Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (No.82074523,82104996).

Todos os experimentos com animais foram revisados e aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Medicina Chinesa de Pequim (nº. BUCM-4-2022010101-1097). Neste protocolo, 24 coelhos machos da raça Nova Zelândia, com 6 semanas de idade, foram alojados sob uma condição específica, a saber, 20-25 °C, 50-60% de umidade e um ciclo circadiano claro / 12 h escuro de 12 horas, com livre acesso a uma dieta regular de ração. Os coelhos foram anestesiados e sacrificados pela combinação de anestesia profunda e embolização aérea. A dor é uma das características patológicas típicas da OA e também é um dos principais indicadores usados para avaliar modelos animais de OA e métodos de intervenção, de modo que analgésicos não são usados durante a preparação do modelo.
1. O modelo de coelho KOA
<ol><li>Anestesiar coelhos com pentobarbital sódico a 3% (30 mg/kg) por via intravenosa na margem da orelha. Para confirmar o nível adequado de anestesia, procure um reflexo corneano significativamente enfraquecido ou ausente e a ausência de dor ao pinçar a pele com pinça hemostática. Durante a anestesia, adicione 2-3 gotas de lubrificante aos olhos dos coelhos a cada 15 minutos para evitar que os olhos dos coelhos sequem.</li>
	<li>Após a anestesia, fixar cada coelho na posição supina, puxando o membro posterior esquerdo para uma posição totalmente estendida.</li>
	<li>Fixar o membro posterior esquerdo de cada coelho na posição estendida.<ol><li>Como primeira camada, use fita adesiva para cobrir a pele do coelho desde a virilha até a articulação do tornozelo.</li>
		<li>Como segunda camada, enrole uma fita de espuma dupla face de 36 mm de largura sobre a fita médica e, em seguida, enrole uma bandagem de polímero da virilha até a articulação do tornozelo. Certifique-se de que a articulação do joelho esteja 180° reta e a articulação do tornozelo esteja dorsiflexionada em 60°.</li>
		<li>Como terceira camada, imobilize as articulações com pequenas talas na frente e atrás das articulações do joelho e tornozelo, e envolva a malha de aço ao redor da camada mais externa para proteger contra mordidas. Expor os dedos dos coelhos para observar se a circulação sanguínea está normal.</li>
	</ol></li>
	<li>Imobilizar os animais por 6 semanas para estabelecer o modelo de KOA (Figura 1). OBS: 1) Durante a preparação do modelo, inspecione os moldes a cada dois dias. Se algum molde estiver solto ou desprendido, anestesiar os coelhos e reimobilizar os membros posteriores esquerdos em posição estendida. 2) Coloque tapetes de proteção no fundo das gaiolas para evitar que os membros dos coelhos fiquem presos e causem ferimentos.</li>
</ol>2. Intervenção acupotomia
OBS: Antes do início da intervenção acupotomia, anestesiar os coelhos com pentobarbital sódico a 3% (30 mg/kg) por injeção intravenosa na margem da orelha.
<ol><li>Determine os pontos de tratamento.<ol><li>Raspe a pele da articulação do joelho do membro posterior esquerdo do coelho.</li>
		<li>Palpar a inserção do tendão do músculo femoral medial da articulação do joelho do coelho, inserção do tendão do reto femoral, inserção do tendão do bíceps femoral e bursa do pé de ganso. Marque indurações patológicas dos músculos locais com um marcador cutâneo estéril. Desinfetar a articulação do joelho três vezes com rodadas alternadas de iodóforo médico e álcool medicinal a 75%.</li>
	</ol></li>
	<li>Operação de acupotomia<ol><li>Manter a lâmina de acuxotomia paralela à direção do trajeto paralela ao tendão e ao eixo longitudinal do membro.</li>
		<li>Use o polegar da mão esquerda para pressionar a pele que entra no ponto marcador e mover-se lateralmente para que os vasos sanguíneos e nervos sejam separados no lado ventral do polegar.</li>
		<li>Com a alça de acupotomia na mão direita, pressione para baixo rapidamente com uma pequena força para que a lâmina de acupotomia passe instantaneamente pela pele. Avançar lentamente a lâmina de acuxotomia até as indurações musculares locais e fazer cortes longitudinais e balanços lateralmente.</li>
		<li>Após a operação de acupotomia estar completa, desinfete a articulação do joelho novamente e aplique um band-aid.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar esta operação uma vez por semana durante 4 semanas (Figura 2). OBS: 1) Se não houver enduração ou tecido semelhante a um cordão tocado na inserção tendínea do vasto medial, vasto lateral, reto femoral, bíceps femoral ou bursa anserina, a agulha de acupotomia deve ser usada para liberar diretamente suas inserções tendíneas. 2) Durante a intervenção da acupotomia, não imobilizar os membros posteriores esquerdos dos coelhos do grupo acuxotomia e do grupo modelo em posição de extensão.</li>
</ol>3. Módulo de elasticidade do quadríceps femoral
