АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Нематоды Caenorhabditis elegans является прекрасной моделью для рассечения хост возбудитель взаимодействий. Описанные здесь — это протокол для заразить червь с членами mitis стрептококки группы и определения активации окислительного стресса ответ против H2O2 подготовленные этой группой организмов.

Аннотация

Caenorhabditis elegans (C. elegans), Свободноживущие нематоды, стала привлекательной модель для изучения взаимодействия хост патогена. Представленные протокол использует эту модель для определения патогенности, вызванных стрептококки группы mitis через производство H2O2. Стрептококки группы mitis являются возникающие угрозы, что причиной многих заболеваний человека как бактериемия, эндокардите и орбитального целлюлита. Описанные здесь протокол для определения выживание этих червей в ответ H2O2 производится по этой группе патогенов. В кодировке гена skn-1 для окислительного стресса ответ транскрипционный фактор, показано, что эта модель имеет важное значение для идентификации узла генов, которые необходимы против стрептококковой инфекции. Кроме того показано, что активации реакции окислительного стресса могут контролироваться в присутствии этих патогенов с помощью штамм червь трансгенных репортер, в котором SKN-1 сливается с зеленого флуоресцентного белка (ГПУП). Эти анализы обеспечивают добавлена возможность для изучения оксидативного стресса ответ H2O2 экзогенно получаемых биологический источник в отличие от реактивнооксигенных видов (ров) источников.

Введение

Стрептококки группы Mitis являются человеческие Комменсалами орофарингеальной области полости1. Однако эти организмы могут избежать этой ниши и вызывают различные заболевания инвазивным2. Инфекции, вызванные эти микроорганизмы включают бактериемии, эндокардите и орбитального целлюлита2,3,4,5,6. Кроме того, они появляются как возбудителей инфекций кровотока в нейтропенических с ослабленным иммунитетом и больных раком, которые прошли химиотерапию5,,78,9 .

Механизмы, основные группы патогенеза mitis скрывать, потому что было выявлено несколько факторов вирулентности. Известно, что группа mitis производят H2O2, который показал, чтобы играть важную роль в устной микробных сообществ10. Совсем недавно несколько исследований показали роль H2O2 как cytotoxin, которая вызывает эпителиальных клеток смерть11,12. Было показано, что S. пневмонии, которая принадлежит к этой группе, производят высокий уровень H2O2 , которая вызывает повреждение ДНК и апоптоз в альвеолярных клеток13. Использование животной модели острой пневмонии, же исследователи показали, что производство H2O2 бактериями дает преимущества вирулентности. Исследования по пневмококковой инфекции менингит также показали, что возбудитель производные H2O2 действует синергически с pneumolysin для запуска нейрональных клеток смерть14. Эти наблюдения четко установить, что подготовленные этой группой бактерий H2O2 имеет важное значение для их патогенности.

Интересно, что он также было показано что члены mitis группы S. mitis и S. oralis вызывают смерть нематоды C. elegans через производство H2O215,16. Это Свободноживущие нематоды использовался как простой, генетически шансов справиться с возникающими модель для изучения многих биологических процессов. Совсем недавно червь стала моделью для изучения хост возбудитель взаимодействия17,18. Кроме того некоторые исследования показали важность изучения оксидативного стресса, используя этот организм19,,2021. Его короткий жизненный цикл, способность после нокдауна генов интерес к RNAi и использование зеленого флуоресцентного белка (ГПУП)-плавленый репортеров для мониторинга экспрессии генов являются одними из атрибутов, которые делают его привлекательным модели системы. Что еще более важно пути, которые регулируют оксидативного стресса и врожденный иммунитет в червь высоко консервируют с млекопитающих20,22.

В этом протоколе показано, как использовать C. elegans для выяснения патогенности, вызванных стрептококками производные H2O2. Показано изменение выживания пробирного, и члены группы mitis способны убить черви быстро через производство H2O2. С помощью членов группы mitis, устойчивый биологический источник реактивнооксигенных видов (ROS) при условии, в отличие от химических источников, которые вызывают Оксидативный стресс в глистах. Кроме того бактерии способны колонизировать черви быстро, что позволяет для H2O2 быть непосредственно направлены на кишечные клетки (по сравнению с другими источниками, которые должны пересечь несколько барьеров). Assay проверяется либо 1) путем определения выживания мутантный штамм skn-1 или 2), стучать вниз skn-1 с помощью РНК-интерференции в червей по отношению к N2 одичал тип и вектор управления лечение глистов. SKN-1 является важным транскрипционный фактор, который регулирует оксидативного стресса ответ в C. elegans23,24,25. Помимо выживания анализов червь штамм, выражая трансгенных репортер SKN-1B/C::GFP используется для отслеживания активации окислительного стресса ответ через производство H2O2 mitis группой.

