Os biobancos são recursos essenciais para a investigação translacional e clínica básica, mas também atuam como atores-chave que ligam a investigação académica e a indústria farmacêutica-biotecnológica. Este protocolo apresenta os procedimentos operacionais padrão do biobanco no IAO, um biobanco totalmente certificado que trabalha em conformidade com o mais novo padrão para biotecnologia, biobancos e requisitos gerais para biobancos. A disponibilidade de bioespécimes de alta qualidade de pacientes com câncer é fundamental para o desenvolvimento de ferramentas de diagnóstico de próxima geração e os terapeutas as adaptam a pacientes individuais.
O biobanco de material biológico de pacientes com câncer requer pessoal especializado e inúmeras certificações. O pessoal deve ser constantemente treinado e atualizado. Este protocolo deve, portanto, ser o ponto de partida para aqueles que desejam estabelecer um biobanco.
Para começar, difundir um vídeo educativo de desenho animado nas salas de espera para informar os pacientes sobre a importância do impacto da RPA. Forneça marcadores de gadget para todos os pacientes. Use o software LIMS para rastrear todas as amostras biológicas.
Identifique pacientes usando códigos. Atribua um código exclusivo a cada indivíduo que corresponda ao número do prontuário médico. Verifique se o paciente está inscrito em um ensaio clínico ou em um projeto de pesquisa aprovado especificado, preenchendo corretamente o campo do projeto de estudo em cada perfil de paciente.
Informe os técnicos se o risco de infecção é desconhecido. Rejeitar espécimes com resultados positivos ou riscos desconhecidos. Para amostras frescas, registre as amostras de sangue no software do biobanco.
Rotule os vacutainers com o código de identificação do biobanco e entregue-os aos usuários autorizados. Para amostras congeladas armazenadas no biobanco, prepare dois tubos revestidos em 2D do criobanco de 900 microlitros de sangue. Registre as alíquotas no software do biobanco.
Coloque-os em uma placa de código de barras especificada e armazene-os a menos 80 graus Celsius para garantir uma temperatura constante. Despeje o sangue dos tubos de coleta de EDTA no tubo cônico estéril de 50 mililitros vazio e dilua-o usando PBS 1X estéril. Use o PBS para enxaguar o tubo de sangue.
Centrifugar os tubos a 400 RCF por 30 minutos a 20 graus Celsius e processar os tubos sob um exaustor de risco biológico. Recupere a camada branca média contendo PBMCs usando uma pipeta Pasteur e coloque-a em um novo tubo cônico estéril de 50 mililitros. Adicione até 45 mililitros de PBS para lavar os PBMCs.
Misture e centrifugar a 400 RCF por 10 minutos a quatro graus Celsius. Recupere o pellet e ressuscite-o no PBS. Em seguida, conte as células usando câmaras de Burker descartáveis.
Repita a lavagem PBS para PBMCs conforme descrito no manuscrito do texto. Diluir os PBMCs no meio congelador e preparar tubos revestidos 2D de criobanco transferindo um mililitro de células ressuspensas para cada tubo de crio. Coloque as amostras em uma caixa criogênica específica e armazene-as a menos 80 graus Celsius o mais rápido possível.
Centrifugar o vacutainer contendo as amostras de sangue total a 2 000 G durante 10 minutos a quatro graus Celsius. Remova a camada superior do plasma usando uma pipeta Pasteur de três mililitros e transfira-a para um tubo cônico estéril de 15 mililitros. Em seguida, centrifugar a 16.000 RCF por 10 minutos a quatro graus Celsius para eliminar as células sanguíneas contaminantes.
Transfira o plasma para tubos revestidos de um mililitro de criobanco 2D. Registre as alíquotas no software do biobanco. Coloque-os em uma placa de código de barras específica e armazene-os a menos 80 graus para garantir uma temperatura constante.
Ter amostras de tecido examinadas por um patologista para determinar se o material que não é necessário para procedimentos de diagnóstico é suficiente para fins de pesquisa. Sempre que possível, colete até mesmo a contraparte não patológica do tecido patológico. Coloque as amostras em placas de Petri de cultura de células estéreis rotuladas como P e NP. Mantenha o tecido no gelo a quatro graus Celsius e divida-o em três partes cada.
A, B e C, se houver material suficiente disponível. Para amostras de tecido fresco marcadas como A, colocar as alíquotas frescas de tecido P e NP em tubos com o meio de cultura apropriado definido em cada protocolo específico e enviá-las para unidades de pesquisa externas. Para amostras de tecido OCT rotuladas como B, preencha-as com resina OCT e coloque-as imediatamente em um aparelho de congelamento flash a menos 80 graus Celsius.
Para amostras de tecido marcadas como C, coloque as amostras de tecido restantes em tubos revestidos 2D de criobanco no aparelho de congelamento flash. Armazene as placas a menos 80 graus Celsius. Um total de 38.446 biópsias líquidas biológicas anotadas e 10.205 amostras de tecido foram coletadas de abril de 2012 a dezembro de 2021.
O número de amostras coletadas, especialmente tecidos de 2020 a 2021, diminuiu devido à pandemia de COVID-19 e à redução relacionada nos procedimentos oncológicos. As amostras coletadas obtidas das divisões de urologia, ginecologia, ultrassonologia e das divisões de cirurgia de cabeça e pescoço, abdominal, pélvica e torácica foram analisadas detalhadamente. O maior número de amostras de tecido foi coletado de tumores de mama.
A coleta de outros espécimes biológicos, como urina, fezes e swabs bucais, aumentou significativamente após a demanda ao longo dos anos. Esta opção fornece uma plataforma fundamental para o armazenamento de amostras biológicas e melhora a reprodutibilidade dos programas de pesquisa sobre o câncer. Essas amostras podem ser usadas para diferentes aplicações de pesquisa, como sequenciamento de próxima geração ou espectrometria de massa.
Nossa plataforma é capaz de implementar novos algoritmos de inteligência artificial em pesquisas translacionais com o potencial de mudar a maneira como os pacientes com câncer são tratados.