NOTA: 1) Este experimento utilizou o instrumento diagnóstico ultrassonográfico de onda de cisalhamento em tempo real (SWE) para medir o módulo de elasticidade do quadríceps femoral in vivo em cada grupo de coelhos. 2) O testador deve ser um ultrassonografista experiente em detecção por ultrassonografia. Durante a medição, a sonda de ultrassom deve ser suavemente colocada na superfície cutânea do quadríceps para evitar tensão muscular local. As medidas precisam ser feitas quando o animal está em um estado tranquilo, sem luta ou atividade. Se o animal estiver ativo, aguarde até que esteja calmo antes de realizar o teste.
<ol><li>Raspar o pelo para expor a pele na região do quadríceps do membro posterior esquerdo.</li>
	<li>Utilizar ultrassonografia bidimensional convencional para localizar o músculo-abdome do quadríceps e determinar a região de interesse (ROI), ajustada para uma profundidade de 1-2 cm.</li>
	<li>Inicie o modo SWE para inspeção.<ol><li>Defina a área de interesse uniformemente para uma área circular com um diâmetro de 2 mm e a área de interesse para ~0,5-1 cm de profundidade da superfície da pele.</li>
		<li>Use o instrumento de diagnóstico ultra-sônico para gerar um impulso de força de radiação acústica para estimular o tecido muscular e obter elastografia tecidual.</li>
		<li>Aguarde 2-3 s para que a imagem se estabilize e, em seguida, congele a imagem. Ativar a função Q-BOX do instrumento para medir o módulo de Young do músculo quadríceps.</li>
		<li>Aguarde até que o sistema calcule automaticamente os valores máximo, mínimo e médio (unidade: KPa) do módulo de ROI de Young. Selecione três ROIs na mesma profundidade para três medições e tome o valor médio para análise estatística. NOTA: O testador deve ser um ultrassonografista experiente em detecção de ultrassom. Durante a medição, a sonda de ultrassom deve ser suavemente colocada na superfície cutânea do quadríceps para evitar tensão muscular local. As medidas precisam ser feitas quando o animal está em um estado tranquilo, sem luta ou atividade. Se o animal estiver ativo, aguarde até que esteja calmo antes de realizar o teste.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Mensuração da força de contração do quadríceps femoral
OBS: Após a mensuração da força de contração do quadríceps femoral, os coelhos foram eutanasiados por embolia gasosa sob anestesia.
<ol><li>Anestesiar os coelhos com pentobarbital sódico a 3% (30 mg/kg) por via intravenosa na margem da orelha. Para confirmar que o nível adequado de anestesia foi atingido, procure um reflexo corneano significativamente enfraquecido ou ausente e a ausência de dor ao pinçar a pele com pinça hemostática. Durante a anestesia, adicione 2-3 gotas de lubrificante aos olhos dos coelhos a cada 15 minutos para evitar que os olhos dos coelhos sequem.</li>
	<li>Expor os músculos quadríceps e fixar o transdutor de tensão.<ol><li>Corte a pele abaixo da patela, ao longo do eixo longitudinal do membro para cima até a base da coxa, e continue a cortar a pele para cima em 3-4 cm. Descasque cuidadosamente a pele e a fáscia e exponha o músculo. Cortar o ligamento patelar e separar cuidadosamente o quadríceps da junção ilíaca, mantendo o quadríceps em conexão com o ilíaco.</li>
		<li>Ligate as suturas cirúrgicas na junção tendínea entre a patela e o músculo quadríceps. Estique o músculo até o seu comprimento total em seu estado natural e, em seguida, fixe-o ao transdutor de tensão. Mantenha a linha de ligadura no músculo em linha reta com a linha de ligadura no transdutor de força.</li>
		<li>Fixe o transdutor de tensão no suporte. Conecte a linha de aquisição de sinal no transdutor de tensão ao processador do sistema de aquisição de biossinais.</li>
	</ol></li>
	<li>Medir o desempenho contrátil do músculo quadríceps.<ol><li>Inserir os eletrodos paralelamente ao abdome do quadríceps e evitar qualquer contato entre os eletrodos.</li>
		<li>Pressione o botão do osciloscópio. Ajuste a posição do transdutor de força no suporte para manter a linha de base em zero. Selecionar os parâmetros de estimulação do estimulador com largura de onda de 5 ms e atraso de 10 ms.</li>
		<li>Use um único estímulo primeiro e ajuste gradualmente a intensidade do estímulo de zero com um incremento de 0,1 V a cada vez. Observar as mudanças na curva de contração muscular e amplitude de contração até determinar a amplitude de contração única (Pt) máxima do quadríceps. Registre-o para estatísticas subsequentes.</li>
		<li>Use um estímulo cluster e use a amplitude do estímulo que induz a amplitude máxima de contração única como linha de base para estimular continuamente o músculo e aumentar gradualmente a frequência do estímulo. Observe as mudanças na curva de contração muscular até determinar a amplitude máxima de contração (Pt) do quadríceps. Registre-o para estatísticas subsequentes. NOTA: 1) Após cada contração muscular, o músculo deve receber 30 s para relaxar com a solução tampão muscular sendo gotejada continuamente sobre o músculo. 2) Durante a operação, julgar o estado anestésico monitorando o reflexo palpebral, o ritmo respiratório, o relaxamento muscular e a resposta de pinçamento da pele dos coelhos.</li>