протокол

1. Подготовка твоего плиты агара (Todd Хьюитт дрожжевой экстракт)

  1. На 1 Л СМИ добавьте 30 г порошка Тодд-Хьюитт, 2 г экстракта дрожжей и 20 г агар колбу Эрленмейера 2 Л. Добавить содержимое колбы 970 мл деионизированной воды и включают в себя бар stir. Автоклав СМИ при температуре 121 ° C и давлении 15 фунтов/дюйм2 за 30 минут. После этого установите средства массовой информации на тарелку, перемешать и позволяют для охлаждения с мягким перемешиванием.
  2. Налейте размера стерильные Петри блюда (100 мм х 15 мм для роста и поддержания бактерий, 35 мм x 10 мм блюда за убийство анализов) СМИ под ламинарного потока. Разрешить СМИ сохнуть в течение 2 ч при ламинарных капюшоном. После этого пластины может храниться при температуре 4 ° C на 1 месяц.

2. Подготовка нематоды роста среднего (НГМ) и интерференции кормления пластины (НГМ RNAi)

  1. С помощью панели перемешать, Растворите 2.5 g Пептон и 3 г NaCl в 970 мл обессоленной воды в колбу Эрленмейера 2 Л. Добавьте 20 г агара для средств массовой информации. Автоклав СМИ при температуре 121 ° C и давлении 15 фунтов/дюйм2 на 30 мин набор средств массовой информации на тарелку, перемешать и позволяют для охлаждения с мягким перемешиванием.
  2. Добавьте следующие решения для средств массовой информации для подготовки NGM плит: 25 мл 1 М калия фосфат буфера (рН = 6.0), 1 мл 1 М MgSO4, 1 мл 1 М CaCl2, 1 мл (5 мг/мл в 95% спирте) холестерина , 1 мл (10% v/w в этиловом спирте) нистатин и 1 мл 25 мг/мл стрептомицина.
  3. Добавьте следующие решения для средств массовой информации для подготовки NGM RNAi кормления пластины: 25 мл 1 М калия фосфат буфера (рН = 6.0), 1 мл 1 М MgSO4, 1 мл 1 М CaCl2, 1 мл (5 мг/мл в 95% спирте) холестерина , 1 мл (10% v/w в этиловом спирте) нистатин, 1 мл carbenicillin 50 мг/мл и 1 мл IM IPTG.
  4. Залейте СМИ в 60 x 15 мм стерильные чашки Петри под ламинарного потока. Разрешить СМИ сохнуть в течение 2 ч при ламинарных капюшоном. Впоследствии пластины может храниться при температуре 4 ° C на 1 месяц.

3. поддержание C. elegans

  1. Семя NGM пластины, кровянистые выделения 50 мкл ночь выросли E. coli ОР50 в центре пластины. E. coli культуры подготовлен ранее в СМИ Бертани Лурия (LB) и хранить при 4 ° C на несколько месяцев. Накладки и позволить им высохнуть в течение 24 ч при ламинарных капюшоном и затем хранить пластин полистирола контейнеров.
  2. Под микроскопом рассечения, забрать 10-12 взрослых беременных, с использованием стерильных червь забрать и передачи червей в E. coli ОР50 семенами NGM пластины. Инкубируйте пластины при 20 ° C на ночь.
  3. На следующий день, удалите взрослых с помощью стерильных червь кирку и позволить эмбрионов развивать L4 личинки при 20 ° C (~2.5 дней).

4. Подготовка синхронных населения возраста червей

  1. Вымойте беременных взрослых от двух до четырех NGM пластины с помощью M9W и собрать их в 15 мл Конические трубки.
    1. Подготовить M9W: объединить 3 g NaCl, 6 g Na2HPO4и 3 g KH2PO4 и растворяются в окончательном объеме 1 Л деионизированной воды. Автоклав решения и добавьте 1 mL 1 М MgSO4.
  2. Спин трубы на 450 x g за 1 мин, а затем декантируют супернатант обеспечивая, что червь Пелле остается неизменным.
  3. Добавьте 400 мкл гипохлорита натрия 8,25% (бытовые отбеливающие средства) и 100 мкл 5 N NaOH подготовить решение лизис червя. Добавить решение лизиса в Пелле червя и смешать содержимое, стряхивая трубку до тех пор, пока лизированы 70% взрослых червей. Периодически наблюдать за содержимое тюбика под микроскопом рассечения, чтобы убедиться, что существует не overbleaching яйца.
  4. Разбавленных отбеливатель микс, добавив 10 мл M9W к содержанию Конические трубки.
  5. Спина трубки на 450 x g за 1 мин Decant супернатанта, затем добавляют 10 мл M9W.
  6. Повторите шаг 4.5 еще два раза.
  7. Ресуспензируйте результирующий Пелле яйцо в 3-5 мл M9W. Поместите трубку на вращателе трубки. Разрешить трубы вращаться со скоростью 18 об/мин при комнатной температуре (RT) на ночь.
  8. Следующий день, спина трубки на 450 x g за 1 мин до Пелле L1 личинки. Удалите большую часть M9W, аспирации, оставив позади ~ 250 мкл жидкости в трубе. Ресуспензируйте L1 личинок и место три 5 мкл капли червь подвески на Петри блюдо крышкой, а затем оценки числа червей за мкл рассечения микроскопе.

