Este trabalho foi financiado pelas contribuições filantrópicas da John G. e Maria Stella Kenedy Memorial Foundation (Grant # 0727033) ea Research Alliance Melanoma. Os autores gostariam de agradecer à Universidade de Tissue Texas MD Anderson Cancer Center Institucional Bank (ITB) para coordenar a distribuição de tecidos e recolha e facilitar a investigação translacional, bem como Dr. Ignacio Wistuba, Dr. Victor Prieto, o Departamento de MD Anderson Cancer Center Patologia e do Programa de Melanoma do chute Lua. Por fim, os autores gostariam de agradecer todos os pacientes e famílias afetadas por melanoma.

Declaração de ética: Este protocolo é aprovado pela University of Texas MD Anderson Cancer Center. 1. Espécime Procurement <ol><li> Coletar amostras de tecido de tumor pesquisa excesso e tecido normal relacionada 10-12. Conservar as amostras em gelo triturado, para evitar autólise. </li><li> Enviar todos os tecidos, dispositivos médicos e corpos estranhos removidas durante um procedimento cirúrgico para o Departamento de Patologia para exame necessário, a fim de facilitar um diagnóstico patológico. </li><li> Lidar com tecido alocados para a pesquisa de acordo com a investigação e as políticas aplicáveis ​​e os procedimentos bancários tecido. NOTA: coleção Biospecimen envolve a coordenação dos patologistas, patologistas &#39;assistentes, histotechnologists e especialistas de recolha de tecidos. </li></ol> 2. Patologia Quality Assurance (QA) <ol><li> Completar e verificar os registros do paciente como uma medida precoce QA e consultar um patologista para avaliar pa diagnósticotient registros (relatórios de patologia, slides de tecidos, etc.) e amostras de tecidos. Amostras de tecido juiz sobre características morfológicas de interesse, como porcentagem do tumor, necrose, a interface tecido-tumor, etc. Isto está de acordo com as melhores práticas biorrepositório 10-12. </li><li> Após a revisão inicial, realizar revisões periódicas dos dados biorrepositório e amostras de investigação durante toda a duração da estadia dos biospecimen. </li><li> Resultados de links e anotações de investigações histopatológicos e outros para as amostras e fornecer esses dados para os pesquisadores por meio de um sistema de software biorrepositório proprietário. NOTA: processos de QA garantir a integridade de ambos os aspectos clínicos e técnicos das operações biorrepositório. </li><li> Realizar testes genéticos e moleculares para verificar e caracterizar as amostras para uso clínico. </li><li> Coletar e analisar os dados com base no feedback dos pesquisadores que têm vindo a utilizar as amostras de experimentos de laboratório. Pistaamostras que utilizam a tecnologia de código de barras. Esse sistema de rastreamento eletrônico também é defendida nas melhores práticas biorespository 10-12. </li></ol> 3. Espécime / processamento de tecidos <ol><li> Sempre armazenar amostras de tecido fresco em gelo húmido e processo tão rapidamente quanto possível, de modo a limitar as mudanças induzidas pela extracção da amostra de tecido a partir do seu ambiente natural. Processo normal tumor-combinado e amostras de tecido tumoral separadamente para evitar a contaminação cruzada. NOTA: Com base em protocolos de pesquisa, o processamento pode envolver biospecimen recolha das amostras em um ou mais tipos de meios de comunicação. </li><li> Antes de iniciar o processo, preparar um prato de cultura estéril de Petri, um bisturi, bem como uma agulha ou uma pinça para processamento de tecidos. Certifique-se de que os tubos foram preparadas, etiquetado, e colocado para fora, a fim de limitar o tempo de processamento da amostra (Figura 2). </li><li> Todas as informações tecido relevante, tais como nome do paciente, número, o tratamento, a data decirurgia, e outras informações relevantes que possam ser apropriadas para o estudo, devem ser feitas facilmente acessíveis em um banco de dados tecido institucional. A informação limitada