	</ol></li>
</ol>5. O desempenho mecânico do tendão do quadríceps
<ol><li>Pré-processamento: No dia do teste, meça o comprimento, a largura e a espessura do tendão do quadríceps com um paquímetro vernier e instale uma pinça antiderrapante especial na máquina de teste de fadiga. Repita a carga e descarga 15x para pré-processamento.</li>
	<li>Teste de relaxamento de tensão: Use o sensor que varia de 0 N a 100 N, estique-o a uma velocidade de 5 mm/min até atingir o comprimento necessário e, em seguida, comece a coletar dados. Defina o tempo de aquisição de dados do computador a partir de t (0), coletando dados a cada 0,1 s, com duração de 1.800 s. Após atingir o tempo definido, registre dados e curvas.</li>
	<li>Ensaio de tração: Utilizar o sensor que varia de 0 N a 100 N e esticá-lo a uma velocidade de 5 mm/min até a carga máxima até que o corpo de prova seja afastado. Após o ensaio, calcular o deslocamento máximo, a carga última e a rigidez do corpo de prova.</li>
</ol>6. Pressão na superfície de contato articular e pressão por unidade de área da cartilagem
<ol><li>Fixar os corpos de prova de fêmur e tíbia de ambos os lados em posição reta sobre o acessório e realizar um teste de pré-carga. Meça a faixa aproximada da articulação do joelho, corte o papel sensível à pressão no mesmo formato e sela-o com filme plástico.</li>
	<li>Coloque o papel sensível à pressão selado entre as articulações da tíbia e do fêmur e realize um teste de pressão na articulação do joelho com uma pressão de 5 mm/min e uma pressão máxima de 50 N. Mantenha a pressão por 2 min até atingir 50 N quando o papel sensível à pressão estiver de cor estável.</li>
	<li>Após 2 min, remova o papel sensível à pressão, fixe a superfície colorida em uma folha de papel tamanho A4 e adquira imagens com a escala reservada.</li>
	<li>Carregue a imagem no computador. Use o software referenciado para medição de área e medição multissegmento para figuras irregulares. Meça a pressão interna e externa das articulações do fêmur e da tíbia e registre os resultados.</li>
</ol>7. Coloração Safranin O/Fast Green da cartilagem articular do joelho
<ol><li>Após o término da intervenção acupotomia, retirar os tecidos do complexo ósseo cartilaginoso-subcondral e incorporá-los em parafina. Corte os blocos de cera de tecido preparados e prepare lâminas. Desparafinizar as lâminas de tecido preparadas com solução de desparafinação ambiental (I) e solução de desparafinação ambiental (II) por 15 min cada; em seguida, mergulhá-los sucessivamente em xileno e etanol anidro (1:1), etanol anidro (I), etanol 95%, etanol 85% e etanol 75%, 2-5 min cada passo; e, por fim, mergulhe-os em água destilada por 15 min.</li>
	<li>Realizar coloração.<ol><li>Manchar as lâminas com solução Fast Green por 1 min. Durante esse processo, retire as lâminas da solução e observe-as ao microscópio até que o tecido fique corado de verde escuro.</li>
		<li>Separação de cor: Enxágue o excesso de solução Fast Green com água ultrapura. Mergulhe as lâminas rapidamente em solução de ácido acético a 1% por 5 a 10 segundos.  Novamente, enxágue a lâmina com água ultrapura.</li>
		<li>Manchar as lâminas em solução de Safranine O por 10-15 min até que a cartilagem esteja corada de vermelho.</li>
	</ol></li>
	<li>Desidrate e clareie o tecido, sele as lâminas de vidro e observe-as ao microscópio.<ol><li>Mergulhe as lâminas em etanol 75%, etanol 85%, etanol 95% e etanol 100% por 3 a 5 segundos sucessivamente.</li>
		<li>Mergulhe as lâminas em solução de desparafinação ambiental (I) e solução de desparafinação ambiental (II) por 10 min sucessivamente. Retire as lâminas e solte o meio resinoso neutro na parte frontal das lâminas, evitando o tecido. Coloque a borda do vidro de cobertura sobre a lâmina e, em seguida, coloque-a lentamente para cobrir o bálsamo neutro. Retire o ar e evite bolhas de ar. Limpe o xileno extra e o bálsamo neutro e deixe-o repousar durante a noite à temperatura ambiente.</li>
		<li>Observe as lâminas ao microscópio e adquira imagens. Para cada grupo, selecione seis amostras de cartilagem do joelho de coelho e selecione aleatoriamente quatro campos de visualização diferentes para cada amostra para avaliação. Pontuar a histologia da cartilagem de cada grupo de acordo com o método de Mankin (Tabela 1).</li>
	</ol></li>
</ol>8. Análise estatística
<ol><li>Dados expressos como média ± desvio padrão (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65584/65584eq01.jpg" style="margin: auto;"> ± s).</li>
	<li>Realizar análise de variância (ANOVA) one-way e teste LSD para determinar a significância estatística das comparações entre múltiplos grupos.</li>
	<li>Considerar diferenças estatisticamente significantes quando P < 0,05.</li>
</ol>

