Anteriormente, o principal método para examinar o efeito de produtos químicos na contratilidade arterial era por miografia ex vivo de fios em banhos de órgãos. A importância desta técnica é que os efeitos de produtos químicos e manipulação gênica no segmento de um vaso in vivo podem ser examinados. A principal vantagem dessa técnica é que a exposição crônica e a avaliação em longo prazo do efeito das drogas sobre a contratilidade arterial e o fluxo sanguíneo podem ser realizadas.
Isso não é possível em vasos isolados em banhos de órgãos. Para começar a exteriorizar o feto, garanta uma profundidade adequada de anestesia na ovelha. Realizar uma incisão laparotomia padrão de 10 centímetros usando uma lâmina de bisturi número 20 sobre a alba linear desde a cicatriz umbilical até a porção cranial do úbere.
Em seguida, faça uma pequena incisão através da linha média da parede do corpo abaixo da incisão da pele e abra a cavidade abdominal usando uma tesoura de Metzenbaum. Exteriorize o útero contendo o feto através da parede abdominal, enquanto coloca toalhas cirúrgicas estéreis por baixo entre o abdome materno e o útero. Em seguida, palpar o útero para determinar a posição fetal e os eletrodos caudais.
Com o uso de cautério, faça uma incisão de 10 centímetros através da parede uterina com uma grande curvatura sobre o dorso da cabeça, evitando vasos sanguíneos visíveis e placentomas. Em seguida, com quatro pinças de Babcock, prenda o útero e as membranas placentárias e puxe as pinças de Babcock nos quatro cantos opostos para tornar a cabeça fetal visível. Exteriorize a metade cranial do feto através desta incisão e cubra a cabeça com uma luva estéril sem látex preenchida com soro fisiológico estéril quente a uma temperatura de 37 graus Celsius para evitar o início da respiração.
Para realizar a instrumentação do cateter perivascular da artéria carótida, com o colo do feto exposto, realizar uma incisão oblíqua de três a 3,5 centímetros na pele ao longo da borda anterior do músculo esternocleidomastoideo ou ECM em um dos lados do pescoço na região média. Em seguida, separe a fáscia com pinças de mosquito. Dividir o platisma e dissecar ao longo da borda medial do músculo ECM a partir de seu tendão superiormente e ao nível do músculo omo-hioideo inferiormente.
Retraia a pele com braçadeiras de Babcock. Realizar uma dissecção romba para liberar a artéria carótida do tecido circundante e do lençol carotídeo. Em seguida, pegue uma sonda de fluxo de três milímetros da embalagem estéril, desaparafuse a placa de apoio e deslize-a para abrir para expor o suporte em L.
Usando pinças, feche o suporte da sonda de fluxo deslizando suavemente a placa de apoio para uma posição fechada. Em seguida, fixe o suporte da sonda de fluxo apertando o parafuso de apoio da sonda de fluxo. Colocar um cateter perivascular pré-lavado próximo à artéria carótida proximal à sonda de fluxo com fio de seda inabsorvível 3.0.
Fixar os comprimentos proximal e distal do sistema perivascular e a sonda de fluxo ao tecido intersticial próximo. Com ponto contínuo, fechar o local da incisão e a pele fetal com sutura inabsorvível 3.0. Fixe os cateteres na pele envolvendo a sutura ao redor do cateter três vezes.
Depois de remover a luva, coloque a cabeça fetal de volta no útero. Para realizar o cateterismo do membro fetal, exteriorize a pata traseira do feto, segure a perna e vire-a para os lados para visualizar a área interna da coxa. Após limpeza da área com gaze estéril, realizar incisão de dois centímetros e expor a artéria femoral.
Colocar e fixar a sonda de fluxo como previamente demonstrado para carótida e fechar a incisão. Em seguida, fazer uma incisão de dois centímetros ao longo da face medial da tíbia, aproximadamente 0,5 centímetros distal ao joelho. Expor a artéria tibial posterior de paredes espessas e a veia safena de paredes finas.
Para a inserção de cateteres de polivinil, utilizando uma técnica padrão de corte de corte, libere o vaso de interesse com dissecção romba. Em seguida, ligadura da porção distal do vaso com fio de seda 3.0 e sem agulha, com nó quadrado com três arremessos. Coloque uma segunda gravata sem seda na face proximal do vaso, mas deixe a ligadura desamarrada.
Com a tesoura Castroviejo, faça um pequeno corte transversal no vaso dois milímetros proximal à ligadura distal. Restrinja o fluxo sanguíneo do vaso puxando suavemente a sutura proximal desamarrada. Em seguida, preencha o cateter com soro fisiológico heparinizado estéril.
