АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

Аннотация

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C. elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C. elegans.

Введение

Alcohol use disorders (AUD) are widespread and produce serious health, social, and economic problems. In humans, the susceptibility to developing an AUD is heavily influenced by both genetics and the environment1,2. A strong physiological predictor of abuse liability is the initial level of response (LR) to alcohol (ethanol) that is exhibited by naïve drinkers3-5. This LR phenotype is influenced by genetics and non-genetic components6. Determining the molecular mechanisms that influence the LR to ethanol is an important goal of the study of ethanol response behaviors.

The nematode, Caenorhabditis elegans, has been increasingly used as a model for studying the effects of ethanol on behavior7-9. There is strong molecular conservation in the machinery of nervous system function between worms and mammals, and several genes that have been shown to influence the LR to ethanol in worms have been shown to influence LR to ethanol in mammals10-16, and have been implicated in abuse liability in humans17-19.

Ethanol intoxicates worms, which is reflected in a decrease in their locomotion speed. Several different laboratories have developed behavioral assays that differ in several ways, for example, the locomotion behavior that they study (crawling versus swimming11,12,14,20,21) or in the composition of the solutions in which the assays are performed (nematode growth medium versus Dent’s saline20,22). Interestingly, these diverse assays have yielded somewhat different dose response profiles for the effects of ethanol. These results have pointed to important differences in the underlying behaviors of crawling and swimming9,23, as well as a role for the environmental variable osmolarity in ethanol responses20, and have highlighted the importance of describing experimental detail of the various assays.

An assay to measure the acute effects of ethanol on crawling behavior is presented here. This assay has been used extensively to study the genetic and environmental influences on the LR to ethanol8,10,20,24,25. The mammalian LR phenotype is a composite of at least two components, initial sensitivity to ethanol and acute functional tolerance to ethanol26,27. In worms, the LR phenotype has been shown to be separable into these two components through the use of this behavioral assay. The influences of genetic and environmental manipulations on both phenotypes can be examined using this single assay. Importantly, these two phenotypes are genetically separable.

протокол

1. Шаги, чтобы выступить на День перед анализом

  1. Выберите L4 стадии червей в свежую среду роста нематода (NGM) пластинки засевают газон OP50 Е. палочка, и культура их в 20 CO / N. Каждое условие анализ требует 10 червей; выбрать избыток червей для обеспечения O / N потери червей.
    1. Только анализов животных, которые первого дня взрослые; многие мутанты растут на более низкой скорости, чем дикого типа. Настройка времени собирания для штаммов, которые имеют задержки в развитии, так что все подопытных животных, в первую дня взрослые.