Estabelecimento do modelo KOA em coelhos usando o método Videman modificado

<ol>
	<li>Roseti, L., Desando, G., Cavallo, C., Petretta, M., Grigolo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Articular+cartilage+regeneration+in+osteoarthritis.">Articular cartilage regeneration in osteoarthritis.</a> Cells. 8 (11), 1305 (2019).</li><li>Cui, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29-30, 100587 (2020).</li><li>Miyauchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alleviation+of+murine+osteoarthritis+by+deletion+of+the+focal+adhesion+mechanosensitive+adapter,+Hic-5.">Alleviation of murine osteoarthritis by deletion of the focal adhesion mechanosensitive adapter, Hic-5.</a> Sci Rep. 9 (1), 15770 (2019).</li><li>Wright, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+factors+in+osteoarthritis:+the+effects+of+joint+instability.">Biomechanical factors in osteoarthritis: the effects of joint instability.</a> HSS J. 8 (1), 15-17 (2012).</li><li>Patsika, G., Kellis, E., Kofotolis, N., Salonikidis, K., Amiridis, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergetic+and+antagonist+muscle+strength+and+activity+in+women+with+knee+osteoarthritis.">Synergetic and antagonist muscle strength and activity in women with knee osteoarthritis.</a> J Geriatr Phys Ther. 37 (1), 17-23 (2014).</li><li>Blalock, D., Miller, A., Tilley, M., Wang, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+instability+and+osteoarthritis.">Joint instability and osteoarthritis.</a> Clin Med Insights. Arthritis and Musculoskelet Disord. 8, 15-23 (2015).</li><li>Henriksen, M., Christensen, R., Danneskiold-Sams&#248;e, B., Bliddal, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lower+extremity+muscle+mass+and+muscle+strength+after+weight+loss+in+obese+patients+with+knee+osteoarthritis:+a+prospective+cohort+study.">Changes in lower extremity muscle mass and muscle strength after weight loss in obese patients with knee osteoarthritis: a prospective cohort study.</a> Arthritis Rheum. 64 (2), 438-442 (2012).</li><li>Schwartz, A. G., Lipner, J. H., Pasteris, J. D., Genin, G. M., Thomopoulos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+loading+is+necessary+for+the+formation+of+a+functional+tendon+enthesis.">Muscle loading is necessary for the formation of a functional tendon enthesis.</a> Bone. 55 (1), 44-51 (2013).</li><li>Felson, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis+as+a+disease+of+mechanics.">Osteoarthritis as a disease of mechanics.</a> Osteoarthr Cartil. 21 (1), 10-15 (2013).</li><li>Ma, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+acupotomy+on+FAK-PI3K+signaling+pathways+in+KOA+rabbit+articular+cartilages.">Effect of acupotomy on FAK-PI3K signaling pathways in KOA rabbit articular cartilages.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2017, 4535326 (2017).</li><li>Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+experimental+animal+models+of+knee+osteoarthritis.">Research progress of experimental animal models of knee osteoarthritis.</a> China Medical Herald. 16 (27), 41-44 (2019).</li><li>Li, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+rabbit+knee+osteoarthritis+model.">Research progress of rabbit knee osteoarthritis model.</a> Journal of Jiangxi University of Chinese Medicine. 31 (4), 108-113 (2019).</li><li>Zhang, W., Gao, Y., Guo, C. Q., Khattab, I. Z. A., Mokhtari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+acupotomy+versus+electroacupuncture+on+ethology+and+morphology+in+a+rabbit+model+of+knee+osteoarthritis.">Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis.</a> J Tradit Chin Med. 39 (2), 229-236 (2019).</li><li>An, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondroprotective+effects+of+combination+therapy+of+acupotomy+and+human+adipose+mesenchymal+stem+cells+in+knee+osteoarthritis+rabbits+via+the+GSK3+beta-cyclin+D1-CDK4/CDK6+signaling+pathway.">Chondroprotective effects of combination therapy of acupotomy and human adipose mesenchymal stem cells in knee osteoarthritis rabbits via the GSK3 beta-cyclin D1-CDK4/CDK6 signaling pathway.</a> Aging Dis. 11 (5), 1116-1132 (2020).</li><li>Guo, C. Q., Liu, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+on+the+distribution+features+of+Ashi+points+in+Jingjin+disorders.">Analysis on the distribution features of Ashi points in Jingjin disorders.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 17 (8), 899-900 (2011).</li><li>Guo, C. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acupotomy+therapy+on+tenderness+point+around+knee+joint+in+patients+with+knee+osteoarthritis:+a+randomized+controlled+clinical+trial.">Effects of acupotomy therapy on tenderness point around knee joint in patients with knee osteoarthritis: a randomized controlled clinical trial.</a> Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 33 (3), 3-5 (2010).</li><li>Zhao, Y., Dong, F. H., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+soft+tissues+mechanical+changes+and+treatment+of+meridian+tendon+pain.">Analysis of soft tissues mechanical changes and treatment of meridian tendon pain.</a> Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. (9), 705-707 (2008).</li><li>Zhang, L. P., Cheng, F., Liu, D. Y., Zhu, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+progress+of+biomechanics+in+knee+osteoarthritis.">Application progress of biomechanics in knee osteoarthritis.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 34 (7), 1644-1647 (2016).</li><li>Thomas, A. C., Sowers, M., Karvonen-Gutierrez, C., Palmieri-Smith, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+quadriceps+dysfunction+in+women+with+early+knee+osteoarthritis.">Lack of quadriceps dysfunction in women with early knee osteoarthritis.</a> J Orthop Res. 28 (5), 595-599 (2010).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+unloaded+muscle+atrophy+on+contractile+characteristics+of+hind-limb+skeletal+muscles+in+mice.">Effects of unloaded muscle atrophy on contractile characteristics of hind-limb skeletal muscles in mice.</a> Space Med Med Eng. 25 (5), 322-325 (2012).</li></ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Um modelo animal adequado é um dos fatores-chave para atingir os objetivos experimentais e esclarecer uma questão científica específica. Este estudo foi baseado nas teorias de "Zongjin controlando ossos e articulações lubrificantes" e "desequilíbrio mecânico" em acupotomologia, com o objetivo de explicar a conotação científica por trás do tratamento de OA por meio da "modulação de músculos e tendões para tratar distúrbios ósseos" na terapia de acupotomia. Em outras palavras, a acupotomia melhora o ambie...

