O objetivo geral do presente estudo é apresentar as técnicas de indução de infarto do miocárdio e infarto pós-miocárdio induzido insuficiência cardíaca em miniporcos adultos gottingen de peito fechado. Também pretendemos caracterizar o modelo de insuficiência cardíaca induzida pelo infarto pós-miocárdio em miniporcos e porcos landrace. Primeiro a avaliar a função do miocárdio e a morfologia no início do estudo, a ressonância magnética cardíaca de base é realizada um dia antes da indução do infarto do miocárdio.
Em seguida, o infarto do miocárdio é induzido pela oclusão intraluminal da artéria coronária descendente anterior esquerda. Após a deflação do balão, a reperfusão do miocárdio é induzida, e a terapia medicamentosa intercoronária, neste caso, thecal, é administrada pelo uso de microcateter. Como consequência do infarto do miocárdio, os porcos desenvolverão insuficiência cardíaca.
As consequências crônicas morfos-funcionais do infarto agudo do miocárdio são avaliadas por ressonância magnética cardíaca aos três e seis meses em miniporcos de Gottingen e aos dois meses em porcos landrace. Os porcos landrace são extintos após dois meses e os miniporos de Gottingen após oito meses de reperfusão. O resultado clínico do infarto pós-miocárdio induzido pela insuficiência cardíaca pode ser melhorado pelo desenvolvimento de novas terapias cardioprotetoras.
Tais terapias cardioprotetos eficazes em modelos animais pré-clínicos falharam na tradução clínica até agora por várias razões. Um antigo grupo da Hungria, juntamente com acadêmicos e outros parceiros, fornece uma ampla gama de serviços inovadores de pesquisa pré-clínica e desenvolvimento com foco, mas não se limitando a, novos medicamentos e dispositivos médicos para doenças cardiovasculares, por exemplo, infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca. Além disso, estamos desenvolvendo várias tecnologias cardioprotetoras internamente.
Assim, a falha do desenvolvimento clínico de terapias cardioprotetentes pode ser atribuída, pelo menos em parte, devido ao baixo valor translacional dos modelos de infarto do miocárdio em animais de pequeno porte. Grandes modelos animais com bom valor translacional são essenciais para o desenvolvimento bem-sucedido de terapias cardioprotetolas. Em contraste com os ensaios clínicos de terapias cardioprotetores em roedores e suínos landrace, o maior valor como modelo animal de grande porte, o resultado funcional cardíaco pode ser avaliado até apenas um a dois meses nesses animais.
O uso de outros miniporcos nos permite implementar períodos mais longos e completos até vários meses, que melhor refletem a situação clínica. Após a anestesia e a medição do peso corporal, é realizada ressonância magnética cardíaca para avaliação da morfologia cardíaca de linha de base, como dimensões de câmara e parede e função cardíaca, como fração de ejeção e saída cardíaca. Induzir anestesia dos animais com cloridrato de cetamina xilazina como uma injeção intramuscular na região do pescoço.
Use a cânula e-veia para substituição de alimentos e administração de medicamentos para prevenir ou tratar arritmias ventriculares. Quando a sala de cirurgia estiver preparada, coloque o animal na mesa de cirurgia. Fixar os membros e aplicar cunhas para imobilizar o animal em posição supina.
Desinfete o local cirúrgico com iodo povidone. O local cirúrgico neste caso é em torno da dobra cutânea entre o músculo gracilis e sartorius. Remova o cabelo no local cirúrgico com uma navalha.
Coloque eletrodos de ECG de superfície no triângulo de Einthoven. Coloque a máquina de anestesia e inicie a ventilação de pressão positiva. Isole a área cirúrgica desinfetada com uma cortina cirúrgica.
Aproxime-se da região femoral e faça uma incisão longitudinal na pele entre os músculos gracilis e sartório. Dissecar o tecido subcutâneo e a fáscia. Isole a artéria femoral.
Coloque duas suturas cirúrgicas abaixo da artéria femoral para controlar a hemorragia. Perfurar a artéria femoral. Cannula a artéria femoral usando a técnica Seldinger.
Conserte a baia na pele. Use a artéria para amostragem de sangue para análise bioquímica. Administre 5.000 UI de heparina através da baia femoral para garantir a anticoagulação adequada e prevenir trombose durante a intervenção cirúrgica.
Conecte o sensor de pressão ao vaso femoral para monitorar a pressão arterial durante toda a intervenção cirúrgica. Para calibração da pressão, coloque o sistema de gravação de pressão no nível do coração de cada animal. Depois de remover as bolhas de ar, a calibração de pressão zero é realizada quando a torneira de três vias está aberta à direção do ar livre.
Após a reparação do animal, o infarto do miocárdio é induzido pela oclusão intraluminal da artéria coronária descendente anterior esquerda Através da babaça femoral, introduza e avance o fio-guia para o arco aórtico e introduza o cateter guia sobre o fio guia. Após o posicionamento do fluoroscópio na posição anteroposterior, certifique-se de que não há trombo ou bolha de ar dentro do cateter, com aspiração de pelo menos cinco mililitros de sangue, o volume do cateter, a seringa conectada ao cateter. Conecte a outra parte do cateter à seringa cheia de agente de radiocontrast.