2. Этапы выступить на день исследования

  1. Получение для анализа:
    1. Выполните анализы на стандартных раздающих 60 х 15 мм NGM пластин. Сушат все из пластин, которые будут использоваться при 37 ° С в течение 2 ч, с крышками выходных. Для каждой экспериментальной суда, используйте четыре сушеных NGM пластин; Они будут 0 мм и 400 мм этанол Планшеты и их сопровождающих акклимационный пластин.
      ПРИМЕЧАНИЕ:Использование NGM пластин Здесь важно; Различия в составе пластин, в частности, их осмолярности, может сильно повлиять на реакцию дозы этанола на поведение, это связано, по меньшей мере частично, на изменения в количестве этанола, накопленных животных 20. NGM агар 160 мОсм.
    2. После сушки, взвешивают каждый из Unseeded NGM пластин, которые будут использоваться в анализе и вес. Определить объем информации в пластинах на основе веса пустой тарелкой. Для аппроксимации преобразование массы к объему агар, предположим, что носитель весит такой же, как в равном объеме воды.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Наши самые последовательные результаты были получены с NGM среды, что обезвоженных достаточно, что оригинальный 10 мл объема имеет объем после сушки между 8.3-8.9 мл. Альтернативой 2 ч сухое время, чтобы высохнуть, пока пластины не достигнут этот диапазон громкости для учета различий в инкубаторах.
    3. 4 расплава меди кольца (внутренний диаметр 1.6 см) на поверхность каждой из пластин в качестве загонов для различных генотипов или лечения групп worms.Grasp каждое кольцо пинцетом и тепла в пламени (сильный пламени из горелки Бунзена работает хорошо) в течение приблизительно 3 сек. Сразу положите кольцо на тарелку, продолжая удерживать кольцо с пинцета, чтобы предотвратить его от "пропуск".
      1. Убедитесь, что кольцо прилегает к поверхности агара, нажав осторожно пинцетом в нескольких точках по кольцу. При размещении кольцо, будьте осторожны, чтобы оставить место для еще трех колец.
      2. Melt три дополнительные медные кольца в поверхность пластины, заботясь, чтобы разместить их ближе друг к другу, насколько это возможно, так что все четыре будет в поле зрения камеры.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Создание хорошее уплотнение, агар необходимо держать червей в кольцах во время теста. Кольца, пропустить вокруг на плите вряд ли сделают правильный печать, агар иможет шрам агар, который позволяет черви зарываются и препятствует визуализации червей.
      3. Для каждого планшета для анализа подготовить сопроводительную "акклиматизации" пластинку, которая должна быть сухой и без раздающих и не будет получать этанол. Поместите четыре медные кольца на этих пластинах.
    4. Добавьте в нижней части пластины рядом с каждым кольцом с червячной штамма, который будет использоваться в кольце, заботясь, чтобы не записать в поле зрения самого кольца. Матч этикетки на планшете для анализа с сопровождающей ее акклиматизации пластины.
    5. Рассчитать количество 100% -ного этанола, чтобы добавить к каждой аналитической пластине таким образом, что конечная концентрация составляет 0 мм или 400 мМ этанола (вес к объему). Для каждого эксперимента (N = 1), то будет один 0 мм и один 400 мМ этанола пластины; Акклиматизация пластины не получить этанол. Добавить этанола, пипеткой его по поверхности пластины. Используйте лабораторной пленкой, чтобы запечатать пластины и дайте ему равновесие на станке в течение 2 ч.
    6. При 1,5 ч истечет, начать акклиматизации стадию анализа, шаг 2,2.
  2. Выполните локомоции анализа: Планшеты
    1. Тщательно передачи 10 червей из каждой экспериментальной группы в центре медного кольца на акклиматизации пластины. Удалить любую пищу, которая видна на агар в этой точке, очищая осторожно червя выбор. Измените порядок, в котором экспериментальные группы положить на тарелки по всей экспериментальных исследований, так что те же черты не ставятся на пластинах в том же порядке через судебных разбирательств.
      ПРИМЕЧАНИЕ: цель заключается в передаче животных в тарелку с минимальными количествами пищи, потому что, если еда на акклиматизации пластины передается на планшет для анализа черви скапливаются вокруг пищи, и эффект препарата на передвижения будут скрыты.
    2. Будьте осторожны, чтобы не сломать поверхность агара с киркой, так как это позволит черви зарываются и будет нарушать анализа. Инкубируйте червей при комнатной температуре в течение 30 мин.