A osteoartrite do joelho (OA) é a forma mais frequente de osteoartrite, frequentemente reconhecida como uma doença de toda a articulação caracterizada por degeneração da cartilagem articular, que se manifesta clinicamente como dor, edema e limitação dos movimentos das articulaçõesafetadas1. De acordo com estatísticas epidemiológicas recentes, o KOA afetou 654,1 milhões de indivíduos em todo o mundo com 40 anos de idade ou mais em 2020. A prevalência e a incidência de OA aumentam com a idade, são mais altas em adultos de meia-idade e idosos, e afetam mais mulheres do que homens2. É provável que a prevalência de OA aumente devido ao envelhecimento da população e à epidemia de obesidade em todo o mundo, representando uma ameaça crescente à saúde pública global. Idade, sexo, obesidade, trauma e outros fatores de risco complicados associados à OA afetam diretamente a instabilidade do joelho, tornando o desequilíbrio biomecânico nas articulações do joelho uma das principais causas de OA3.
Em condições fisiológicas normais, a articulação do joelho está em um estado de equilíbrio mecânico, garantindo que as cargas mecânicas na articulação sejam distribuídas uniformemente sobre a cartilagem. Qualquer desequilíbrio mecânico na articulação do joelho pode levar a um estresse anormal na cartilagem, resultando na degeneração da cartilagem e no aparecimento de OA4. O sistema músculo-tendão é o principal sistema dinâmico que mantém o equilíbrio mecânico da articulação do joelho. O movimento coordenado do sistema músculo-tendão extensor e flexor pode distribuir uniformemente a carga gerada pelo movimento na superfície da cartilagem, evitando o desequilíbrio metabólico das tensões da cartilagem local além de sua carga fisiológica que resulta em perda de cartilagem5. A diminuição da força muscular é a principal causa de distúrbio do movimento intramuscular e dano da cartilagem, que pode ocorrer antes da OA sintomática. 
A OA também pode induzir inibição da musculatura artrógena (IAM), manifestando-se como fraqueza muscular e diminuição da força muscular ao redor do joelho6. Dentre esses músculos, o grupo quadríceps femoral funciona como o único extensor do joelho, uma estrutura importante na manutenção da estabilidade articular do joelho. Estudos têm demonstrado que a diminuição da área de secção transversa do quadríceps e da força muscular correlaciona-se significativa e positivamente com a progressão do OA7. O declínio da força do quadríceps afeta o padrão da marcha, a estabilidade do joelho, os padrões de movimento e muitas outras funções. Além disso, o declínio da força muscular prejudica a função tendínea, manifestando-se como diminuição da rigidez tendínea, módulo de elasticidade e outras propriedades biomecânicas8. No reparo de estiramentos a longo prazo, alterações como adesão e contratura podem ocorrer nos músculos e tendões da articulação do joelho, prejudicando suas propriedades mecânicas, causando instabilidade articular e, finalmente, formando um ciclo vicioso de alterações patológicas da OA. É, portanto, crucial para o tratamento de OA melhorar as propriedades mecânicas do sistema músculo-tendão e restaurar o equilíbrio mecânico articular.
Dentre as causas de OA de joelho, o desequilíbrio biomecânico é o principal fator indutor de dor no joelho, disfunção, lesões inflamatórias e degeneração da cartilagem9. Portanto, a chave para o tratamento de OA é restaurar o equilíbrio biomecânico da articulação do joelho. A acupotomologia acredita que a etiologia e a patogênese da OA são "desequilíbrio mecânico". Quando as características mecânicas dos tecidos moles ao redor do joelho mudam anormalmente, a articulação do joelho perde seu equilíbrio mecânico, e o ambiente de estresse mecânico anormal da articulação acelera a degeneração, causando estimulação inflamatória para agravar ainda mais as aderências de tecidos moles, contraturas e declínio adicional na estabilidade articular. Esse ciclo vicioso acaba se transformando em KOA. Ao afrouxar aderências e contraturas de tecidos moles, bem como reduzir a concentração de estresse nos músculos e tendões, a acupotomia em conjunto com a teoria da "Modulação de Músculos e Tendões para Tratamento de Distúrbios Ósseos" melhora a mecânica dos tecidos moles e "modula músculos e tendões", o que equilibra o estresse mecânico da articulação, aliviando efetivamente a degeneração da cartilagem e "tratando distúrbios ósseos"10. Em termos de seleção de modelos animais, com base no objetivo deste estudo, preparamos o modelo de OA pelo método de Videman modificado de imobilização da extensão do membro posterior esquerdo.
Este trabalho detalha o estabelecimento do modelo de OA utilizando o método Videman modificado de imobilização da extensão do membro posterior esquerdo e o método de operação e precauções da acupotomia. Demonstramos a eficácia da acupotomia testando as propriedades mecânicas do quadríceps femoral e tendão e detectando alterações no estresse e morfologia da cartilagem articular.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acupotomy</td>
			<td>Beijing Zhuoyue Huayou Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>0.4 x 40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connect Cast Orthopedic Casting Tape</td>
			<td>Suzhou Connect Medical Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>KCP06</td>
			<td>15.0 cm x 360 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided Foam Tape</td>
			<td>Deli Group Co.,Ltd.</td>
			<td>NO.30416</td>
			<td>36 mm x 5 yard x 2.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental Dewaxing Solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Beijing Hengkangda Medicine Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast grenn FCF</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>2353-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatigue testing machine</td>
			<td>BOSE, America</td>
			<td></td>
			<td>Bose Electro Force 3300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-channel physiological recorder</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>RM-6420</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-305E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-306E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical iodophor disinfectant</td>
			<td>Shan Dong Lircon Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Tape</td>
			<td>Shandong Rongjian Sanitary Products Co., Ltd.</td>
			<td>200402</td>
			<td>1.5 x 500 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle tension transducer&#160;</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>JH-2204005, 50 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prescale</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real-time SWE ultrasound diagnostic instrument</td>
			<td>SuperSonic Imagine SA,France</td>
			<td></td>
			<td>SuperSonic Imagine AixPlorer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhamsan gum</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>WG10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>477-73-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical Package for the Social Sciences (SPSS)</td>
			<td>IBM, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of acupotomy in a knee osteoarthritis model in rabbit

