias do enxerto é preservada no GA humano e as regiões mais superficiais da intima adjacente ao forro CE é o sítio mais fortemente infiltrado pelo hospedeiro derivado de IFN-γ produtoras de células T e macrófagos 11, em alguns pacientes GA está associada com o desenvolvimento de aloanticorpos específicos do dador que se ligam ao enxerto CE 16, mas os vasos mostram pouca evidência de que a necrose fibrinoide que é característico da rejeição mediada por anticorpos aguda 11. O componente mais crítico do GA patogênese é aproliferação de células de músculo liso, como dentro da íntima, se este processo pode ser preso, GA é improvável a progredir. Trabalho prévio do nosso grupo mostraram que INTIMAS de segmentos de artérias coronárias humanas interposta em aortas de infra-renal de ratinhos imunodeficientes expandir em resposta a células T humanas alogénicas adoptivamente transferidos para o dador artéria e que este processo pode ser inibido por neutralização do IFN-humano γ 18. Além disso humana exógena do IFN-γ poderia causar íntima (e medial) proliferação de células de músculo liso (VSMC) em vascular destes enxertos arteriais, na ausência de células T humanas 15, 17. (É importante notar que o ser humano e do rato IFN-γ não cruzar espécies, excluindo efeitos indiretos sobre o anfitrião mouse neste sistema experimental.) Estes modelos humanizados rato tem a vantagem de recapitular célula T humana / interações de células vasculares e íntima As lesões são em grande parte composta de células humanas (por exemplo, derivada do enxerto),como tem sido observado nas amostras clínicas, mas não totalmente recapitular a situação clínica porque ignoram o papel dos macrófagos do hospedeiro e, possivelmente outros tipos de células envolvidos na lesão de transplantes clínicos. Um modelo de rato convencional, este processo poderia, teoricamente, resolver este problema, complementando as limitações do modelo humanizado, que envolve um sistema imunitário do hospedeiro completa e proporcionar a vantagem adicional de permitir que a alimentação de abordagens genéticas do rato para ser aplicado a GA. Os dois modelos de mouse mais amplamente utilizados envolvem transplante cardíaco heterotópico e ortotópico transplante de artéria 1. As lesões que se desenvolvem nas artérias dos enxertos cardíacos heterotópicos são em grande parte composta de células hospedeiras, provavelmente de origem medula óssea, enquanto que as células da camada íntima das artérias em enxertos cardíacos humanos são predominantemente de origem enxerto de 5, 13, 19. Esta é uma distinção significativa que nos levou a desenvolver modelos alternativos de rato. Interposição deuma aorta do rato a partir de uma estirpe para outra estirpe de ratinho receptor é ainda mais limitado, como um modelo para a rejeição crónica em seres humanos, porque a resposta de rejeição mediada por células aguda neste modelo de ratinho elimina completamente todas as células vasculares derivadas do doador do enxerto dentro de duas a três 19 semanas. Por conseguinte, as alterações subsequentes visto no segmento do vaso interposta são unicamente uma resposta de células hospedeiras que têm o repovoados descelularizado navio andaime, criando uma situação altamente artefactual de relevância limitada como um modelo para as alterações nos vasos de enxerto que ocorrem na clínica. Nós recentemente desenvolveu dois novos modelos de mouse para contornar esses problemas 21. O primeiro modelo envolve a interposição de um segmento de vaso a partir de um rato macho em uma fêmea receptora da mesma estirpe consanguínea (C57BL/6J). O segundo modelo envolve a interposição de um segmento de artéria de um tipo selvagem C57BL/6J camundongo doador em um rato anfitrião da mesma linhagem e sexo que não tem a receptor para IFN-γ (IFN-γR-KO), seguido por administração de ratinho de IFN-γ (entregue via infecção do fígado do ratinho com um vector de adenovírus. Aqui, descrevemos protocolos detalhados e as vantagens dos nossos modelos GA rato.

