Transplante de coração em camundongos é um modelo valioso para estudar resposta aoimune Aqui, introduzimos uma nova técnica cirúrgica de transplante de coração abdominal heterotópico em camundongos. No transplante tradicional de coração de camundongos, a aorta do doador e a aorta abdominal receptora são anastomosas. A artéria pulmonar é anastomosada para o receptor inferior vena cava.
Neste novo transplante de coração de rato. A aorta doadora é anastomosada para o receptor de aorta abdominal e o doador intratorácico inferior vena cava é anastomosed para o receptor inferior vena cava. Agora começamos a demonstração experimental.
Depois de colocar o rato na caixa para inalação de isoflurane e anestesia, pese o rato. De acordo com o peso do rato, para dar injeção intraperitoneal de acepromacina de cetamina xilazina para anesthetizar o rato. Fixar e desinfeccionar o rato na mesa de operação quando a anestesia tiver efeito.
Corte a pele do pescoço para o abdômen inferior. Corte os músculos da parede abdominal e retire suavemente as vísceras para a esquerda. Em seguida, exponha a veia cava inferior.
Injete 0,4 mililitro da solução de heparina lentamente na cava vena inferior e espere por um minuto antes de puxar a agulha. Puxe a agulha e corte tanto a veia cava inferior quanto a aorta abdominal com uma tesoura para acelerar a exsanguinação. Abra a cavidade torácica realizando um corte em forma de u.
Exponha completamente o coração, pulmões e todos os vasos sanguíneos do tórax. Exponha a aorta torácica. Corte metade do lúmen.
Insira o tubo de irrigação na abertura da aorta torácica. Corte a veia pulmonar para facilitar a irrigação e a drenagem. Injete pelo menos dois milímetros de solução HTK de quatro graus.
O coração pára completamente de bater até que o fluxo de veia pulmonar esteja completamente claro. Retire o tubo de irrigação e desprende o esterno. Remova o timo.
Levemente despir a gordura ao redor do arco aórtico. Exponha e liga o tronco de arteria pulmonalis com uma sutura de 10 zero. Separe o fato e o tecido conjuntivo ligado na veia cava inferior intratorácica Expom e liga a cava vena superior com sete sutura zero e corte-a atrás da ligadura.
Faça uma sutura de sete zero ao redor da base do coração sob o arco aórtico. A veia cava inferior e a aurícula, em seguida, ligam os ramos da artéria pulmonar e os vasos pulmonares venosos. Transecte o arco aórtico o mais distal possível, mas certifique-se de ter um lúmen claro sem as aberturas de galhos laterais.
Os vasos pulmonares sob a ligadura e a veia inferior intratorácica cava perto do diafragma. Agora, tire o coração do peito. Coloque o coração do doador explantado em solução HDK fria de 4 graus e para preservar temporariamente.
Certifique-se de não estender um tempo de isquemia fria por mais de 60 minutos. Agora, começamos a demonstrar a operação do receptor. As etapas iniciais de operação são semelhantes às mostradas anteriormente para o rato doador, incluindo anestesia e esterilização.
Pele abdominal cortada de forma transversal. Após dissecção intestinal, cubra os órgãos abdominais com uma gaze molhada usando solução salina. Exponha a veia cava inferior e a aorta abdominal e liberte-as do tecido adiposo circundante.
Se necessário, ligante ou eletrocauterize vasos de galhos laterais sob os vasos renais. Insira as primeiras fórceps micro hemostáticas da direita na parte superior do cérebro e aorta sob os vasos renais. Insira as segundas fórceps micro hemostáticas da direita na parte inferior do cérebro e aorta.
Há mais de um centímetro para aorta e espaço venoso para anastomose entre duas fórceps hemostáticas. Faça uma incisão na aorta, um pouco mais perto do grampo inferior do que do grampo superior. Além disso, você pode usar uma agulha de 30G para fazer um pequeno buraco e abri-la com micro tesoura.
Coloque o coração na cavidade abdominal. A aorta na visão e a veia cava do outro lado e cobri-la com uma pequena gaze molhada. Adapte-se e costure a aorta do doador à aorta receptora, começando caudally.
Faça um nó e prossiga com uma sutura correndo até o topo desta incisão, cerca de quatro a cinco pontos. Em seguida, vire o coração para a direita, cubra-o novamente, e continue a sutura no lado esquerdo até chegar ao final caudal e nó-lo. Use micro tesoura para cortar um orifício redondo na veia cava inferior abdominal do receptor, que deve ter o mesmo tamanho do lúmen intratorácico inferior vena cava do doador.
A incisão deve ser localizada craniana à anastomose aórtica planejada. Faça a incisão da veia maior que a incisão aórtica. Flush doador intratorácico inferior vena cava.
Costura o doador intratooracic inferior vena cava para o receptor vena cava começando caudally. Amarre um nó e realize uma sutura de corrida até que o topo da incisão seja atingido. Use cinco pontos e continue a sutura à esquerda.
Por fim, amarre um nó em um canto da cauda e aperte cuidadosamente. Tenha cuidado para não puxar muito apertado. Coloque pequenas partes da esponja hemostática ao redor da veia e da anastomose aórtica.
Retire primeiro a parte inferior e depois os grampos micro hemostáticos superiores e enxágue a cavidade abdominal com cloreto de sódio quente de 0,9%. Tire a esponja hemostática. Observe os batimentos cardíacos do coração transplantado.
Se tudo estiver correto, o coração começará a contrair novamente. Coloque os intestinos de volta na cavidade abdominal e feche-o com quatro sutura zero. Forneça um ambiente quente e rico em oxigênio para os ratos transplantados se recuperarem.
Em nosso trabalho de pesquisa anterior, relatamos uma comparação de 40 casos globais de veia cava com veia cava versus 40 casos da artéria pulmonar tradicional ao procedimento de anastomose vena cava. O tempo de operação da anastomose do vaso em um grupo de veia cava para veia cava foi significativamente menor em comparação com a artéria pulmonar convencional para o grupo vena cava. A técnica cirúrgica do transplante de coração abdominal heterotópico em camundongos representa um modelo padrão para pesquisa em imunologia de transplante.
Esta nova técnica para a reconstrução do circuito sanguíneo apresentada aqui está facilitando o transplante de coração abdominal em camundongos. E isso é chamado de concomitante com isquemia quente reduzida e tempo de rebeating do coração enxertado, melhorando assim a taxa de sucesso deste modelo.