Tome cuidado para que a seringa seja mantida elevada para evitar a infusão de bolhas de ar na artéria coronária. Realize a angiografia da linha de base por preenchimento seletivo das artérias coronárias direita e esquerda com agente de contraste. Realizar pontuação bari após a angiografia da linha de base, que finalmente permite a estimativa da porcentagem do músculo miocárdio em risco.
Insira o fio guia de angioplastia transluminal percutânea através do cateter guia. Posicione-o distally para o local planejado da oclusão. Verifique a posição do fio guia PTCA por angiografia.
Determine por estimativa visual o tamanho ideal do balão com base no diâmetro da artéria coronária. Coloque o cateter de balão sobre o fio guia PTCA e avance-o para a posição planejada. Verifique a posição do cateter de balão por angiografia.
Infle o balão e confirme a oclusão total visualizando a parada do fluxo de contraste. Instrumentos de fita para a cortina cirúrgica para evitar a luxação do balão intracoronário. Registre e documente o sinal de OCG de oclusão por elevação de ST.
Cubra o animal com um dispositivo de aquecimento para manter a temperatura do núcleo. Em caso de arritmias ventriculares, siga o protocolo conforme descrito no texto. Verifique a pressão do balão a cada 30 minutos durante as duas horas de oclusão coronária.
Se houver uma diminuição de mais de 0,5 bar na pressão do balão, coloque-o de volta aos valores iniciais. Realize a angiografia de controle pouco antes do fim da oclusão coronária para verificar a colocação do balão mantido e a ausência de fluxo distally para o local de oclusão. Administre 2.500 UI heparina e um grama de sulfato de magnésio intracoronarily como um bolus lento para evitar trombose e arritmias.
Inicie a reperfusão com deflação de balão. Remova o balão deflacionado. Confirme o sucesso da reperfusão completa com angiografia coronária para demonstrar o fluxo sanguíneo na parte distal do vaso coronário.
Prepare-se para a administração de medicamentos intracoronários após o início da reperfusão do miocárdio. Para evitar a embolização da artéria coronária, preencha o microcateter de perfusão terapêutica com soro fisiológico. Coloque o microcateter sobre o fio guia PTCA.
Avance e confirme a posição do microcateter. A ponta do microcateter deve ser colocada ao nível de oclusão. Remova o fio guia PTCA.
Conecte o microcateter com a bomba de perfusão. Inicie a administração intercoronária. Após a administração de medicamentos, remova o microcateter e realize a angiografia de controle para excluir essa intervenção levou a embolias aéreas ou dissecção coronária.
Retire a baia arterial e amarre a artéria femoral proximal ao local da punção. Feche a ferida usando suturas contínuas. Aplique revestimento antisséptico.
Acabe com a anestesia através da retirada de isoflurane. As consequências crônicas morfofuncionais do infarto agudo do miocárdio são avaliadas por ressonância magnética cardíaca aos três e seis meses em miniporcos de Gottingen e dois meses em porcos landrace. A taxa de mortalidade não difere significativamente entre as duas raças.
Os tamanhos das cicatrizes cardíacas e os escores de BARI foram comparáveis entre as duas raças. As massas diastólicas ventriculares esquerdas na linha de base e durante o período de seguimento diferem entre as duas raças. A massa LVED nos miniporcos de Gottingen aumentou apenas moderadamente aos seis meses.
Em contrapartida, nos suínos landrace, a massa LVED aumentou quase 100% em dois meses. O infarto do miocárdio resultou em uma diminuição significativa da fração de ejeção em miniporcos aos três meses e seis meses. No entanto, nos suínos landrace, a fração de ejeção não mudou após dois meses.
As diferenças entre as duas raças em relação à fração de ejeção podem ser atribuídas a uma taxa de crescimento cardíaco intensiva em suínos landrace, e, portanto, alterada remodelação cardíaca. O aumento do peso cardíaco foi acompanhado por um aumento de quase 100% no peso corporal dos suínos landrace aos dois meses. Enquanto nos miniporcos de Gottingen, o ganho de peso corporal foi de apenas 8% após três meses e 30% após seis meses.
Para examinar ainda mais os sinais de insuficiência cardíaca, realizamos medições do volume atrial esquerdo indexado à área da superfície do corpo. O LAVi aumentou 34% nos miniporcos de Gottingen após seis meses, mas não mudou significativamente nos porcos landrace após dois meses. A presença ou ausência de edema pulmonar foi avaliada por ressonância magnética cardíaca nas imagens do localizador.
O edema pulmonar foi observado em ambas as raças como resultado da descompensação cardíaca. Nos miniporcos de Gottingen, o índice cardíaco não mostrou mudanças significativas nos pontos de tempo medidos. Enquanto em landrace suínos, o índice cardíaco aumentou quase significativamente.
O infarto do miocárdio efetuou não só a função ventricular esquerda, mas também resultou em um aumento significativo da fração de ejeção ventricular direita em ambas as cepas. Mostramos que o modelo ideal de miniporco gottingen imita parâmetros de insuficiência cardíaca pós-miocárdio funcionais e morfológicos comparáveis aos humanos. Trata-se de um modelo viável, produtível e translacional para avaliar a eficácia do tratamento do infarto agudo e crônico do miocárdio e de suas consequências.
Também mostramos método para o fornecimento de drogas locais para as coronárias usando microcateters. A caracterização abrangente dos modelos de infarto de peito fechado em Landrace e minipigs será útil para escolher os modelos animais de grande porte mais adequados para desenvolver novas terapias para insuficiência cardíaca pós-infarto.