<table border="1" >
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the Reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>C57BL/6J (H-2b)</td>
 <td>Jackson Laboratories 
 (Bar Harbor, ME)</td>
 <td>000664</td>
 <td>Donor (5 weeks) 
 Recipient (8-12weeks)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketamine Hydrochloride Injection </td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-2053</td>
 <td>Storage Solution(50 mg/ml) 
 Working Solution(5 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td> Xylazine Sterile Solution</td>
 <td>Lloyd Inc.</td>
 <td>NADA# 139-236</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution(1 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketoprofen</td>
 <td>Fort Dodge Animal Health</td>
 <td>NDC 0856-4396-01</td>
 <td>Storage Solution(100 mg/ml) 
 Working Solution-oral 
 (0.027 mg/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Heparin Sodium</td>
 <td>Sagent Pharmaceticals</td>
 <td>NDC 25021-400</td>
 <td>Storage Solution(1000 U/ml) 
 Working Solution(100 U/ml)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride)</td>
 <td>CareFusion</td>
 <td>AL4109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.9% Sodium Chloride Injection</td>
 <td>Hospira Inc.</td>
 <td>NDC 0409-4888-10</td>
 <td>To prepare the anesthetic </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Petrolatum Ophthalmic Ointment </td>
 <td>Dechra Veterinary Products</td>
 <td>NDC 17033-211-38</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iodine Prep Pads </td>
 <td>Triad Disposables, Inc.</td>
 <td>NDC 50730-3201-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alcohol Prep Pads</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>NDC 68599-5805-1</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MZ95</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Scissors</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5693</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>15009-08</td>
 <td>To transect the aorta of donor or recipient </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Narrow Scissors</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>14088-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle Holder/Forceps</td>
 <td>MICRINS</td>
 <td>MI1542</td>
 <td>To hold the needle</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fine Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>11254-20</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11251-35</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Standard Pattern Forceps</td>
 <td>F.S.T</td>
 <td>11000-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Forceps</td>
 <td>F.S.T </td>
 <td>13011-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LANCASTER Eye Speculum</td>
 <td>Zepf Medical Instruments</td>
 <td>42-1209-07</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Vascular Clip</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-6472</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Clip Applying Forceps With Lock</td>
 <td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
 <td>RS-5440</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Polyamide Monofilament Suture</td>
 <td>AROSurgical Instruments Corporation</td>
 <td>Cat #T4A10Q07</td>
 <td>10-0 suture, Needle=70 microns</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Black Monofilament Nylon Suture</td>
 <td>Syneture 
 (Covidien)</td>
 <td>SN-1956</td>
 <td>6-0 suture</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-Woven Songes</td>
 <td>McKesson Corp.</td>
 <td>Reorder No. 94442000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309659</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>3 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309657</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml Syringe</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 309604</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18G 1 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305196</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25G 7/8, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305124</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>27G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305109</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G 1/2, 
 Hypodermic Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>REF 305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hearting Pad</td>
 <td>Sunbeam</td>
 <td>Z-1228-001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Trimmer</td>
 <td>Wahl</td>
 <td>9854-500</td>
 <td></td>
 </tr>
<tr>
<td></td>
<td></td>
<td></td>
<td>Table 2. Specific reagents and equipment.</td>
</tr>
 </tbody>
</table>

mouse models for graft arteriosclerosis

Arteriosclerois enxerto (GA), também chamado de doença vascular do enxerto, é uma lesão patológica que se desenvolve ao longo de meses ou anos em órgãos transplantados caracterizadas por difusa, estenose circunferencial de toda a árvore vascular do enxerto. O componente mais crítico do GA patogênese é a proliferação de células musculares lisas, como dentro da íntima. Quando um segmento da artéria coronária humana é interposta na aorta infra-renal de ratos imunodeficientes, o INTIMAS poderia ser expandir em resposta a células T humanas adoptivamente transferidos para o dador alogénico artéria ou humana exógena do IFN-γ na ausência de células T humanas. A interposição de uma aorta do rato a partir de uma estirpe para outra estirpe de ratinho receptor é limitado como um modelo para a rejeição crónica em seres humanos, porque a resposta de rejeição mediada por células aguda neste modelo de ratinho elimina completamente todas as células vasculares dos doadores derivados do enxerto dentro de duas a três semanas. Recentemente, desenvolveu dois novos mOuse modelos para contornar esses problemas. O primeiro modelo envolve a interposição de um segmento de vaso a partir de um rato macho em uma fêmea receptora da mesma estirpe consanguínea (C57BL/6J). Rejeição de enxerto, neste caso, é dirigido apenas contra os antigénios de histocompatibilidade menor codificadas pelo cromossoma Y (presente no sexo masculino, mas não a do sexo feminino) e a resposta de rejeição que se segue é suficientemente indolentes para preservar as células musculares lisas derivadas de doadores durante várias semanas. O segundo modelo envolve a interposição de um segmento da artéria de um tipo selvagem C57BL/6J rato doador em um rato hospedeiro da mesma estirpe e sexo que falta o receptor para o IFN-γ seguido por administração de ratinho de IFN-γ (entregue via infecção do ratinho fígado, com um vector adenoviral. Não existe rejeição neste caso como dador e ratinhos receptores são da mesma estirpe e sexo, mas as células do músculo liso dos doadores proliferar em resposta à citoquina, enquanto células hospedeiras derivadas de, por falta de receptoresessa citocina, não respondem. Por recruzá alterações genéticas adicionais no dador embarcação, os dois modelos podem ser utilizados para avaliar o efeito de genes específicos em progressão GA. Aqui, descrevemos os protocolos detalhados para os nossos modelos GA rato.