paciente deve ser realizada no laboratório em papel ou em formato de planilha. NOTA:. Só coletar informações biospecimen relevantes para a natureza do viz pesquisa, pesquisa biomédica básica, pesquisa clínica, investigação de translação, etc. Para obter informações específicas da doença, a equipe biorrepositório deve coletar dados considerados necessários pela literatura atual e organizações que regem a garantir o diagnóstico adequado e de investigação significativa. Isto inclui, mas não está limitado a tipos de tumores e cancro preparo informações. </li><li> Plano de todas as experiências subsequentes desejados antecipadamente, para decidir sobre o tamanho de secções de tecido necessárias para cada tipo de análise, assim como a localização de excisões. Idealmente, embora impossível, todas as análises devem ser representativas da secção de tecido inteiro, a fim de explicar heterogenei tecidoty e limite viés de análises a jusante. Coloque todos os itens necessários para fora em avanço como representado na Figura 2. </li><li> Coloque a amostra de tecido em campo aberto Petri prato de cultura, plana contra a superfície. NOTA: Permitir somente o pessoal autorizado da biorrepositório para lidar com amostras identificadas e para revisar os dados de saúde identificados. Os investigadores devem acessar somente os identificadores de doentes, como permitido pelo consentimentos e na forma regulamentada pelo IRB. Todas as amostras devem ser adequadamente rotuladas e devem incluir, no mínimo, um número de identificação de tecidos e tecido tipo único. Não incluem qualquer PHI nos rótulos, de acordo com as regulamentações HIPAA. </li><li> Inspecione a amostra de todos os ângulos, para obter uma melhor compreensão da sua estrutura e dimensões. Pin a amostra para o fundo do prato com a agulha, e vá para a linha de divisão do tecido ao longo do seu eixo maior e mais representativo. </li><li> Corte um pequeno pedaço de tecido e colocá-lo em um estéril 1,5 ml microcentrifuge tubo contendo 1 ml de solução de estabilização de ARN. Esta amostra pode ser colocada em gelo durante o restante do processo e armazenadas a 4 ° C até ser necessário. NOTA: Ao trabalhar com ARN, as luvas devem ser sempre usadas e pontas de filtro sem RNase devem ser usadas para limitar as possibilidades de degradação e contaminação ARN. </li><li> Lay out de uma cassete de biópsia aberta e pré-rotulados na tampa da caixa de Petri de cultura. Corte um pedaço de tecido com a espessura de 3 a 5 mm e transferi-lo para a cassete. Coloque a gaveta em 10% de formalina tamponada neutra (NBF) para um mínimo de 72 hr. Transfira a cassete em etanol 70% para armazenamento a longo prazo antes de parafina-incorporação. NOTA: Rotulagem de cassetes devem ser realizados a lápis ou com marcadores recomendado como uso de xileno durante o processamento, caso contrário, apagar etiquetas. </li><li> Corte um pedaço de tecido e colocá-lo em um molde de tecido. Cubra a secção de tecido em temperatura de corte ideal (OCT) composto, e congelá-lo imediatamentea -20 ° C durante cryosectioning. Esta secção de tecido pode ser armazenado a -20 ° C até estar pronto para cryosectioning. </li><li> Cortar uma ou várias peças de tecido e transferi-los para um tubo de 50 ml contendo tampão de MACS (1x tampão fosfato salino (PBS), 0,5% de soro fetal de bovino (FBS), 2 ácido etilenodiaminotetracético mM (EDTA)) para o fluxo de posterior análise de citometria . Para a citometria de fluxo, amostras maiores pode ser preferível que as células podem ser perdidos durante a dissociação tumor, fixação e permeabilização celular quando necessário. Geralmente, esta seção pode ser tomada no final, uma vez que todas as outras peças foram processadas. Sobra amostra representativa do tumor podem ser utilizados para citometria de fluxo. Opcionalmente, este tubo pode ser armazenado a 4 ° CO / N ou utilizado para a coloração de citometria de fluxo, imediatamente após a digestão numa suspensão