L’objectif global de cette vidéo est d’établir un modèle murin de pancréatite aiguë par injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique. Toutes les expériences impliquant des animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow. Toutes les interventions chirurgicales ont été effectuées sous anesthésie complète.
Les analgésiques n’ont pas été utilisés afin de ne pas interférer avec l’évolution naturelle de la maladie, ce qui a été mis en évidence par des publications antérieures et approuvé par le Comité d’éthique animale de l’Université Soochow. Jeûnez la souris huit à 12 heures avant la chirurgie. Préparer des filtres de solution de taurocholate de sodium à 5% à travers un microfiltre de 0,22.
Autoclavez les instruments et les matériaux chirurgicaux, y compris les pinces, les ciseaux, le porte-lame, le porte-aiguille, le clip hémostatique, les pinces vasculaires et les rideaux stériles. La micro-seringue a été stérilisée par irradiation. Avec la souris, induire une anesthésie générale avec injection intrapéritonéale de solution de sodium pentobarbital à 1% à une dose de 50 milligrammes par kilogramme.
Fixez la souris en position couchée sur une plaque plate en mousse irradiée avec le ruban adhésif. Retirez la fourrure d’une souris avec une crème d’épilation du niveau du processus xiphoïde jusqu’à la ligne de connexion de la colonne iliaque supérieure antérieure bilatérale, avec les côtés gauche et droit parallèles à la ligne axillaire antérieure. Essuyez la peau deux à trois fois avec 0,5% d’iodophore et laissez-la sécher pendant une à deux minutes à chaque fois.
Couvrez la souris avec des rideaux stériles. Coupez la couche de peau ouverte, puis ouvrez-la par voie sous-cutanée. Faites une incision abdominale médiane d’environ deux à trois centimètres de long.
Localisez le duodénum de gauche à droite le long de l’estomac. Retirez doucement le duodénum et vers le côté gauche à l’aide d’une pince chirurgicale et d’un coton-tige imbibé de désinfectant pour exposer le pancréas, le canal biliopancréatique et la papille duodénale. Utilisez 8-0 sutures pour passer à travers la connexion entre le duodénum et le pancréas autour de la papille, tirez la suture sur le côté gauche du corps de la souris pour fixer le duodénum.
Tirez doucement la peau et le bord inférieur du foie de côté. Serrez le canal hépatique commun. Percer le micro-injecteur dans le canal biliopancréatique distal rétrogradement.
Fixez la pointe de l’aiguille près de la papille duodénale avec une pince. Infuser 10 microlitres de taurocholate de sodium à 5% dans le canal biliopancréatique à raison de 5 microlitres par minute. Gardez le canal biliopancréatique fermé pendant 5 minutes pour obtenir une pression stable.
Retirez les pinces. Retirez le micro-injecteur, retirez l’autre pince et fixez la suture. Restaurez le duodénum à la position anatomique d’origine et vérifiez le saignement.
Fermez la plaie avec 6-0 sutures. Retirez le drap stérile. Désinfectez l’incision avec 0,5% d’iodophore.
Récupérez les animaux de l’anesthésie sur un coussin thermique de 37 degrés Celsius. Administrer 0,8 millilitre de solution saline à 0,9 % par voie sous-cutanée pour la supplémentation en liquide. 24 heures après l’opération, anesthésier la souris avec du pentobarbital sodique en utilisant la même dose et la même voie d’injection.
Prélever le sang total de l’aorte abdominale et tourner à 1 500 x g pendant 15 minutes pour isoler le sérum pour les tests sérologiques. Prélever le pancréas et les tissus pulmonaires pour l’évaluation histologique. Immerger le pancréas dans une solution de paraformaldéhyde à 4% pendant 24 heures.
Déshydrater dans une série de concentrations d’alcool et incorporer dans la paraffine. Utilisez un microtome pour préparer 5 micro coupes de tissu pancréatique épais. Effectuer une coloration H & E pour l’évaluation histologique du pancréas.
Les souris étaient légèrement inactives et avaient perdu du poids 24 heures après l’opération par rapport à la pré-opération. Les taux de survie des souris témoins et SAP étaient respectivement de 100 % et 72,7 %, 72 heures après l’opération. Selon les résultats de coloration H & E des sections du pancréas, une nécrose pulpaire du tissu pancréatique a pu être observée chez les souris SAP alors qu’aucun changement significatif n’a pu être trouvé chez les souris témoins.
De plus, des niveaux significativement accrus d’amylase, de lipase, de pancréas et d’activité pulmonaire MPO ont été trouvés chez les souris SAP par rapport aux souris témoins. En outre, des niveaux significativement élevés des indices hépatiques et rénaux, y compris ALT, AST, BUN et créatinine ont également été trouvés. En utilisant l’injection rétrograde de taurocholate de sodium dans le canal biliopancréatique, une pancréatite aiguë sévère pourrait être induite chez la souris.
Bonne exposition du canal biliopancréatique pour assurer la ponction réussie. Pendant la ponction, assurez-vous de l’angle et de la force appropriés pour éviter la perforation du canal biliopancréatique. Le modèle SAP induit par TC décrit ici est un modèle approprié pour étudier les mécanismes impliqués dans la pancréatite aiguë sévère.
Il s’agit d’un modèle économique utilisant des réactifs moins coûteux et cette vidéo aide à former le chirurgien novice plus rapidement.