Arteriosclerose modelo de rato de aloenxerto (GA): Neste modelo, uma aorta dador é transplantado para macho fêmea receptora, para que o hospedeiro de célula T induz respostas mediadas pelo aloimunes alorreativas contra um antigénio Y menor (antigénio de histocompatibilidade menor do HY-específica do sexo masculino), expresso em o enxerto 12, e por sua vez, produzido por células T IFN-γ unidades proliferação de VSMC 20 como observado em outros modelos de transplante de alo...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Models for Graft Arteriosclerosis at JoVE.com

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Descrevemos os protocolos para nossos arteriosclerois enxerto do mouse (GA) modelos que envolvem a interposição de um segmento de vaso do mouse em um receptor da mesma linhagem consanguínea. Por recruzá alterações genéticas adicionais no recipiente dador, o modelo pode determinar o efeito de genes específicos em GA.

Os modelos de mouse para Arteriosclerose Graft

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K visualizações.  Yale University School of Medicine. Descrevemos os protocolos para nossos arteriosclerois enxerto do mouse (GA) modelos que envolvem a interposição de um segmento de vaso do mouse em um receptor da mesma linhagem consanguínea. Por recruzá alterações genéticas adicionais no recipiente dador, o modelo pode determinar o efeito de genes específicos em GA.

Vídeo: Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

MRI and PET in Mouse Models of Myocardial Infarction

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ideal model for testing novel therapeutic strategies.
In vivo magnetic resonance imaging (MRI) gives excellent views of the heart noninvasively with clear anatomical detail, which can be used for accurate functional assessment. Contrast agents can provide basic measures of tissue viability but these are nonspecific. Positron emission tomography (PET) is a complementary technique that is highly specific for molecular imaging, but lacks the anatomical detail of MRI. Used together, these techniques offer a sensitive, specific and quantitative tool for the assessment of the heart in disease and recovery following treatment.
In this paper we explain how these methods are carried out in mouse models of acute myocardial infarction. The procedures described here were designed for the assessment of putative protective drug treatments. We used MRI to measure systolic function and infarct size with late gadolinium enhancement, and PET with fluorodeoxyglucose (FDG) to assess metabolic function in the infarcted region. The paper focuses on practical aspects such as slice planning, accurate gating, drug delivery, segmentation of images, and multimodal coregistration. The methods presented here achieve good repeatability and accuracy maintaining a high throughput.

We describe how to perform MRI and PET imaging of the mouse heart. The protocol is tailored to assess treatment efficacy in models of myocardial infarction and heart failure.

Ressonância magnética e PET no rato modelos de Infarto do Miocárdio

Myocardial infarction is one of the leading causes of death in the Western world. The similarity of the mouse heart to the human heart has made it an ...