de células (ver Passo 4 - Coloração de citometria de fluxo). </li><li> Cortar o tecido restante em pedaços não maiores do que um tamanho máximo de 0,5 mm x 0,5 mm e transferi-los para criogénicofrascos para congelação imediata em nitrogênio líquido. Estas amostras de snap congelado pode ser utilizado para análises futuras e para fins de colaboração. NOTA: cuidados extras devem ser tomados quando se trabalha com nitrogênio líquido como contato direto pode causar ferimentos graves. Olhos devem ser protegidos com óculos de segurança com proteção lateral ou com uma viseira. Luvas criogênicas também deve ser usado para proteger contra queimaduras causadas por nitrogênio líquido salpicos e contacto directo. As luvas devem se encaixar corretamente, mas estar solto o suficiente para ser removido rapidamente devem nitrogênio líquido respingo neles. </li></ol> 4. Citometria de Fluxo Coloração <ol><li> A homogeneização de tecidos <ol><li> Preparar o meio de digestão com DMEM (40 ml), DNase I (50 U / ml) e a colagenase I (2 mg / mL). Coloque tumor fresco ou O / N-armazenado em tampão MACS na tampa de uma placa de Petri, e submergir com meio de digestão. NOTA:. Existem métodos de digestão diferentes, cada um com vantagens (isto é, proteína da superfície celular expression, viabilidade). Verifique se você tem o método adequado para a sua aplicação a jusante desejar. </li><li> Pin do tumor para o fundo do prato com uma agulha, e o corte a partir do exterior para o centro, com um bisturi, até que o tumor tem uma textura semelhante a pasta. Transferir mix tumor a um tubo de 50 ml, selo e coloque em um saco plástico para evitar vazamentos. Tubo de transferência para uma incubadora, e rodar a 225 rpm, 37 ° C, 1 h. </li><li> Filtro de suspensão de células tumorais através de um filtro de células 70μm. Centrifuga-se a suspensão de células a 250 xg, 4 ° C, 5 min. Ressuspender o sedimento de células em 1 ml de tampão de FACS (500 ml de PBS, 1 ml de 0,5 M de EDTA, estoque de 10 ml de FCS ou FBS). </li><li> Contagem de células utilizando um hemocitómetro e re-suspensão numa concentração de 1x10 7 células / ml. Transferir 100 ul por cavidade (10 6 células) em uma placa de fundo redondo de 96 bem para a coloração. </li></ol></li><li> Viabilidade e Coloração de anticorpos <ol><li> Adicionar 200 uL de solução de viabilidade mancha a cada poço e mistura-se. IncuBATE durante 30 minutos, a 4 ° C, no escuro. Spin down células a 250 xg, 4 ° C, 5 min, e aspirar o sobrenadante. </li><li> Adicionar mistura de anticorpos no recomendado / concentração titulado (como por fabricante) para antigénios de superfície em 200 ul de tampão de FACS. Incube as células a 4 ° C, 30 min, no escuro. Spin down células a 250 xg, 4 ° C, 5 min, e aspirar o sobrenadante. </li><li> Lava-se com 200 ul de tampão de FACS, as células de girar a 250 xg, 4 ° C, 5 min, e o sobrenadante aspirado. Ressuspender as células em 200 ul de tampão de FACS e prossiga para a citometria de fluxo para a aquisição e análise. NOTA: Se executar citometria de fluxo coloração intracelular, execute fixação e permeabilização passos e coloração intracelular entre os passos 4.2.2 e 4.2.3. Se se realizarem coloração de citocinas, as células devem ser pré-activada de coloração anterior, tal como recomendado, e um inibidor de transporte de proteína intracelular e secreção de tais como monensina deve ser utilizado durante a activaçãoassegurar a retenção de factores solúveis. As células fixadas podem ser armazenadas a curto prazo (uma semana) a 4 ° C no escuro antes da aquisição de um citómetro de fluxo. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Biology.+Fixing+problems+with+cell+lines.">Cell Biology. Fixing problems with cell lines.</a> Science. 346, 1452-1453 (2014).</li><li>van der Worp, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+animal+models+of+disease+reliably+inform+human+studies.">Can animal models of disease reliably inform human studies.</a> , (2010).