A osteoartrite do joelho (OA) é uma das doenças mais frequentemente encontradas no departamento ortopédico, o que reduz seriamente a qualidade de vida das pessoas com OA de joelho. Dentre vários fatores patogênicos, o desequilíbrio biomecânico da articulação do joelho é uma das principais causas de OA. A acupotomologia acredita que restaurar o equilíbrio mecânico da articulação do joelho é a chave para o tratamento da OA de joelho. Estudos clínicos mostraram que a acupotomia pode efetivamente reduzir a dor e melhorar a mobilidade do joelho, reduzindo a adesão, a contratura dos tecidos moles e os pontos de concentração de estresse nos músculos e tendões ao redor da articulação do joelho. 
Nesse protocolo, utilizamos o método de Videman modificado para estabelecer um modelo de OA por meio da imobilização do membro posterior esquerdo em posição reta. Delineamos detalhadamente o método de operação e os cuidados relacionados à acupotomia e avaliamos a eficácia da acupotomia em conjunto com a teoria da "Modulação de Músculos e Tendões no Tratamento de Distúrbios Ósseos" através da detecção das propriedades mecânicas do quadríceps femoral e tendão, bem como da mecânica e morfologia da cartilagem. Os resultados mostram que a acupotomia tem um efeito protetor sobre a cartilagem, ajustando as propriedades mecânicas dos tecidos moles ao redor da articulação do joelho, melhorando o ambiente de estresse da cartilagem e retardando a degeneração da cartilagem.

Knee osteoarthritis (KOA) is the most frequent form of osteoarthritis, often recognized as a whole-joint disease characterized by articular cartilage degeneration, which manifests clinically as pain, swelling, and limited movement of the affected joints1. According to recent epidemiological statistics, KOA is reported to have affected 654.1 million individuals globally who were 40 years of age or older by 2020. The prevalence and incidence of KOA rise with age, are the highest in middle-aged and older adults, and affect more women than men2. The prevalence of KOA is likely to increase due to the aging population and obesity epidemic worldwide, posing a growing threat to global public health. Age, sex, obesity, trauma, and other complicated risk factors associated with KOA all directly impact knee instability, making a biomechanical imbalance in knee joints one of the primary causes of KOA3.
Under normal physiological conditions, the knee joint is in a state of mechanical balance, ensuring that the mechanical loads in the joint are evenly distributed on the cartilage. Any mechanical imbalance in the knee joint can lead to abnormal stress in cartilage, resulting in cartilage degeneration and the onset of KOA4. The muscle-tendon system is the main dynamic system that maintains the mechanical balance of the knee joint. The coordinated movement of the extensor and flexor muscle-tendon system can evenly distribute the load generated by the movement on the cartilage surface, avoiding the metabolic imbalance of local cartilage stresses beyond its physiological load that results in cartilage loss5. Decreased muscle strength is the main cause of intramuscular movement disorder and cartilage damage, which may occur before symptomatic KOA. 
KOA can also induce arthrogenous muscle inhibition (AMI), manifesting as muscle weakness and decreased muscle strength around the knee6. Among these muscles, the quadriceps femoris group functions as the only knee extensor, an important structure in maintaining knee joint stability. Studies have shown that a decrease in quadriceps cross-sectional area and muscle strength is significantly and positively correlated with KOA progression7. The decline in quadriceps strength affects the gait pattern, knee stability, movement patterns, and many other functions. Moreover, the decline in muscle strength impairs tendon function, manifested as a decrease in tendon stiffness, elastic modulus, and other biomechanical properties8. In long-term strain repair, changes such as adhesion and contracture may occur in the muscles and tendons of the knee joint, damaging their mechanical properties, causing joint instability, and ultimately forming a vicious cycle of pathological changes of KOA. It is, therefore, crucial for KOA treatment to improve the mechanical properties of the muscle-tendon system and restore the joint mechanical balance.
Among the causes of KOA, biomechanical imbalance is the main inducing factor for knee pain, dysfunction, inflammatory lesions, and cartilage degeneration9. Therefore, the key to treating KOA is to restore the biomechanical balance of the knee joint. Acupotomology believes that the etiology and pathogenesis of KOA are "mechanical imbalance." When the mechanical characteristics of the soft tissues around the knee change abnormally, the knee joint loses its mechanical balance, and the abnormal mechanical stress environment of the joint accelerates degeneration, causing inflammatory stimulation to further aggravate the soft tissue adhesions, contractures, and further decline in joint stability. This vicious cycle eventually develops into KOA. By loosening soft tissue adhesions and contractures, as well as reducing stress concentration in the muscles and tendons, acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" improves the soft tissue mechanics and "modulates muscles and tendons," which balances the mechanical stress of the joint, effectively alleviating cartilage degeneration and "treating bone disorders"10. In terms of animal model selection, based on the purpose of this study, we prepared the KOA model by the modified Videman method of left hindlimb extension immobilization.
This paper details the establishment of the KOA model using the modified Videman method of left hind limb extension immobilization and the method of operation and precautions of acupotomy. We demonstrate the effectiveness of acupotomy by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and detecting changes in articular cartilage stress and morphology.