Medicina

Production of Apolipoprotein C-III Knockout Rabbits using Zinc Finger Nucleases

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins (HDL). It has been recognized that high levels of plasma ApoCIII constitutea risk factor for cardiovascular diseases (CVD). Elevated plasma ApoCIII level often correlates with insulin resistance, obesity, and hypertriglyceridemia. Invaluable knowledge on the roles of ApoCIIIin lipid metabolisms and CVD has been obtained from transgenic mouse models including ApoCIII knockout (KO) mice; however, it is noted that the metabolism of lipoprotein in mice is different from that of humans in many aspects. It is not known until now whether elevated plasma ApoCIII is directly atherogenic. We worked to develop ApoCIII KO rabbits in the present study based on the hypothesis that rabbits can serve as a reasonablemodelfor studying human lipid metabolism and atherosclerosis. Zinc finger nuclease (ZFN) sets targeting rabbit ApoCIIIgene were subjected to in vitro validation prior to embryo microinjection. The mRNA was injected to the cytoplasm of 35 rabbit pronuclear stage embryos, and evaluated the mutation rates at the blastocyst state. Of sixteen blastocysts that were assayed, a satisfactory 50% mutation rate (8/16) at the targeting site was achieved, supporting the use of Set 1 for in vivo experiments. Next, we microinjected 145 embryos with Set 1 mRNA, and transferred these embryos to 7 recipient rabbits. After 30 days gestation, 21 kits were born, out of which five were confirmed as ApoCIII KO rabbits after PCR sequencing assays. The KO animal rate (#KO kits/total born) was 23.8%. The overall production efficiency is 3.4% (5 kits/145 embryos transferred). The present work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits. These ApoCIII KO rabbits are novel resources to study the roles of ApoCIII in lipid metabolisms.

Recent development in gene targeting tools makes production of knockout (KO) rabbits possible. In the present work, we generated five Apolipoprotein (Apo) C-III KO rabbits using Zinc Finger Nucleases (ZFN). This work demonstrated that ZFN is a highly efficient method to produce KO rabbits.

Produção de Coelhos Knockout apolipoproteína C-III, utilizando zinco Nucleases dedo

Apolipoprotein (Apo) C-III (ApoCIII) resides on the surface of plasma chylomicron (CM), very low density lipoprotein (VLDL) and high density lipoproteins ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. The long-term clinical results showed excellent patency rates, however, with significant incidence of stenosis. To investigate the cellular and molecular mechanisms of vascular neotissue formation and prevent stenosis development in tissue engineered vascular grafts (TEVGs), we developed a mouse model of the graft with approximately 1 mm internal diameter. First, the TEVGs were assembled from biodegradable tubular scaffolds fabricated from a polyglycolic acid nonwoven felt mesh coated with &#949;-caprolactone and L-lactide copolymer. The scaffolds were then placed in a lyophilizer, vacuumed for 24 hr, and stored in a desiccator until cell seeding. Second, bone marrow was collected from donor mice and mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation. Third, approximately one million cells were seeded on a scaffold and incubated O/N. Finally, the seeded scaffolds were then implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. The implanted grafts demonstrated excellent patency (&#62;90%) without evidence of thromboembolic complications or aneurysmal formation. This murine model will aid us in understanding and quantifying the cellular and molecular mechanisms of neotissue formation in the TEVG.

To improve our knowledge of cellular and molecular neotissue formation, a murine model of the TEVG was recently developed. The grafts were implanted as infrarenal vena cava interposition grafts in C57BL/6 mice. This model achieves similar results to those achieved in our clinical investigation, but over a far shortened time-course.

Implantação de Veia Cava Inferior interposição de enxerto no Rato Modelo

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Rato Transplante Renal: Modelos de rejeição de enxertos

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal systems. HFUS has the ability to detect structures as small as 30 &#181;m, a property that has been utilized for visualizing superficial lymph nodes in rodents in brightness (B)-mode. Combining power Doppler with B-mode imaging allows for measuring circulatory blood flow within lymph nodes and other organs. While HFUS has been utilized for lymph node imaging in a number of mouse&#160; model systems, a detailed protocol describing HFUS imaging and characterization of the cervical lymph nodes in mice has not been reported. Here, we show that HFUS can be adapted to detect and characterize cervical lymph nodes in mice. Combined B-mode and power Doppler imaging can be used to detect increases in blood flow in immunologically-enlarged cervical nodes. We also describe the use of B-mode imaging to conduct fine needle biopsies of cervical lymph nodes to retrieve lymph tissue for histological&#160; analysis. Finally, software-aided steps are described to calculate changes in lymph node volume and to visualize changes in lymph node morphology following image reconstruction. The ability to visually monitor changes in cervical lymph node biology over time provides a simple and powerful technique for the non-invasive monitoring of cervical lymph node alterations in preclinical mouse models of oral cavity disease.