    3. Убедитесь, что есть соответствующий интервал между посвящений каждой пластины. Опытный экспериментатор может двигаться 40 животных, 10 / кольцо для 4 колец в <1,5 мин, но любой интервал до 2 мин является приемлемым. Стандартный метод имеет Видеозапись на 10-12 мин и 30-32 мин экспозиции в 0 мм до 400 мм этанола.
    4. Инициировать акклиматизации пластину для воздействия 0 мм, а акклиматизации пластину для воздействия 400 мМ примерно 2 мин и 30 сек друг от друга, чтобы позволить для сохранения первого файла кинофильма до второй ролик должен начать.
    5. После 30-минутного периода акклиматизации, передавать червей из пластин акклиматизации планшеты для анализа. Передача червей планшеты для анализа (0 мм или 400 мМ этанола) в том же порядке, что они были добавлены в акклиматизации пластины, отслеживание сроков между пополнений каждого планшета. Печать пластину лабораторной пленкой, чтобы свести к минимуму потери этанола испарения.
    6. Uсе движение черпая с тонким краем плоской червь забрать сбора червей в верхней части сплющенного выбор. Выполните передачу червей из без затравки акклиматизации пластины для планшета для анализа без использования бактерий, которые обычно используются в передаче червей, поскольку это помогает склеить червя на выбор.
      Примечание: Скорость, с которой животные передаются на этом этапе очень важно, потому что первые черви на пластине будет подвергаться воздействию этанола больше, чем последние червей, добавленных к пластине, и более ранние моменты времени может показать некоторые зависящие от времени воздействия. Это главная причина, вращающихся, какие штаммы помещаются на тарелку сначала по экспериментальным повторов.
  3. Выполните опорно-двигательного Пробирной: Съемки
    1. Используйте комбинацию микроскоп / камеры, что позволяет для одновременной визуализации всех четырех колец в поле зрения (примерно 42x42 мм 2 площади), таких как 0.5x объектива микроскопа, увеличением 0,8x и камерой с 2048x2048 7,481; м МП ПЗС.
    2. Используйте равномерное освещение по всему полю зрения, которая помогает в признании объекта в пороговой интенсивности стадии (см. Ниже) 3 "x3" подсветка работает хорошо.
    3. Изображение черви на пластину, расположенную СМИ стороной вверх (вниз крышку), который генерирует контраст, который теряется при использовании подсветки по сравнению с традиционным микроскопом, передаваемой источником света.
    4. Подготовка программного обеспечения для анализа изображений, чтобы захватить покадровой фильмы движущихся червей. Установите программное обеспечение для захвата 12-битных изображений в оттенках серого раз в 1 сек, а 2-мин (120 кадров) видео. Чтобы уменьшить размер выходного файла, в то время как все еще сохраняя достаточное разрешение изображения, используйте режим биннинга 2x2 захватить 1024х1024 пикселей изображения.
    5. Запишите фильмы. Начало записи 120-кадра фильм о первой пластины (0 мМ этанола) 10 мин после последнего червей помещают на этой пластине. Сохранить файл фильма.
    6. Запись второй пластины (400 мМ этанола). Повторите этот процесс дляобе пластины начинают через 30 минут после последнего червей помещают на первой пластине (0 мм этанол), чтобы захватить 30-32 минутные перерывы баллов за каждый экспозиции.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Обеспечьте достаточное время, чтобы сохранить файлы изображений после каждой сессии захвата перед началом записи следующего пластины должны быть проанализированы.
    7. Для перспективность архивных фильмов и чтобы эти фильмы должны быть открыты и проанализированы с помощью других программ для обработки изображений в общественном достоянии с открытым исходным кодом, таких как ImageJ 28, конвертировать копию каждого фильма в 8-битный 256 оттенков серого TIFF файлов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: программное обеспечение для анализа изображений описаны здесь использует собственный формат файлов.
  4. Анализ фильмов с помощью программного обеспечения ImagePro.
    1. После того, как в плен, анализировать видео с помощью Image-Pro Plus программного обеспечения или его эквивалент.
      ПРИМЕЧАНИЕ: разнообразию других программ слежения объект доступен, который был использован, чтобы успешно отслеживать несколько C. Элеганс в свое время 29 и такиеПрограммное обеспечение было бы разумно заменить, как описано здесь, как шаги идентификации объекта основаны на схожих принципах. Метод, описанный относится к изображению-Pro Plus версии программного обеспечения 6.0-6.3 и 7.0 новых версий Имидж-Pro Plus программного обеспечения может иметь незначительные отличия.