</li><li>McCabe, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+disease.">Animal models of disease.</a> Physiol. Behav. 68, 501-507 (2000).</li><li>Woolf, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+meaning+of+translational+research+and+why+it+matters.">The meaning of translational research and why it matters.</a> JAMA. 299, 211-213 (2008).</li><li>Brockbank, K. G., Taylor, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Preservation.">Tissue Preservation.</a> Advances in Biopreservation. , 157-159 (2006).</li><li>Bulmer, M., Gilbert, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ethics+of+social+research.">The ethics of social research.</a> Researching social life. , 45-57 (2001).</li><li>Penslar, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IRB guidebook. , (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> MD Anderson Cancer Center Institutional Tissue Bank Standard Operating Procedures. 3, (2009).</li><li>Ruffell, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+composition+of+human+breast+cancer.">Leukocyte composition of human breast cancer.</a> Proc. of the Ntnl. Aca. of Sci. 109, 2796-2801 (2012).</li><li>Shapiro, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical flow cytometry. , (2005).</li><li>Baker, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+phosphoprotein+as+a+biological+marker+of+tumor+signaling.">Stability of phosphoprotein as a biological marker of tumor signaling.</a> Clin. Cancer Res. 11, 4338-4340 (2005).</li><li>Jacobs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sample+processing+considerations+for+detecting+copy+number+changes+in+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues.">Sample processing considerations for detecting copy number changes in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2012, 1195-1202 (2012).</li><li>Chung, J. -. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+in+tissue+handling+and+processing+that+impact+RNA+obtained+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissue.">Factors in tissue handling and processing that impact RNA obtained from formalin-fixed, paraffin-embedded tissue.</a> J. Histochem. Cytochem. 56, 1033-1042 (2008).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+procedure+for+protein+extraction+from+formalin-fixed,+paraffin-embedded+tissues+for+reverse+phase+protein+arrays.">An efficient procedure for protein extraction from formalin-fixed, paraffin-embedded tissues for reverse phase protein arrays.</a> Proteome Sci. 10, 1477-5956 (2012).</li><li>Feldman, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+mRNA+amplification+for+microarray+analysis.">Advantages of mRNA amplification for microarray analysis.</a> Biotechniques. 33, 906-914 (2002).</li><li>Francino, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advantages+of+real-time+PCR+assay+for+diagnosis+and+monitoring+of+canine+leishmaniosis.">Advantages of real-time PCR assay for diagnosis and monitoring of canine leishmaniosis.</a> Vet Parasitol. 137, 214-221 (2006).</li><li>Grunberg-Manago, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Messenger+RNA+stability+and+its+role+in+control+of+gene+expression+in+bacteria+and+phages.">Messenger RNA stability and its role in control of gene expression in bacteria and phages.</a> Annu. Rev. Genet. 33, 193-227 (1999).</li><li>Lesnik, E. A., Freier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+thermodynamic+stability+of+DNA,+RNA,+and+DNA:RNA+hybrid+duplexes:+relationship+with+base+composition+and+structure.">Relative thermodynamic stability of DNA, RNA, and DNA:RNA hybrid duplexes: relationship with base composition and structure.</a> Biochemistry. 34, 10807-10815 (1995).</li><li>MacBeath, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+microarrays+and+proteomics.">Protein microarrays and proteomics.</a> Nat Genet. 32, 526-532 (2002).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest to disclose.

