A pesquisa de longo prazo e o uso de um agente de biocontrole dependem da disponibilidade de técnicas eficazes e econômicas de criação, e este protocolo tem se mostrado eficiente para a criação desse parasitoide. Atualmente, há um enorme interesse em criar este parasitoide para pesquisa ou liberação de campo, e o protocolo beneficiará futuras pesquisas de longo prazo e uso deste promissor agente de biocontrole. Os primeiros usuários podem precisar entender alguma biologia básica dos insetos envolvidos através da leitura das referências relevantes fornecidas no artigo e algumas práticas dos métodos.
Para fazer a dieta do hospedeiro, primeiro, prepare a porção líquida da dieta como descrito no manuscrito. Em seguida, adicione 25 a 30 gramas de mirtilos amassados a um frasco vazio de 250 mililitros. Em seguida, despeje o líquido no frasco com o líquido apenas cobrindo o topo do purê de mirtilos.
Em seguida, para criar a hospedeira Drosophila suzuki, primeiro corte um pedaço de papel toalha absorvente e torça-o no centro. Em seguida, coloque a parte do meio torcido da toalha de papel no frasco de dieta. Para reter a umidade, use água destilada para molhar a toalha de papel e a dieta.
Então, para transferir moscas adultas sexualmente maduras, remova cuidadosamente a rolha de um frasco de colônia de moscas e inverta-a no frasco da dieta. Depois de uma semana dessa exposição, segure as moscas em uma câmara ambiental por três semanas para o surgimento de moscas. Para expor larvas hospedeiras a parasitoides, primeiro remova as moscas adultas e a toalha de papel do frasco, deixando os ovos de mosca e larvas.
Para servir como substrato de pupação para as larvas, dobre uma nova toalha de papel absorvente e insira-a no frasco. Em seguida, aspire seis pares femininos e masculinos do parasitoide G3 Ganaspis brasiliensis no frasco e listrar uma fina camada de mel na parte inferior da rolha de espuma. Para coletar e armazenar os parasitoides, remova os adultos após cinco dias.
Em seguida, armazene o frasco na câmara ambiental por 35 dias sob as condições mencionadas anteriormente. Com o surgimento de vespas adultas, aspirar-as três vezes por semana. Para segurar as vespas, primeiro coloque uma toalha de papel umedecido, mas não saturada com água destilada no fundo de um frasco de Drosophila de 2,5 por 9,5 centímetros quadrados.
Em seguida, transfira cerca de 60 vespas para o frasco e marque a data de emergência. Guarde o frasco na câmara ambiental. Duas vezes por semana, coloque uma fina camada de mel na parte inferior da rolha de espuma dos frascos.
Primeiro, organize a criação em larga escala de Drosophila suzuki colocando 1.500 a 2.000 moscas adultas sexualmente maduras a uma proporção sexual de 50:50 em uma gaiola grande, tricotada e coberta de malha. Em seguida, coloque um prato com algodão encharcado de água e quatro a seis pratos de Petri com meio Drosophila padrão na gaiola. Duas vezes por semana, substitua as placas de Petri expostas por outras novas.
Coloque cada placa de Petri infestada sem a tampa em um copo de plástico de 800 mililitros e cubra o copo com uma malha fina. Em seguida, incubar os copos a 23 graus Celsius e 75% de umidade relativa por 12 a 15 dias. Após a incubação, transfira drosophila suzuki adulto recém-hatched para uma gaiola de criação.
Em seguida, comece a preparar as larvas hospedeiras enxaguando mirtilos em água fria por um minuto e mergulhe as frutas em uma bacia cheia de uma solução de alvejante, diluída para 5% por três minutos. Em seguida, encha pratos petri de nove centímetros com as mirtilos lavados. No final da tarde, coloque os pratos de Petri na gaiola de criação e deixe-os durante a noite.
Na manhã seguinte, bata suavemente nas placas de Petri para desalojar moscas das frutas e remover as frutas da gaiola de criação. Enquanto isso, prepare uma gaiola de parasitismo e uma gaiola de emergência para o parasitoide G1 Ganaspis brasiliensis. Ambas as gaiolas devem ter uma corda fina abaixo do teto para suspender um ou mais alimentadores.
Em cada gaiola, suspenda um frasco de Drosophila contendo água e vedação com um plugue de acetato de celulose de cabeça para baixo do teto a cada cinco a sete dias, dependendo da umidade relativa. Imediatamente após tirar mirtilos infestados da gaiola Drosophila suzuki, colocá-los na gaiola de parasitismo com 1.500 a 2.000 vespas Ganaspis brasiliensis por dois a três dias. Em seguida, colete as frutas em um copo plástico de 800 mililitros com papel absorvente na parte inferior.
Incubar o copo aberto na gaiola de emergência ou eclosão a 21 graus Celsius e 65% de umidade relativa por pelo menos 28 dias. Durante a segunda e terceira semanas de incubação, verifique semanalmente a gaiola para o encerramento do hospedeiro antecipado. Para facilitar a sucessiva coleta parasitoide, remova as moscas adultas.
No final da quarta semana de incubação, forneça um alimentador e uma fonte de água para a gaiola. Recolher cerca de 10 a 15% das vespas adultas e transferi-las para a gaiola de parasitismo para substituir vespas velhas e improdutivas. Das vespas restantes da gaiola de eclosão, armazene até 700 adultos a uma relação sexual de 50:50 com um copo plástico de 800 mililitros contendo um tubo de dois mililitros cheio de água e selado com um rolo de algodão dental no fundo do copo.
Guarde o copo com um estado de emergência marcado em uma câmara ambiental por até um mês. Para parasitoides de transporte, coloque cerca de 200 adultos em um tubo cônico de 50 mililitros. Em seguida, coloque todos os tubos em um recipiente de transporte isolante junto com blocos de gelo.
Este protocolo resultou no sucesso da criação em pequena escala do G3 Ganaspis brasiliensis, um agente parasitoide, contra a peste agrícola Drosophila suzuki no laboratório. A produção de descendentes não foi afetada por diferenças na densidade parasitoide e no tempo de exposição. A geração em larga escala do G1 Ganaspis brasiliensis também pôde ser alcançada, com a produção começando cinco semanas após a exposição inicial à hospedeira Drosophila suzuki.
Da semana 8 até a semana 22, a produção parasitoide tornou-se proporcional à quantidade de frutas expostas a eles. É extremamente importante manter uma temperatura de criação adequada, controlar a umidade e sempre fornecer alimentos para insetos adultos. Os métodos poderiam ser melhorados otimizando ainda mais as densidades de criação de hospedeiros e parasitoides para maximizar a reprodução de vespas e explorando a possibilidade de criar este parasitoide em hosts alternativos.