    2. Анализ фильмов в 2-мин (120 кадров) сегментов. Во-первых, применить фильтр к изображениям, чтобы сгладить фон и повысить контрастность объектов червей. Выберите фильтр следующим образом: Меню> Процесс> Фильтры> Души> Flatten: Параметры: Фон = Dark; Функция Ширина = 20 пикс.
    3. Re сохранение фильмы после стадии фильтрации, но всегда сохраняют оригинальный фильм в его нефильтрованного форме.
      1. Анализ передвижение животных в каждом кольце отдельно с круговой области интереса (ROI), что находится и размеры пересекаться с медным кольцом. Идентифицировать и отслеживать червей в меню> Меры> отслеживать объекты ... команду; Это поднимает отслеживания Dата столиком у окна. Кнопка Параметры отслеживания позволяет отдельные треки должны быть исключены, а также ограничить любые экспериментальные артефакты.
    4. На вкладке Auto Tracking, используйте следующие параметры: параметры трека: предел скорости (радиус поиска) = 400 мкм / кадр, ускорение предел = Auto, Минимальная общая длина трека = 400 мкм, преобладающих движения типа = хаотично; Объекты в параметрах трека: Разрешить частичные медиа = Да, минимальная длина = 21 кадров, отслеживание глубины прогнозирования = 1 кадр.
    5. Чтобы начать процесс отслеживания, нажмите Найти все дорожки автоматически функциональную кнопку, чтобы открыть диалоговое окно Count / вариантов размера и диалоговое окно слежения. Выберите параметр Вручную для выбора интенсивности диапазона в диалоговом окне Граф / размер, который обеспечивает важный рубеж шаг, который использует интенсивность, черно-белое червя пикселей выделить объект червя для анализа и игнорировать светлом фоне пикселей.
      1. Отрегулируйте порог интенсивности SLIDers (от одного до установить верхний предел, один, чтобы установить нижний предел), чтобы создать инклюзивное диапазон, который выдвигает на первый план все темные объекты. Диапазон 0-1,500 по шкале от 0-4,095 является хорошей отправной точкой для более точной настройки.
      2. Применение размер фильтр, чтобы исключить объекты, которые больше и меньше, чем одного объекта червя, такие как медным кольцом и любого мусора на пластинах. Установите два параметры размера, чтобы сделать это, которые охватывают размеры для отдельных червей в различных позах с мерой> Выберите Измерения пункт меню в диалоговом окне Параметры Граф / размер. (Диапазон Площадь: 28,000-120,000 мкм 2 и по периметру диапазон: 600-2,500 мкм).
      3. Если мутантный штамм значительно меньше или больше, чем другие животные на тарелке должны быть проанализированы, расширить диапазон параметров фильтра для распознавания объектов для размещения различных размеров штаммов, прежде чем отслеживания животных так, что настройки не должны быть изменены в середине-анализ.
    6. Завершить процесс отслеживания, нажав Продолжить в диалоговом окне слежения. Визуально сравнить выходные треки с прогрессом каждого червя в кино, чтобы гарантировать, что каждый червь представлена, если нет веских оснований для исключения его на основе автоматических настроек фильтра. Удаление треков, которые были произведены в присутствии подтвержденных объектов без червей, которые отвечают критериям размера фильтра вручную.
    7. Используйте программное обеспечение для расчета скорости каждого червя между кадрами (расстояние для центра тяжести объекта за 1 сек между кадрами) и отображать среднюю скорость для каждого трека и среднюю скорость на всех треках для населения червей в медное кольцо. Считайте, что это окончательное среднем равна п = 1 с точки зрения экспериментальных исследований. Экспортировать данные в программу электронных таблиц для статистического анализа и архивирования данных.
    8. После того как данные были записаны в первое кольцо на пластине, переместить ROI к следующему кольцу иповторите процесс отслеживания, без изменения каких-либо параметров.
    9. Рассчитать относительную скорость передвижения через:
    10. Относительная частота вращения (%) = обрабатывали (400 мМ) Скорость / необработанной (0 мм) Скорость х 100.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Различные генетические манипуляции часто изменять базальную скорость локомоции животных. Для того чтобы определить влияние этанола на скорость локомоции животных и иметь возможность сравнивать эти эффекты через различных генотипов или условий, расчета относительной скорости.