Em última análise, os métodos de processamento deve ser ditada pela hipótese desejado e antecipado ensaios técnicos para ser executada (Figura 1). A secção que se segue serve como uma visão geral para descrever os ensaios potenciais que podem ser executadas em tais secções de tecido. É de nenhuma maneira uma visão geral exaustiva, mas destina-se a ajudar a orientar os métodos de processamento de amostras e escolha de ensaios a jusante, descrevendo técnicas e listando seus pontos fortes e f...

A investigação médica tem beneficiado imensamente com o estudo de ambas as linhas de células humanas e modelos animais. As linhas celulares que permitam um melhor controlo dos componentes de um sistema, bem como a utilização de células a partir do próprio organismo. Trabalhando com células humanas, enquanto mais representativo, apresenta um instantâneo simplificado drasticamente de mecanismos que podem ser responsáveis ​​pela saúde e doença, porque as linhas celulares podem não recapitular o impacto de outras células do estroma, componentes e órgãos que podem afectar as respostas 1. Por outro lado, os modelos animais, embora não totalmente precisos em reproduzir a doença humana e heterogeneidade genética, oferecem mais pistas, permitindo a entrada de sistemas de animais completos, na maioria dos modelos de 2,3. Deficiências à parte, ambos os métodos têm suas vantagens e são complementares. No entanto, o principal objectivo continua a estudar células humanas e de órgãos, em uma de corpo inteiro, sistema de múltiplos órgãos. Assim, a investigação translacional tem taken grandes passos no sentido de facilitar o estudo de órgãos e tecidos humanos extraídos de pacientes, a fim de compreender melhor os mecanismos da doença subjacente. Investigação translacional oferece a vantagem de se estudar o resultado de tratamentos de doenças e em todo o corpo e em células apropriadas, assim fornecendo o melhor dos dois mundos entre células e animais de trabalho 4. Investigação translacional também não é sem falhas. Amostras colhidas de pacientes humanos, após a remoção do hospedeiro, são imediatamente submetidos a isquemia e outros fatores externos a partir do qual eles seriam de outra forma protegidas. Isso pode resultar em alterações moleculares e genéticas induzidas pelo estresse, e causar viés nos estudos subsequentes. Portanto, muito esforço foi colocado em extração e processamento de tecidos através de métodos rigorosos para melhor preservar a integridade de órgãos e células para estudos jusante 5. É importante ressaltar que futuras aplicações devem ser consideradas estreitamente ao selecionar métodos ouf processamento de amostras humanas, como certos métodos podem ser prejudiciais aos componentes celulares e vias de sinalização enquanto poupam outros. Para qualquer pesquisa envolvendo tecidos humanos, questões regulatórias devem ser abordadas. Após os relatórios de Tuskegee e Belmont, houve uma crescente aceitação do fato de que a investigação biomédica foi associada com riscos inerentes, muitas vezes resultando em dilemas éticos inevitáveis ​​6. A necessidade de normas nacionais e foi reconhecido o governo federal criou Conselhos de Revisão Institucional (IRBs) como um meio para defender os princípios do Relatório Belmont (respeito pelas pessoas, beneficência e justiça). IRB Qualquer instituição é uma comissão de médicos, pesquisadores e membros da comunidade que são responsáveis ​​por proteger os participantes da pesquisa. Ela exige que o consentimento voluntário ser obtido de todos os participantes de estudos de investigação biomédica, e que este consentimento ser documentados em um consentimento informado fo<html> rm. O processo de consentimento informado tem como objetivo fornecer informações adequadas a um participante, para que uma decisão informada pode ser feita sobre se deve ou não se inscrever em um estudo, ou para continuar a participação. A este respeito, o documento de consentimento informado devem ter boa legibilidade e deve ser escrito em uma linguagem que pode ser facilmente compreendida (6 a 8 de leitura nível) pela população-alvo. A possibilidade de coerção ou influência indevida deve ser minimizado, eo assunto deve ser dado tempo suficiente para considerar a participação. O participante também devem ser autorizados a exercer o seu direito de retirar seu consentimento em qualquer estágio durante o curso do estudo sem penalidade. Consentimento voluntário é um pré-requisito obrigatório para a participação de um sujeito na pesquisa e é também juridicamente eficaz 7. De acordo com os regulamentos para a protecção da saúde humana sujeita 21 CFR 50.25 (/45cfr46.html&quot;&gt;http://www.hhs.gov/ohrp/humansubjects/guidance/45cfr46.html 8), os participantes do estudo devem ser informados do propósito da pesquisa, os procedimentos envolvidos na pesquisa, alternativas à participação, todos os riscos previsíveis e desconfortos (incluindo não só danos físicos mas também possível dano psicológico, social ou econômica, desconforto ou inconveniente), benefícios da investigação para a sociedade e, possivelmente, para o indivíduo, tempo em que o sujeito é esperado para participar, pessoa a contactar para respostas a perguntas ou em caso de lesão ou de emergência relacionadas com a investigação, declaração indicando que a participação é voluntária e que a recusa em participar não acarretará quaisquer consequências ou qualquer perda de benefícios, como um compromisso no atendimento clínico normal que o participante tenha direito a receber como resultado de suas / seus diagnósticos e, finalmente, uma declaração sobre o direito do sujeito a confidencialidade e direito de retirar-o estudo em qualquer altura sem quaisquer consequências. Os espécimes de tecido a partir de participantes que retirar o consentimento durante o curso do estudo não deve ser depositado imediatamente e deve ser esgotado. Renúncia de um ou mais elementos do consentimento informado pode ser obtido a partir do IRB para alguns projetos de pesquisa que não poderia ser feito praticamente sem uma alteração dos elementos exigidos ou para estudos onde os elementos necessários não são aplicáveis. Deve ser tomado muito cuidado para assegurar a confidencialidade dos dados. O Seguro de Saúde Portabilidade e Accountability Act (HIPAA) é uma lei federal que impede o uso ou divulgação de &quot;informações médicas protegidas&quot; (PHI) sem o consentimento por escrito dos participantes. PHI inclui, mas não está limitado a informação transmitida a saúde ou mantida em qualquer forma ou meio e inclui campos que podem ser utilizados para identificar um indivíduo 9. Através deste trabalho, pretendemos delinear o protocolo que deve ser seguido durante tissue processamento - incluindo aquisições e armazenamento e enfatizar a importância de seguir essas diretrizes rígidas, de modo a minimizar os vieses que podem resultar devido às tensões de um tecido é submetido a extração em cima. Também nos esforçamos para fornecer um breve resumo dos ensaios a jusante ou análise (Figura 1) que podem ser executadas em tais espécimes para que os leitores podem fazer um julgamento qualificado sobre o ensaio (s) melhor se adapte às suas necessidades.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel disposable scalpels</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Cassettes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>58931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA-stabilizing solution</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml Eppendorf tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>MAX-815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50ml tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral Buffered Formalin</td>
			<td>StatLab Medical Products</td>
			<td>28600-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin Containers</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-032-059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting temperature solution (OCT)</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Cryomold</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10104159001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11088793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70&#956;m cell strainers</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well round bottom plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/Dead stain solution</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L34957</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