Autor em destaque: Investigando o mecanismo de ação da acupotomia no tratamento da osteoartrite do joelho

Aplicação de Acupotomia em Modelo de Osteoartrite de Joelho em Coelhos

Our research scope is the study of the mechanism of action of acupotomy in the treatment of new osteoarthritis. The question we want to answer, the how acupotomy regulates the mechanical properties of the soft tissues around the knee to protect the cartilage. At present, micro CT, nuclear magnetic resonance, phenetole elemental analysis, and bio mechanical detection techniques can be used to promote research in this field.We found that acupotomy improved the mechanical properties of soft tissue by removing the excisions and pathological contractors around the knee, thereby playing a role in protecting cartilage. To a certain extent, this protocol explains the mechanism and reveals the scientific connotation of acupotomy in the treatment of KOA and fills the gap in the basic research of acupotomy tendon and bone treatment method. In the future, our laboratory will focus on the specific mechanism or action of the acupotomy tendon and bone control method on cartilage protection.

Resultados experimentais das propriedades mecânicas do quadríceps femoral e tendão Para avaliar o efeito da acupotomografia nas propriedades mecânicas do quadríceps femoral em coelhos com OA de joelhos, utilizamos imagens de ultrassom elástico por ondas de cisalhamento em tempo real e um transdutor de tensão muscular, respectivamente. Em comparação com o grupo controle, o módulo de Young do quadríceps femoral no grupo OA apresentou diminuição (P < 0,05). Em comparação com o gru...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Investigating the Mechanism of Action of Acupotomy in Treating Knee Osteoarthritis at JoVE.com

Nesse protocolo, um modelo de osteoartrite de joelho foi elaborado pelo método de Videman modificado, e os procedimentos operatórios e precauções da acupotomia são detalhados. A eficácia da acupotomia tem sido demonstrada testando-se as propriedades mecânicas do quadríceps femoral e tendíneo e as propriedades mecânicas e morfológicas da cartilagem.

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of ...

Nosso escopo de pesquisa é o estudo do mecanismo de ação da acupotomia no tratamento da nova osteoartrite. A pergunta que queremos responder, a forma como a acupotomia regula as propriedades mecânicas dos tecidos moles ao redor do joelho para proteger a cartilagem. Atualmente, micro TC, ressonância magnética nuclear, análise elementar de fenetol e técnicas de detecção biomecânica podem ser usadas para promover pesquisas neste campo.Descobrimos que a acupotomia melhorou as propriedades mecânicas dos tecidos moles, removendo as excisões e contraídos patológicos ao redor do joelho, desempenhando assim um papel na proteção da cartilagem. Em certa medida, esse protocolo explica o mecanismo e revela a conotação científica da acupotomia no tratamento da OA e preenche a lacuna na pesquisa básica do método de tratamento do tendão e osso da acupotomia. No futuro, nosso laboratório se concentrará no mecanismo específico ou na ação do tendão da acupotomia e do método de controle ósseo na proteção da cartilagem.

application-of-acupotomy-in-a-knee-osteoarthritis-model-in-rabbit

Research

JoVE Journal

Medicine

Application of Acupotomy in a Knee Osteoarthritis Model in Rabbit

680 visualizações.  Beijing University of Chinese Medicine. Nosso escopo de pesquisa é o estudo do mecanismo de ação da acupotomia no tratamento da nova osteoartrite. A pergunta que queremos responder, a forma como a acupotomia regula as propriedades mecânicas dos tecidos moles ao redor do joelho para proteger a cartilagem. Atualmente, micro TC, ressonância magnética nuclear, análise elementar de fenetol e técnicas de detecção biomecânica podem ser usadas para promover pesquisas neste campo.Descobrimos que a acupotomia melhorou as pr...

Vídeo: Autor em destaque: Investigando o mecanismo de ação da acupotomia no tratamento da osteoartrite do joelho

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of people with KOA. Among several pathogenic factors, the biomechanical imbalance of the knee joint is one of the main causes of KOA. Acupotomology believes that restoring the mechanical balance of the knee joint is the key to treating KOA. Clinical studies have shown that acupotomy can effectively reduce pain and improve knee mobility by reducing adhesion, contracture of soft tissues, and stress concentration points in muscles and tendons around the knee joint. 
In this protocol, we used the modified Videman method to establish a KOA model by immobilizing the left hindlimb in a straight position. We have outlined the method of operation and the precautions related to acupotomy in detail and evaluated the efficacy of acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" through the detection of the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon, as well as cartilage mechanics and morphology. The results show that acupotomy has a protective effect on cartilage by adjusting the mechanical properties of the soft tissues around the knee joint, improving the cartilage stress environment, and delaying cartilage degeneration.

In this protocol, a knee osteoarthritis model was prepared using the modified Videman method, and the operation procedures and precautions of acupotomy are detailed. The effectiveness of acupotomy has been demonstrated by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and the mechanical and morphological properties of cartilage.

Medicina

Establishing the Knee Osteoarthritis Rabbit Model and Applying Acupotomy for Modulating Muscles and Tendons

To begin, fix the anesthetized rabbit in a supine position. Then, pull and fix the left hind limb in the fully extended position. Using medical tape as the first layer, cover the skin from the groin to the ankle joint.For the second layer, wrap 36 millimeter-wide double-sided foam tape over the medical tape. Then, wrap a polymer bandage from the groin to the ankle joint. Ensure the knee joint is 180 degrees straight, and the ankle joint is dorsiflexed by 60 degrees.For the third layer, immobilize the joints with small splints at the front and back of the knee and ankle joints. Then, wrap steel mesh around the outermost layer to protect against bites. Ensure to keep toes exposed, to observe blood circulation.To determine points of acupotomy treatment, palpate and mark pathological indurations of knee joints with a sterile skin marker. Then, disinfect the knee joint three times with alternating rounds of iodophor and 75%ethanol. Now align an acuoptomy blade parallel to the travel direction of the tendon and the longitudinal axis of the limb.Using the left thumb, press down on the skin at the marker point, then shift laterally to facilitate the separation of blood vessels and nerves on the thumb's ventral side. With the acupotomy handle in the right hand, apply a quick gentle pressure, causing the acupotomy blade to penetrate the skin. Slowly advance the blade to muscle induration, making longitudinal cuts and swinging laterally.After acupotomy, disinfect the knee joint using iodophor and apply a bandaid.

Estabelecendo o Modelo de Osteoartrite de Joelho em Coelhos e Aplicando Acupotomia na Modulação de Músculos e Tendões

Measuring Mechanical Properties of Quadriceps Femoris Contraction Force in Rabbits

To begin, cut the skin of an anesthetized rabbit below the patella, following the length of the limb upwards to the thigh base, then continue upwards for three to four centimeters. Carefully peel off the skin and fascia, exposing the quadriceps muscle. Cut the patellar ligament and carefully separate the quadriceps from the iliac junction, while maintaining the quadriceps in connection with the ilicium.Now ligate the surgical sutures at the tendon junction between the patella and quadriceps muscle. Stretch the muscle to its full length in its natural state and attach it to the tension transducer, aligning the ligation line on the muscle with that on the transducer. Secure the tension transducer to the bracket.Connect the signal acquisition line on the transducer to the bio signal acquisition system processor. Insert the electrodes parallel to the quadriceps abdomen, avoiding contact between the electrodes. Next, press the oscilloscope button.Adjust the position of the force transducer on the bracket to maintain the baseline at zero. At this stage, set the stimulator stimulation parameters with a single stimulus, a wave width of five milliseconds and a delay of 10 milliseconds. Set the initial value of the stimulus amplitude to zero volt and set the automatic amplitude to increase by 0.1 volt each time, to gradually increase the stimulus intensity.Then start the stimulation while observing the changes in the muscle contractions curve and contraction amplitude, until the maximum signal twitch amplitude of the quadriceps is determined. Next, use a cluster stimulus and set the stimulus amplitude, causing a maximum single twitch as the baseline to continuously stimulate the muscle. Set the initial value of the stimulation frequency to 10 hertz, and set the automatic frequency to increase by one hertz each time to gradually increase the stimulus frequency.Finally, start the stimulation while observing the changes in the muscle contraction curve until the maximum tetanic contraction amplitude of the quadriceps is determined. Young's modulus, single contraction amplitude, and tetanic contraction amplitude of the quadriceps femoris were significantly reduced in knee osteoarthritis group compared to the control and Acupotomy group.

Mensuração das propriedades mecânicas da força de contração do quadríceps femoral em coelhos

Safranin O/Fast Green Staining of Knee Joint Cartilage in Rabbits

After acupotomy intervention, embed the cartilage subchondral bone complex tissues in paraffin. Then, slice the tissue wax blocks and place them on the slides. Deparaffinize the slides with successive environmental dewaxing solutions for 15 minutes each.Then, dip the slides successively in xylene and anhydrous ethanol for two to five minutes each, followed by dehydration in decreasing ethanol concentrations. Stain the slide with fast green solution for one minute. After rinsing the excess fast green solution with ultrapure water, rinse slide quickly with 1%acetic acid solution several times for color separation.Again, rinse the slide with water as demonstrated before staining with safranin O solution for 10 to 15 minutes. Soak the slide in increasing ethanol concentrations for three to five seconds each, then, place the slide in successive xylene solution for 10 minutes each. Add a neutral resonance medium on the front of the slide, avoiding the tissue.Place the edge of the cover glass on the slide and slowly lower it to cover the neutral balsam. Wipe off the extra xylene and neutral balsam. After overnight drying, observe the slide under the microscope for cartilage histology scoring.In the control group, the cartilage surface was smooth and exhibited organized chondrocyte arrangement in all layers. In contrast, the cartilage surface was rough in the KOA group and the chondrocyte arrangement was disordered. Acupotomy improved the smoothness of the cartilage surface and preserved normal chondrocyte structure.The cartilage integrity score was significantly increased in the KOA group compared to the control and acupotomy group.