Результаты

Представительства данные (Рисунок 1) из нескольких разных генотипов и их парных контрольных представлены 8,24; Данные были специально выбраны, что различия событием в анализируемых животных. Степень влияния на 10 мин воздействия считается исходной чувствительности штамма...

Обсуждение

Просто нейробиологии и генетические инструменты доступны в С. Элеганс сделать червь отличная модель, в которой для изучения молекулярных основ воздействия этанола на поведение. Здесь мы опишем анализ, который был использован для идентификации нескольких молекулярных и экологич?...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

Эти исследования были поддержаны грантами от Национальных Институтов Здоровья, Национальный институт по проблемам алкоголизма и злоупотребления алкоголем: R01AA016837 (JCB) и P20AA017828 (АГД и JCB).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
C. elegans strainsCaenorhabditis Genetics Center
60 x15 mm Petri plates, triple ventedGreiner Bio-One628161Other plate brands will suffice.
NGM agarVariousNaCl (3g/L), agar (17g/L), peptone (2.5g/L), 1 mL cholesterol (5mg/mL in ethanol), 1 mL (1M) MgSO4, 1 mL (1M) CaCl2, 25 mL (1M) KPO4, pH=6, 975 mL H2O
ForcepsVariouse.g. Fisher Scientific #10300
37°C IncubatorVariousFor drying agar
Digital balanceVariousFor determining plate weights and agar volume
Copper ringsPlumbmasterSTK#35583 (48 cap thread gasket)1.6 cm inner diameter, 1.8 cm outer diameter copper rings
100% ethanolVarious
Parafilm MBemisPM996
CCD cameraQImagingRET-4000R-F-M-12This camera has a large field of view.
Stereomicroscope with C-mount and 0.5X objectiveLeicaMZ6Discontinued model, M60 is current equivalent.
Light sourceSchottA089233”x3”  backlight for even illumination across the field of view
Imaging and tracking softwareMedia CyberneticsImagePro-Plus v6.0-6.3Newer versions of the software have tracking functions.