working with human tissues for translational cancer research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human specimens, precious samples must be handled with the greatest care in order to ensure integrity of organs, tissues, and cells to the highest degree. Unfortunately, tissue processing by definition requires extraction of tissues from the host, a change which can cause great cellular stress and have major repercussions on subsequent analyses. These stresses could result in the specimen being no longer representative of the site from which it was retrieved. Therefore, a strict protocol must be adhered to while processing these specimens to ensure representativeness. The desired assay(s) must also be taken into consideration in order to ensure that an optimal technique is used for sample processing. Outlined here is a protocol for tissue retrieval, processing and various analyses which may be performed on processed tissue in order to maximize downstream production from limited tissue samples.

<html> Os resultados apresentados abaixo mostram o fluxo de estratégia de citometria de gating para ampla fenotipagem imune em um tumor melanoma processado. O dia da coloração, amostra de tecido foi digerido com colagenase e homogeneizada I e ADNase I de incubação durante 60 min, a 37 ° C sob rotação 225 rpm. Após a digestão, a suspensão de células foi filtrada através de um filtro de células de 70 um para eliminar os detritos e as células foram coradas com fluxo marcado com fluorescência citometria de an...

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Working with Human Tissues for Translational Cancer Research

Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

Trabalhando com tecidos humanos para Translational Cancer Research

Medical research for human benefit is greatly impeded by the necessity for human tissues and subjects. However, upon obtaining consent for human ...

working-with-human-tissues-for-translational-cancer-research

Research

JoVE Journal

Medicine

9.8K visualizações.  University of Texas MD Anderson Cancer Center. Translational cancer research is dependent on extraction of human tissues. Much work has gone into optimizing extraction methods for ex vivo analysis. Here, we describe tissue processing methods allowing for maximal data output from limited samples.

