Sto esplorando i meccanismi di morte cellulare nei distacchi di retina e il mio obiettivo è garantire la tracciabilità dei dati in vitro agli esperimenti in vivo. Nel nostro team, abbiamo dimostrato il coinvolgimento di diversi meccanismi di morte cellulare durante la degenerazione dei fotorecettori. Ci sono molti modi che sono stati descritti per indurre il distacco della retina nei roditori.
Questo protocollo è stato progettato per rispondere a due sfide: la riproducibilità e la sicurezza. Fornire un protocollo riproducibile e sicuro nel distacco di retina garantirà l'efficienza in questo tipo di ricerca. Per iniziare, montare una punta metallica della cannula calibro 30 da 10 millimetri non smussata cementata su una siringa da 25 microlitri su un micro iniettore.
Per indurre il distacco di retina a lungo termine, utilizzare il 2% di idrossipropilmetilcellulosa o dall'1% al 5% di ialuronato di sodio. Caricare la soluzione preparata nella siringa. Successivamente, applicare una goccia di tropicamide allo 0,5% su un occhio di un ratto anestetizzato per ottenere la midriasi.
Applicare una goccia di ossibuprocaina nell'occhio da operare. Utilizzare un microscopio oftalmico collegato a un interruttore a pedale per eseguire l'intervento chirurgico. Per esporre la sclera, ancorare due punti di sutura per tirare le palpebre al quarto esterno del margine palpebrale alle palpebre superiore e inferiore.
Tirare i punti di sutura per ottenere un leggero rigonfiamento dell'occhio. Con un ago calibro 30, creare un canale sclerale attraverso la congiuntiva bulbare temporale a circa uno o due millimetri dal limbus corneale. Applicare il gel lacrimale come interfaccia occhio-lente durante tutta la procedura.
Per visualizzare la lastra retinica, posizionare una lente a contatto piatta con un diametro di otto millimetri sulla superficie dell'occhio. Utilizzare l'interruttore a pedale del microscopio per mettere a fuoco il piano retinico. A questo punto, inserire la cannula verticalmente attraverso il canale sclerale preformato.
Avvicinarsi lentamente alla retina e premerla delicatamente fino a quando non si osserva lo sbiancamento della retina. Mantenere la stabilità della punta durante l'iniezione attraverso la retinotomia formata dal flusso di iniezione Dopo l'iniezione, rimuovere la punta dalla retinotomia. Quindi, estrarre delicatamente l'intera cannula dalla cavità vitreale, assicurandosi che la lente non venga toccata.
Assicurarsi che il riflesso rosso pupillare sia alterato dal distacco di retina senza osservare il flusso sanguigno all'interno della cavità vitreale. Rimuovere le suture palpebrali, quindi tamponare accuratamente l'eventuale sanguinamento. Valutare brevemente la pressione intraoculare manualmente.
Per l'assistenza postoperatoria, applicare l'unguento oculare al cloramfenicolo retinolo sull'occhio operato. Quindi, somministrare un millilitro di glucosio monoidrato al 5% per via intraperitoneale. Iniettare 0,9 milligrammi per chilogrammo di atipamezolo per via sottocutanea.
Infine, trasferisci l'animale in una camera a temperatura controllata e monitoralo fino al suo risveglio. Il successo dell'iniezione sottoretinica è stato verificato dal liquido sottoretinico chiaro nella tomografia a coerenza ottica e dall'assenza di emorragia sottoretinica nella fotografia del fondo oculare. E un distacco di retina distinto è stato osservato in entrambe le modalità.
Occasionalmente sono state osservate emorragie intravitreali minori, principalmente vicino al sito di iniezione, ma non si sono estese allo spazio sottoretinico.