This protocol describes the application of high-frequency ultrasound (HFUS) for imaging mouse cervical lymph nodes. This technique optimizes visualization and quantification of cervical lymph node morphology, volume and blood flow. Image-guided biopsy of cervical lymph nodes and processing of lymph tissue for histological evaluation is also demonstrated.

De alta frequência Ecografia de mouse linfonodos cervicais

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

Mouse Model of Alloimmune-induced Vascular Rejection and Transplant Arteriosclerosis

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune system of the recipient causes damage of the arterial wall and dysfunction of endothelial cells and smooth muscle cells. This triggers a pathological repair response that is characterized by intimal thickening and luminal occlusion. Understanding the mechanisms by which the immune system causes vasculature rejection and TA may inform the development of novel ways to manage graft failure. Here, we describe a mouse aortic interposition model that can be used to study the pathogenic mechanisms of vascular rejection and TA. The model involves grafting of an aortic segment from a donor animal into an allogeneic recipient. Rejection of the artery segment involves alloimmune reactions and results in arterial changes that resemble vascular rejection. The basic technical approach we describe can be used with different mouse strains and targeted interventions to answer specific questions related to vascular rejection and TA.

We describe a protocol for aortic interposition grafting in mice. The goal of the protocol is to provide a model with which to study pathological processes and therapeutic strategies relevant to alloimmune reactions in arteries and the resultant arterial changes that contribute to organ transplant failure.

Modelo rato de rejeição vascular induzida por Aloimune e Transplante Arteriosclerose

Vascular rejection that leads to transplant arteriosclerosis (TA) is the leading representation of chronic heart transplant failure. In TA, the immune ...

Cutaneous Surgical Denervation:  A Method for Testing the Requirement for Nerves in Mouse Models of Skin Disease

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies have suggested that nerves may also modulate skin disorders including atopic dermatitis, psoriasis and cancer. Here, we describe protocols for testing the requirement for nerves in maintaining a cutaneous mechanosensory organ, the touch dome (TD). Specifically, we discuss methods for genetically labeling, harvesting and visualizing TDs by whole-mount staining, and for performing unilateral surgical denervation on mouse dorsal back skin. Together, these approaches can be used to directly compare TD morphology and gene expression in denervated as well as sham-operated skin from the same animal. These methods can also be readily adapted to examine the requirement for nerves in mouse models of skin pathology. Finally, the ability to repeatedly sample the skin provides an opportunity to monitor disease progression at different stages and times after initiation.

This article includes detailed protocols for genetic labeling of mouse skin, surgical denervation, skin biopsy and visualizing labeled epithelia by whole-mount &#946;-galactosidase staining. These methods can be used to test the requirement for nerves in mouse models of normal and pathological skin.

A desnervação cirúrgica cutânea: um método para testar o requisito para os nervos no mouse modelos de doença de pele

Cutaneous somatosensory nerves function to detect diverse stimuli that act upon the skin. In addition to their established sensory roles, recent studies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Veia Interposição Modelo: Um modelo adequado para estudar Bypass Graft Perviedade

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Usando uma biópsia química para avaliação da qualidade do enxerto

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination model can be used for the evaluation of treatment methods for intrathoracic diseases such as lung cancer or malignant pleural mesothelioma.
Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is a recently developed cancer treatment strategy that combines the specificity of tumor-targeting antibodies with toxicity caused by a photoabsorber (IR700Dye) after exposure to NIR light. The efficacy of NIR-PIT has been reported using various antibodies; however, only a few reports have shown the therapeutic effect of this strategy in an orthotopic model. In the present study, we demonstrate an example of efficacy evaluation of the pleural disseminated lung cancer model, which was treated using NIR-PIT.

Near-infrared photoimmunotherapy (NIR-PIT) is an emerging cancer therapeutic strategy that utilizes an antibody-photoabsorber (IR700Dye) conjugate and NIR light to destroy cancer cells. Here, we present a method to evaluate the antitumor effect of NIR-PIT in a mouse model of pleural disseminated lung cancer and malignant pleural mesothelioma using bioluminescence imaging.

Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...