O artigo relatou a identificação de quimioattractant de rizobactérias em exudatas raiz usando um ensaio de quimiotaxis melhorado. Os acionamentos radiculares do implante de quimiotaxis são significativos para a colonização das raízes para o crescimento das plantas, promovendo bactérias rizobia e para fornecer as facções úteis de interações entre plantas e micróbios. Muitos métodos foram utilizados para a análise de quimifis bacterianas.
Por exemplo, método de placa de natação, cappilary como método, dispositivo de deslizamento microfluido. O ciclo de experiência do método da placa de natação foi longo. O erro experimental do método cappilary foi lançado, o dispositivo de deslizamento microfluido é caro para experimentar.
Estabelecemos um método simples para identificar rapidamente o quimioattractant que poderia induzir o movimento quimotactic de bactérias promotoras do crescimento da rizosfera usando lâminas de vidro estéreis sem passos complicados. O método reduziu o erro da contagem da placa e encurtou o ciclo de experimentos. Em relação à identificação de uma substância quimiofos, o novo método poderia economizar de 2 a 3 dias e também reduzir o custo dos materiais experimentais.
Distribua aleatoriamente sementes de arroz na cultura de câmara cresce por uma semana e adicione água estéril duas vezes. Selecione as mudas de arroz de tamanho semelhante e plante em um meio líquido de 50 mililitros. Incubar por 48 horas a 22 graus Celsius e em condições sépticas.
Exsudates de raiz de arroz serão lançados no médium da Sra. A análise de espectrometria de massa de cromatografia líquida foi realizada utilizando-se o sistema UHPLC. Prepare a solução aquosa quimioattractant para garantir que seja estéril.
Filtre a solução de quimioterapia com um filtro de bactérias de 0,22 micrômetro. A solução aquosa quimioattractant foi a única substância obtida dos estudos LCMS dissolvidos na água. A solução de ácido citrix foi usada como exemplo.
Todas as ações devem ser realizadas ao lado da lâmpada. Marque a posição média do deslizamento de vidro em um intervalo de 1 centímetro. Certifique-se de que a lâmina de vidro seja esterilizada várias vezes na chama.
Na solução de 30 microliter quimioattractant à esquerda do escorregador de vidro garantir que as bactérias foram cultivadas até o estágio logarítmico. Adicione a solução de bactérias de 30 microliter à direita do escorregador de vidro. Esterilizar o laço inoculante várias vezes na chama usando o laço inoculante para conectar a solução aquosa quimioattractant à solução de bactérias e mantê-la em temperatura ambiente por 20 minutos em um banco limpo.
Após 20 minutos desconecte a linha de conexão com papel filtro. Certifique-se de que o tubo centrífugo de 1,5 mililitro é estéril. Colete a solução aquosa quimioattractant à esquerda do escorregador de vidro.
Transfira a solução para o tubo centrífugo estéril de 1,5 mililitros. Adicione o volume apropriado do corante frontal da célula ao tubo centrifutado. Após 2 minutos, colete os líquidos permitidos para contagem de bactérias e observação microscópica com uma câmara de contagem de sangue.
Determine o número de microrganismos viáveis atraídos usando uma equação a seguir. Um RCI mais alto indica uma forte reação ao quimioattractant. Os resultados indicaram que o ácido cítrico e o ácido fálico têm os maiores índices de quimiotaxis.
Os resultados do novo método de ensaio de quimiotaxis escreveram que a concentração bacteriana de ácido cátrico, ácido fálico e experimentos de Galactose foram significativamente maiores do que os do grupo controle e controle positivo. O ácido cítrico escreveu a quimiotaxis mais forte. Os resultados experimentais estavam de acordo com os resultados dos métodos tradicionais.
Este protocolo de vídeo pode ser apresentado como um recurso valioso para o esclarecimento das interações entre plantas e micróbios.