Insira a extremidade chanfrada do cateter e avance a ponta 20 centímetros no vaso fetal. Segure o cateter no lugar com pinça enquanto um assistente amarra a sutura de gravata sem seda proximal para fixar o vaso ao cateter. Ligate o vaso completamente ao redor do cateter inserido usando nós quadrados a dois milímetros do local de inserção com três arremessos.
Em seguida, amarre a ligadura distal proximal ao proximal, prendendo o vaso ao cateter. Fechar a incisão da pele com fio inabsorvível 3.0, com padrão contínuo. Certifique-se de que as suturas estejam amarradas ao redor dos cateteres para evitar restringir o fluxo sanguíneo se puxadas.
Coloque um cateter pré-lavado no útero e fixe-o ao feto por uma sutura com uma sutura inabsorvível 3.0. Coloque o feto de volta no útero. Sutura das membranas fetais com sutura inabsorvível 3.0 com padrão de bloqueio contínuo e, em seguida, fechamento da camada muscular uterina com fio inabsorvível 3.0.
Inserir uma haste cirúrgica de aço inoxidável de 18 polegadas no subcutâneo ao longo da parede abdominal até a região paracostal. Fixar os cateteres na extremidade distal da haste cirúrgica, fazendo com que um assistente alimente os cateteres e o cabo da sonda de fluxo através do local de saída paracostal, empurrando a haste totalmente através da abertura paracostal. Em seguida, fixe todos os cateteres e cabos de sonda de fluxo no local da incisão paracostal.
Após a colocação da fita impermeável, suture os cateteres à pele da ovelha. Sutura uma bolsa de malha plástica para o exterior da ovelha sobre os cateteres e sonda para armazenar os cateteres. Usando um material de sutura absorvível sintético monofilamentar 1.0, prenda a linha alba com um padrão contínuo e fixe a camada da pele com grampos cirúrgicos.
Para medir o fluxo sanguíneo, conecte as sondas de fluxo inseridas no feto com o módulo de fluxo perivascular ao PowerLab e a um computador conectado. Conecte os cateteres arterial e amniótico ao amplificador de ponte conectado a um conversor analógico para digital. Administrar um bolus de um mililitro de fenilefrina micromolar ao feto por via intravenosa e medir o fluxo carotídeo e femoral por 15 minutos.
Em seguida, aguarde 30 minutos, ou até que o fluxo sanguíneo retorne aos valores basais. Em seguida, infundir um mililitro de fenilefrina 10 micromolares no cateter perivascular e medir o fluxo sanguíneo por 15 minutos. Lave a fenilefrina administrando cinco mililitros de soro fisiológico morno através do cateter perivascular.
Em seguida, aguarde 30 minutos, ou até que o fluxo sanguíneo retorne aos valores basais. Este estudo examinou os efeitos localizados da manipulação do fluxo sanguíneo em fetos e ovinos pré-termo e prematuros. Ao administrar um mililitro de 10 fenilefrina micromolares, um agonista alfa-1 AR, no espaço perivascular da artéria carótida, uma redução significativa no fluxo sanguíneo carotídeo foi observada tanto em ovinos fetais de curto prazo quanto em fetos prematuros, sem qualquer efeito sobre a pressão arterial sistêmica.
Por outro lado, a administração de fenilefrina por via intravenosa causou um aumento significativo no fluxo sanguíneo sistêmico tanto em ovinos fetais de curto prazo quanto no feto prematuro, sem afetar o fluxo sanguíneo carotídeo. Os resultados revelaram que fetos prematuros não respondem à regulação do fluxo sanguíneo carotídeo mediada pela fenilefrina, no entanto, a resposta é madura em fetos de curto prazo. Notavelmente, a administração intravenosa de fenilefrina aumentou o fluxo sanguíneo carotídeo apenas em fetos prematuros, sem efeito significativo em fetos de curto prazo.
No entanto, a administração intravenosa de fenilefrina elevou a pressão arterial sistêmica em fetos prematuros e de curto prazo. Os resultados também demonstram que a instalação perivascular da fenilefrina não afetou a pressão arterial sistêmica. Deve-se tomar o máximo cuidado ao realizar uma dissecção romba para identificar os vasos e cortá-los para inserir a extremidade chanfrada do cateter.
O nick deve ser pequeno e evitar cortar todo o vaso. Este método pode medir a contratilidade do vaso e o fluxo sanguíneo de qualquer vaso. Também pode ser usado para entregar produtos químicos e vetores perto da vizinhança do órgão ou tecido a ser alvo.
Esta técnica pode ser utilizada para determinar as alterações na auto-regulação do fluxo sanguíneo cerebral no útero em um feto em desenvolvimento, e ter como alvo qualquer gene para upregulation ou silenciar a transcrição.