Ссылки

  1. Prescott, C. A., Kendler, K. S. Genetic and environmental contributions to alcohol abuse and dependence in a population-based sample of male twins. Am. J. Psychiatry. 156, 34-40 (1999).
  2. Schuckit, M. A. Genetics of the risk for alcoholism. Am. J. Addict. Article Review. 9, 103-112 (2000).
  3. Heath, A. C., et al. Genetic differences in alcohol sensitivity and the inheritance of alcoholism risk. Psychol. Med. 29, 1069-1081 (1999).
  4. Rodriguez, L. A., Wilson, J. R., Nagoshi, C. T. Does psychomotor sensitivity to alcohol predict subsequent alcohol use. Alcohol. Clin. Exp. Res. 17, 155-161 (1993).
  5. Schuckit, M. A., Smith, T. L. An 8-year follow-up of 450 sons of alcoholic and control subjects. Arch. Gen. Psychiatry. 53, 202-210 (1996).
  6. Kalu, N., et al. Heritability of level of response and association with recent drinking history in nonalcohol-dependent drinkers. Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 522-529 (2012).
  7. Davis, S. J., Scott, L. L., Hu, K., Pierce-Shimomura, J. T. Conserved single residue in the BK potassium channel required for activation by alcohol and intoxication in. C. elegans. J. Neurosci. 34, 9562-9573 (2014).
  8. Raabe, R. C., Mathies, L. D., Davies, A. G., Bettinger, J. C. The Omega-3 Fatty Acid Eicosapentaenoic Acid Is Required for Normal Alcohol Response Behaviors in C. elegans. PLoS ONE. 9, e105999 (2014).
  9. Topper, S. M., Aguilar, S. C., Topper, V. Y., Elbel, E., Pierce-Shimomura, J. T. Alcohol disinhibition of behaviors in C. elegans. PLoS ONE. 9, e92965 (2014).
  10. Bhandari, P., et al. Chloride intracellular channels modulate acute ethanol behaviors Drosophila,Caenorhabditis elegans and mice. Genes Brain Behav. 11, 387-397 (2012).
  11. Davies, A. G., et al. A central role of the BK potassium channel in behavioral responses to ethanol in C. elegans. Cell. 115, 655-666 (2003).
  12. Davies, A. G., Bettinger, J. C., Thiele, T. R., Judy, M. E., McIntire, S. L. Natural variation in the npr-1 gene modifies ethanol responses of wild strains of C. elegans. Neuron. 42, 731-743 (2004).
  13. Kapfhamer, D., et al. Loss of RAB-3/A in Caenorhabditis elegans and the mouse affects behavioral response to ethanol. Genes Brain Behav. 7, 669-676 (2008).
  14. Speca, D. J., et al. Conserved role of unc-79 in ethanol responses in lightweight mutant mice. PLoS Genet. 6, e1001057 (2010).
  15. Thiele, T. E., Badia-Elder, N. E. A role for neuropeptide Y in alcohol intake control: evidence from human and animal research. Physiol. Behav. 79, 95-101 (2003).
  16. Treistman, S. N., Martin, G. E. BK Channels: mediators and models for alcohol tolerance. Trends Neurosci. 32, 629-637 (2009).
  17. Han, S., et al. Integrating GWASs and human protein interaction networks identifies a gene subnetwork underlying alcohol dependence. Am. J. Hum. Genet. 93, 1027-1034 (2013).
  18. Kendler, K. S., et al. Genomewide association analysis of symptoms of alcohol dependence in the molecular genetics of schizophrenia (MGS2) control sample. Alcohol. Clin. Exp. Res. 35, 963-975 (2011).
  19. Schuckit, M. A., et al. Autosomal linkage analysis for the level of response to alcohol. Alcohol. Clin. Exp. Res. 29, 1976-1982 (2005).
  20. Alaimo, J. T., et al. Ethanol metabolism and osmolarity modify behavioral responses to ethanol in C. elegans. Alcohol. Clin. Exp. Res. 36, 1840-1850 (2012).
  21. Morgan, P. G., Sedensky, M. M. Mutations affecting sensitivity to ethanol in the nematode, Caenorhabditis elegans. Alcohol. Clin. Exp. Res. 19, 1423-1429 (1995).
  22. Mitchell, P. H., et al. The concentration-dependent effects of ethanol on Caenorhabditis elegans behaviour. Pharmacogenomics J. 7, 411-417 (2007).
  23. Vidal-Gadea, A., et al. Caenorhabditis elegans selects distinct crawling and swimming gaits via dopamine and serotonin. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 108, 17504-17509 (2011).
  24. Bettinger, J. C., Leung, K., Bolling, M. H., Goldsmith, A. D., Davies, A. G. Lipid environment modulates the development of acute tolerance to ethanol in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7, e35129 (2012).
  25. Davies, A. G., et al. Different genes influence toluene- and ethanol-induced locomotor impairment in C. elegans. Drug Alcohol Depend. 122, 47-54 (2012).
  26. Newlin, D., Thomson, J. Alcohol challenge with sons of alcoholics: a critical review and analysis. Psychol. Bull. 108, 383-402 (1990).
  27. Ponomarev, I., Crabbe, J. C. A novel method to assess initial sensitivity and acute functional tolerance to hypnotic effects of ethanol. J. Pharmacol. Exp. Ther. 302, 257-263 (2002).
  28. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nat Methods. 9, 671-675 (2012).
  29. Husson, S. J., Costa, W. S., Schmitt, C., Gottschalk, A. Keeping track of worm trackers. WormBook. , (2012).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

98Caenorhabditis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены