Este modelo fornece um protocolo padrão para o estabelecimento de modelos animais de doença do enxerto coronariano. O procedimento de modelo animal estabelecido por este método é padrão, e o resultado é estável. Para começar, divida os miniporcos machos de três meses de idade, pesando 30 a 35 quilos, nos grupos de doença do enxerto simulado e venoso de cinco animais cada.
Após anestesiar o animal, estabeleça o acesso da orelha inserindo um cateter venoso de demora na veia marginal da orelha. Agora, transfira o porco para a mesa de operação na posição supina. Realize a intubação traqueal com um tubo de calibre francês de 7,0 a 7,5 e conecte-o ao circuito respiratório da anestesia.
Imobilize os membros com ataduras e eleve a cabeça com uma cortina estéril. Depois de injetar brometo de vecurônio por via intravenosa para relaxamento muscular, monitore a frequência cardíaca, os níveis de oxigênio no sangue e a temperatura corporal usando um eletrocardiograma. Depois de barbear e esterilizar a área cirúrgica, coloque uma cortina cirúrgica estéril em torno dela.
Após fazer a incisão e expor a veia mamária interna, conforme descrito no texto, localize a veia mamária interna e a artéria mamária interna esquerda no lado esquerdo do esterno e realize a dissecção contusa da veia mamária interna com pinça vascular. Realizar hemostasia por eletrocoagulação dos ramos da veia mamária interna esquerda com uma faca elétrica. Se a hemostasia estiver incompleta, usando fio de algodão, ligue e marque as duas extremidades da veia enquanto ela está sendo colhida.
Uma vez que a veia é removida, injete heparina, solução salina normal na veia para pré-tratamento. Em seguida, coloque a veia na solução salina normal, mantenha-a para backup e, da mesma forma, incite a veia mamária interna do grupo simulado. Em seguida, abra o pericárdio, feche a parede torácica e use a veia mamária interna para controle patológico sem revascularização do miocárdio.
Faça uma incisão de aproximadamente sete centímetros com uma faca elétrica no pericárdio para expor o tronco da artéria coronária direita. Suspenda o pericárdio e costure a pele no lado ipsilateral com suturas cirúrgicas 1-0. Agora, separe o tronco da artéria coronária direita dos tecidos circundantes.
Em seguida, usando um gancho de arame, ignore a banda de bloqueio sob a extremidade proximal da artéria coronária direita isolada perto da aorta. Em seguida, trate o miocárdio com três ciclos de isquemia de dois minutos e cinco minutos de reperfusão, apertando e relaxando a banda de bloqueio. Além disso, monitore a atividade elétrica do coração com o eletrocardiograma durante o pré-condicionamento da reperfusão de isquemia.
Em seguida, corte o epicárdio que cobre os vasos sanguíneos depois de apertar a banda para bloquear o fluxo sanguíneo coronário direito. Expondo a parede da artéria coronária, corte longitudinalmente com a ponta de uma lâmina cirúrgica contra o centro da parede anterior dos vasos sanguíneos. Depois de cortar o lúmen e ampliar a incisão e colocar um shunt coronário, insira uma extremidade do shunt com uma bobina na artéria coronária distal através da lágrima.
Agora, derive o sangue nas artérias coronárias para o shunt coronário oco para garantir um campo operatório claro e realize uma sutura contínua de ponta a ponta entre a veia mamária interna e a parede aórtica com a sutura de polipropileno 6-0. No meio da aorta ascendente, ocluir a parede anterolateral esquerda da aorta ascendente com uma braçadeira de semi-oclusão. Depois de fazer uma pequena incisão com a lâmina cirúrgica na parede da aorta onde a adventícia foi cortada, insira a extremidade da cabeça do eixo deslizante na extremidade da cabeça do punch na cavidade aórtica através desta incisão.
Em seguida, contraia o eixo deslizante para fora e a faca circular corta um pedaço da parede arterial. Uma vez que o shunt é puxado para fora, execute uma sutura contínua de ponta a ponta entre a veia mamária interna e a artéria coronária direita com a sutura de polipropileno 6-0. Após a abertura da braçadeira de semi-oclusão, registre o fluxo de revascularização miocárdica do tronco da artéria coronária direita proximal ao local da anastomose por meio de ultrassonografia.
Prepare o animal para a cirurgia, conforme demonstrado anteriormente. E com uma faca elétrica, faça uma incisão esternal mediana de 10 centímetros para dividir o esterno e colher a veia 30 dias após a cirurgia. Durante a separação, evite os principais vasos sanguíneos, coração e separe os vasos sanguíneos enxertados camada por camada.
Corte rapidamente os grandes vasos sanguíneos que se conectam ao coração e coloque o coração e a aorta ascendente em lascas de gelo. Uma vez que a ponte vascular do enxerto, a aorta conectada e a artéria coronária direita são removidas, lave todas as amostras com solução salina normal a quatro graus Celsius. Depois de pegar todo o vaso do enxerto de cerca de três a quatro centímetros e dividi-lo em quatro a cinco partes iguais, transfira-o para o CryoTubes para congelar rapidamente em nitrogênio líquido.
Para análise, fixe o enxerto gelado e enxaguado com solução salina em solução de paraformaldeído a 4%. Após 12 horas de fixação tecidual, core as seções em 50 mililitros de uma solução aquosa de hematoxilina por três minutos. Em seguida, separe as seções lavando com 50 mililitros de ácido clorídrico-etanol a 0,5% e água de amônia a 0,2% por 10 segundos cada.
Uma vez que as seções são enxaguadas por uma hora com água corrente, limpe-as mergulhando-as em água destilada por três minutos. Depois de desidratar as seções em etanol a 70% e 90% por 10 minutos, coloque-as em 50 mililitros de solução de coloração de eosina a 0,5% de álcool por dois a três minutos. Uma vez que as seções coradas estejam desidratadas em etanol puro, mergulhe as amostras em xileno puro por 10 minutos para torná-las transparentes.
Finalmente, goteje as seções transparentes com cola neutra antes de cobri-las com um deslizamento de cobertura. Observe seções patológicas sob um microscópio de luz com 40 vezes a ampliação. O exame ultra-sônico mostrou que a direção geral do fluxo sanguíneo era normal na extremidade proximal, na cavidade vascular e na extremidade distal do vaso do enxerto.
No entanto, as extremidades proximal e distal do vaso do enxerto apresentaram algum fluxo retrógrado de sangue. A análise histológica da veia mamária interna revelou que no grupo sham a túnica íntima, a túnica média e a parede venosa do enxerto venoso pareciam normais. No entanto, 30 dias após o transplante de artéria coronária, a íntima do vaso foi espessada e o lúmen foi estreitado.
Entre os grupos de doença do enxerto simulado e venoso, quatro índices bioquímicos, aspartato aminotransferase, bilirrubina sérica, bilirrubina total e creatinina, apresentaram alterações estatisticamente significativas. O cirurgião deve expor completamente a veia mamária interna e certificar-se de que ela não está ligada ao tecido circundante. A técnica fornece um processo de modelagem padronizado para o estudo de doenças venosas do enxerto em modelos animais.