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Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

Geração de banco de dados de Oncologia Torácica Comprehensive - Ferramenta para Pesquisa Translacional

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Medicina

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness of a variety of oncolytic platforms including HSV, Reovirus, and Vaccinia OVs as treatment for cancer are currently underway2-5. One key characteristic of oncolytic viruses is that they can be genetically modified to express reporter transgenes which makes it possible to visualize the infection of tissues by microscopy or bio-luminescence imaging6,7. This offers a unique advantage since it is possible to infect tissues from patients ex vivo prior to therapy in order to ascertain the likelihood of successful oncolytic virotherapy8. To this end, it is critical to appropriately sample tissue to compensate for tissue heterogeneity and assess tissue viability, particularly prior to infection9. It is also important to follow viral replication using reporter transgenes if expressed by the oncolytic platform as well as by direct titration of tissues following homogenization in order to discriminate between abortive and productive infection. The object of this protocol is to address these issues and herein describes 1. The sampling and preparation of tumor tissue for cell culture 2. The assessment of tissue viability using the metabolic dye alamar blue 3. Ex vivo infection of cultured tissues with vaccinia virus expressing either GFP or firefly luciferase 4. Detection of transgene expression by fluorescence microscopy or using an In Vivo Imaging System (IVIS) 5. Quantification of virus by plaque assay. This comprehensive method presents several advantages including ease of tissue processing, compensation for tissue heterogeneity, control of tissue viability, and discrimination between abortive infection and bone fide viral replication.

Ex Vivo Infection of Live Tissue with Oncolytic Viruses

Oncolytic viruses are promising for cancer therapeutics. The ability to ascertain the infectability of live tissue specimens obtained from patients prior to treatment is a unique advantage of this therapeutic approach. This protocol describes how to process tissues for ex vivo infection with oncolytic virus and subsequent viral quantification.

Ex Infecção Vivo de tecido vivo com Vírus Oncolíticos

Oncolytic Viruses (OVs) are novel therapeutics that selectively replicate in and kill tumor cells1. Several clinical trials evaluating the effectiveness ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of extracellular matrix (ECM) and a variety of mesenchymal cells, including fibroblasts, myofibroblasts, endothelial cells, pericytes and leukocytes 1-3.
The tumour-associated stroma is responsive to substantial paracrine signals released by neighbouring carcinoma cells. During the disease process, the stroma often becomes populated by carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) including large numbers of myofibroblasts. These cells have previously been extracted from many different types of human carcinomas for their in vitro culture. A subpopulation of CAFs is distinguishable through their up-regulation of &alpha;-smooth muscle actin (&alpha;-SMA) expression4,5. These cells are a hallmark of 'activated fibroblasts' that share similar properties with myofibroblasts commonly observed in injured and fibrotic tissues 6. The presence of this myofibroblastic CAF subset is highly related to high-grade malignancies and associated with poor prognoses in patients.
Many laboratories, including our own, have shown that CAFs, when injected with carcinoma cells into immunodeficient mice, are capable of substantially promoting tumourigenesis 7-10. CAFs prepared from carcinoma patients, however, frequently undergo senescence during propagation in culture limiting the extensiveness of their use throughout ongoing experimentation. To overcome this difficulty, we developed a novel technique to experimentally generate immortalised human mammary CAF cell lines (exp-CAFs) from human mammary fibroblasts, using a coimplantation breast tumour xenograft model.
In order to generate exp-CAFs, parental human mammary fibroblasts, obtained from the reduction mammoplasty tissue, were first immortalised with hTERT, the catalytic subunit of the telomerase holoenzyme, and engineered to express GFP and a puromycin resistance gene. These cells were coimplanted with MCF-7 human breast carcinoma cells expressing an activated ras oncogene (MCF-7-ras cells) into a mouse xenograft. After a period of incubation in vivo, the initially injected human mammary fibroblasts were extracted from the tumour xenografts on the basis of their puromycin resistance 11.
We observed that the resident human mammary fibroblasts have differentiated, adopting a myofibroblastic phenotype and acquired tumour-promoting properties during the course of tumour progression. Importantly, these cells, defined as exp-CAFs, closely mimic the tumour-promoting myofibroblastic phenotype of CAFs isolated from breast carcinomas dissected from patients. Our tumour xenograft-derived exp-CAFs therefore provide an effective model to study the biology of CAFs in human breast carcinomas. The described protocol may also be extended for generating and characterising various CAF populations derived from other types of human carcinomas.

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Carcinoma-associated fibroblasts (CAFs) rich in myofibroblasts present within the tumour stroma, play a major role in driving tumour progression. We developed a coimplantation tumour xengraft model for experimentally generating CAFs from human mammary fibroblasts. The protocol describes how to establish CAF myofibroblasts that acquire an ability to promote tumourigenesis.

Geração Experimental de Carcinoma Associado fibroblastos (FAC) de Fibroblastos Humanos mamária

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

Processamento da mamoplastia redutora e tecidos humanos Mastectomia para cultura de células

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

Um modelo de transplante heterotópico Modificado Swine Hind Limb para Translational vascularizado Composite Alotransplante (VCA) Pesquisa

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human cancer cells in mitosis. The phenanthridine PJ-34 was the most potent molecule. Declustering of extra-centrosomes causes mitotic failure and cell death in multi-centrosomal cells. Most solid human cancers have high occurrence of extra-centrosomes. The activity of PJ-34 was documented in real-time by confocal imaging of live human breast cancer MDA-MB-231 cells transfected with vectors encoding for fluorescent &gamma;-tubulin, which is highly abundant in the centrosomes and for fluorescent histone H2b present in the chromosomes. Aberrant chromosomes arrangements and de-clustered &gamma;-tubulin foci representing declustered centrosomes were detected in the transfected MDA-MB-231 cells after treatment with PJ-34. Un-clustered extra-centrosomes in the two spindle poles preceded their cell death. These results linked for the first time the recently detected exclusive cytotoxic activity of PJ-34 in human cancer cells with extra-centrosomes de-clustering in mitosis, and mitotic failure leading to cell death. According to previous findings observed by confocal imaging of fixed cells, PJ-34 exclusively eradicated cancer cells with multi-centrosomes without impairing normal cells undergoing mitosis with two centrosomes and bi-focal spindles. This cytotoxic activity of PJ-34 was not shared by other potent PARP1 inhibitors, and was observed in PARP1 deficient MEF harboring extracentrosomes, suggesting its independency of PARP1 inhibition. Live confocal imaging offered a useful tool for identifying new molecules eradicating cells during mitosis.

The cytotoxic activity of the phenanthridine PJ-34 in cancer cells undergoing mitosis was documented in real time by live confocal imaging. PJ-34 eradicated human breast cancer MDA-MB-231 cells harboring extra-centrosomes in mitosis. Unlike normal bi-focal mitosis, the extra-centrosomes were not clustered in the two spindle poles in the presence of PJ-34.

A morte celular associada com mitose anormal observado por imagem confocal em células vivas Câncer

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Um<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo para estudar a ação do hormônio no peito humano

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Mammosphere Formation Assay from Human Breast Cancer Tissues and Cell Lines

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that self-renew while giving rise to more differentiated progeny. Understanding and targeting these cancer stem cells in breast cancer, which may possess enhanced chemo- and radio-resistance compared to the non-stem tumor bulk, has become an important research area. Markers including CD44, CD24, and ALDH activity can be assessed using fluorescence activated cell sorting (FACS) to prospectively isolate cells that display enhanced tumorigenicity when implanted into immunocompromised mice: the mammosphere assay has also become widely used for its ability to retrospectively identify sphere-forming cells that develop from single stem cell-like clones. Here we outline approaches for the appropriate culturing of mammospheres from cell lines or primary patient samples, their passaging, and calculations to estimate sphere forming efficiency (SFE). First we discuss key considerations and pitfalls in the appropriate planning and interpretation of mammosphere experiments.

Floating mammosphere assays can investigate the subset of stem-like breast cancer cells that survive in suspension conditions and show enhanced tumorigenesis when implanted into mice. This protocol provides a convenient in vitro measure of sphere-forming ability, a proxy for in vivo tumorigenesis, while facilitating analysis of the stem-associated transcriptional landscape.

Formação Mammosphere Ensaio de cancro da mama humano tecidos e linhas celulares

Similar to healthy tissues, many blood and solid malignancies are now thought to be organised hierarchically, with a subset of stem-like cancer cells that ...