5. индукция RNAi в Worms

  1. С помощью стерильных цикла или выбрать, полоска из желаемых штаммов интерферирующих РНК содержащих E. coli из замороженных запасов (библиотеки Ahringer и Видал) на 100 мм x 15 мм LB плиты агара, содержащие 50 мкг/мл carbenicillin и 15 мкг/мл тетрациклина. Инкубируйте пластины при 37 ° C в течение 24 ч.
  2. Выбрать и прививать изолированной колонии от желаемого штамма RNAi в стерильных 15 мл конические пробирки, содержащие 2 мл фунтов с 50 мкг/мл carbenicillin. Инкубируйте трубы при 37 ° C для 16 h в орбитальный шейкер на 150 об/мин.
  3. На следующий день, распространение 150 мкл ночь выращивать культуры на 65 мм x 15 мм кормления пластин NGM интерференции с использованием стерильных разбрасывателя. Инкубируйте пластины при 37 ° C в течение 24 ч.
  4. Разрешить пластины остыть до RT после инкубации при температуре 37 ° C. Добавьте соответствующий объем M9W содержащий ~ 200 личинок L1 (полученные от синхронного возраста червей шагов) для е. coli посеян NGM RNAi кормления пластины. Инкубируйте пластины при 20 ° C до тех пор, пока личинки достигают стадии L4 (~2.5 дней).

6. Подготовка группы Mitis стрептококки инфекции

  1. Полоса из желаемых штаммы стрептококков на 100 мм x 15 мм твоих агар (если пластины были сохранены при температуре 4 ° C, предварительно теплой пластин для 37 ° C перед мелирование соответствующих штаммов), затем инкубировать пластин при 37 ° C ночь (~ 18 h) в кувшин свечи предоставление микроаэрофильных en условия для роста стрептококки (прожилками пластины может храниться в неделю на 4 ° C).
  2. Чтобы распространить клинических изолятов стрептококки, используйте tryptic соевый агар крови. Инкубируйте пластины при 37 ° C в кувшин свечи на ночь (~ 18 h).
  3. На следующий день, удалить пластины из jar свечи и выбрать отдельные колонии с помощью стерильных цикла. Прививать 15 мл стерильного конические пробирки, содержащие 2 мл твое бульон. Чтобы распространить клинических изолятов стрептококки, дополнить твое бульон с 5% v/v крови овец. Закройте крышки плотно и инкубировать трубы при 37 ° C в статических условиях.

7. выживание анализов

Примечание: Шаги в этом assay изображены на рисунке 1. Чтобы продемонстрировать, что H2O2 получаемых mitis группа несет ответственность за убийство червь, дополнить СМИ с каталазой, или мутантный штамм ΔspxB и дополнением штамм ΔspxB; spxB + S. гордони можно использоваться. SpxB кодирует пируват оксидазы, который отвечает за производство H2O2 в группе КАРПАТЫ.

  1. Предварительно теплой 35 мм x 10 мм твоих пластин для 37 ° C. 80 мкл ночь выращиваемых культур желаемого штаммы стрептококков и распространение бактерий полностью по всей поверхности агара с помощью стерильных разбрасывателя. Инкубируйте пластины при 37 ° C в кувшин свечи на ночь (~ 18 h). Как элемент управления, семян двух 35 мм x 10 мм NGM пластины с 80 мкл ночь выращиваемых культур E. coli ОР50. Инкубируйте пластины при 37 ° C на ночь.
  2. Чтобы подтвердить, что H2O2 mitis группа несет ответственность за убийство червей, 50 мкл содержащие 1000 единиц каталазы c на твое пластины. Распространения каталазы решения с помощью стерильных разбрасыватель и позволяют пластины для просушки в ламинарного потока для 30 min. семян пластины впоследствии с соответствующими стрептококк штаммов, как описано в шаге 7.1.
  3. На следующий день, удалить пластины из jar свечи и позволяют выбрать пластины остыть до RT на 10-15 мин, с использованием стерильных червя, передачи 30 L4 личинок от NGM или NGM RNAi кормления пластины на стрептококк посеян твоих пластины. Использование двух посеян твоих пластины с в общей сложности 60 червей за штамм стрептококка. Инкубировать пластины при 25 ° C.
  4. