Secção Automatizada por Vibratomo de Tecido Pulmonar Incorporado em Agarose para Imagem por Fluorescência Multiplex

Este protocolo é particularmente útil em modelos animais de grande porte de transplante e regeneração pulmonar, como porcos, onde podemos amostrar pequenos pedaços ao longo do tempo. Essa técnica pode nos ajudar a entender melhor a biologia espacial em jogo nesses modelos. Essa técnica produz cortes pulmonares minimamente processados, adequados para imagens de imunofluorescência, sem a necessidade de recuperação de antígenos, e tem sido eficaz com todos os anticorpos testados até o momento.

Este procedimento pode ser adaptado para cortar seções ligeiramente mais espessas, digamos em torno de um milímetro, que podem ser usadas em microscopia de fluorescência de folhas de luz para estudar a expressão espacial de proteínas em um volume mais tridimensional. Nossa pesquisa está investigando fatores que influenciam a rejeição de transplante de pulmão e desenvolvendo terapias para reduzir a rejeição usando nosso modelo de porco. Essa técnica ajuda a entender as alterações proteicas espaciais que afetam os resultados do transplante pós-operatório.

Estamos atualmente usando esta técnica para explorar a paisagem de expressão espacial da proteína em nosso modelo de transplante de pulmão de porco. Esperamos que isso nos ajude a entender melhor os mecanismos por trás de nossas terapias experimentais. A chave para ter sucesso aqui está em avistamentos de vibratomos, altas amplitudes de lâmina e velocidades de força mais baixas são coisas fundamentais para observar se o seccionamento vai mal.