Estou explorando mecanismos de morte celular em descolamentos de retina e meu objetivo é garantir a rastreabilidade de dados in vitro para experimentos in vivo. Em nossa equipe, demonstramos o envolvimento de diferentes mecanismos de morte celular durante a degeneração dos fotorreceptores. Existem muitas maneiras que foram descritas para induzir o descolamento de retina em roedores.
Este protocolo foi desenhado para responder a dois desafios, reprodutibilidade e segurança. Fornecer um protocolo reprodutível e seguro no descolamento de retina garantirá eficiência nesse tipo de pesquisa. Para começar, monte uma ponta de metal de cânula de calibre 30 de 10 milímetros não chanfrada cimentada em uma seringa de 25 microlitros em um microinjetor.
Para induzir o descolamento de retina a longo prazo, use 2% de hidroxipropilmetilcelulose ou 1% a 5% de hialuronato de sódio. Carregue a solução preparada na seringa. Em seguida, aplique uma gota de tropicamida a 0,5% em um olho de um rato anestesiado para obter midríase.
Aplique uma gota de oxibuprocaína no olho a ser operado. Use um microscópio oftálmico conectado a um pedal para realizar a cirurgia. Para expor a esclera, ancore duas pálpebras puxando suturas no quarto externo da margem palpebral nas pálpebras superior e inferior.
Puxe as suturas para obter um abaulamento suave do olho. Com uma agulha de calibre 30, crie um canal escleral através da conjuntiva bulbar temporal a aproximadamente um a dois milímetros do limbo da córnea. Aplique gel lacrimal como interface ocular durante todo o procedimento.
Para visualizar a placa retiniana, coloque uma lente de contato plana com oito milímetros de diâmetro na superfície do olho. Use o pedal do microscópio para focar no plano da retina. Agora, insira a cânula verticalmente através do canal escleral pré-formado.
Aproxime-se lentamente da retina e pressione-a suavemente até que o clareamento da retina seja observado. Mantenha a estabilidade da ponta durante a injeção através da retinotomia formada pelo fluxo de injeção Após a injeção, remova a ponta da retinotomia. Em seguida, retire suavemente toda a cânula da cavidade vítrea, garantindo que a lente não seja tocada.
Certifique-se de que o reflexo vermelho pupilar seja alterado pelo descolamento da retina sem observar o fluxo sanguíneo dentro da cavidade vítrea. Remova as suturas das pálpebras e, em seguida, limpe o sangramento com cuidado. Avalie brevemente a pressão intraocular manualmente.
Para cuidados pós-operatórios, aplique pomada ocular de cloranfenicol retinol no olho operado. Em seguida, administre um mililitro de 5% de glicose monohidratada por via intraperitoneal. Injete 0,9 miligramas por quilograma de atipamezol por via subcutânea.
Por fim, transfira o animal para uma câmara com temperatura controlada e monitore-o até que ele acorde. A injeção sub-retiniana bem-sucedida foi verificada pelo fluido sub-retiniano claro na tomografia de coerência óptica e pela ausência de hemorragia sub-retiniana na fotografia do fundo de olho. E um descolamento de retina distinto foi observado em ambas as modalidades.
Pequenas hemorragias intravítreas foram ocasionalmente observadas, principalmente perto do local da injeção, mas não se estenderam para o espaço sub-retiniano.
