O objetivo geral deste vídeo é estabelecer um modelo de rato de pancreatite aguda através da injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático. Todos os experimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob anestesia total.
Os analgésicos não foram utilizados para não interferir no curso natural da doença, evidenciado por literaturas anteriores e aprovado pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow. Acelere o rato de 8 a 12 horas antes da cirurgia. Prepare filtros de solução de taurocholate de 5% de sódio através de um microfiltro 0,22.
Autoclave os instrumentos cirúrgicos e materiais, incluindo fórceps, tesouras, porta-lâminas, porta-agulhas, clipe hemostático, grampos vasculares e as cortinas estéreis. A micro-seringa foi esterilizada através da irradiação. Com o camundongo, induza uma anestesia geral com injeção intraperitoneal de solução de sódio pentobarbital de 1%a uma dosagem de 50 miligramas por quilograma.
Fixar o mouse na posição supina em uma placa plana de espuma irradiada com a fita. Remova a pele de um rato com um creme de depilação do nível do processo xiphoide até a linha de conexão da coluna ilíca superior bilateral, com os lados esquerdo e direito paralelos à linha axilar frontal. Limpe a pele duas a três vezes com 0,5% de iodophor e deixe secar por um a dois minutos cada vez.
Cubra o mouse com cortinas estéreis. Corte a camada de pele aberta e abra subcutânea. Faça uma incisão abdominal mediana de aproximadamente dois a três centímetros.
Localize o duodeno da esquerda para a direita ao longo do estômago. Puxe suavemente o duodeno para fora e para o lado esquerdo usando fórceps cirúrgicos e um cotonete encharcado de desinfetante para expor o pâncreas, o ducto biliopancreático e a papila duodenal. Use 8-0 suturas para passar pela conexão entre o duodeno e o pâncreas ao redor da papila, puxe a sutura para o lado esquerdo do corpo do rato para corrigir o duodeno.
Puxe suavemente a pele e a borda inferior do fígado de lado. Aperte o ducto hepático comum. Fure o microinjetor no duto biliopancreático distal retrógrado.
Fixar a ponta da agulha perto da papila duodenal com um grampo. Infundir 10 microlitros de 5% de sódio taurocholate no duto biliopancreático a uma taxa de 5 microlitros por minuto. Mantenha o duto biliopancreatic fechado por 5 minutos para alcançar uma pressão estável.
Remova os grampos. Retire o microinjetor, remova o outro grampo e conserte a sutura. Restaure o duodeno na posição anatômica original e verifique o sangramento.
Feche a ferida com suturas 6-0. Remova a cortina estéril. Desinfete a incisão com 0,5% de iodophor.
Recupere os animais da anestesia em uma almofada térmica de 37 graus Celsius. Administre 0,8 mililitro de 0,9% de soro fisiológico subcutâneamente para suplementação de fluidos. Em 24 horas após a operação, anestesia o mouse com sódio pentobarbital usando a mesma dose e rota de injeção.
Recolhe todo o sangue da aorta abdominal e gire a 1.500 x g durante 15 minutos para isolar o soro para testes sorológicos. Recolhe o pâncreas e os tecidos pulmonares para avaliação histologia. Mergulhe o pâncreas em solução de paraformaldeído de 4% por 24 horas.
Desidratar em uma série de concentrações de álcool e incorporar em parafina. Use um microtome para preparar 5 seções de tecido de pâncreas de espessura. Realizar coloração de H&E para a avaliação histológica do pâncreas.
Os camundongos estavam ligeiramente inativos e tiveram peso perdido em 24 horas após a operação em comparação com a pré-operação. As taxas de sobrevivência dos camundongos controle e SAP foram de 100% e 72,7%, respectivamente, em 72 horas após a operação. De acordo com os resultados da coloração da H&E das seções do pâncreas, a necrose pulpal do tecido do pâncreas pôde ser observada em camundongos SAP, enquanto não foram encontradas alterações significativas em camundongos de controle.
Além disso, níveis significativamente aumentados de atividade de amilase, lipase, pâncreas e MPO pulmonar foram encontrados em camundongos SAP em comparação com camundongos de controle. Além disso, também foram encontrados níveis significativamente elevados dos índices hepáticos e renais, incluindo ALT, AST, BUN e creatinina. Usando injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático, pancreatite aguda grave pode ser induzida em camundongos.
Bem exposição do duto biliopancreático para garantir a punção bem sucedida. Durante a punção, certifique-se do ângulo e força adequados para evitar a perfuração do ducto biliopancreático. O modelo SAP induzido por TC é um modelo adequado para estudar os mecanismos envolvidos na pancreatite aguda grave.
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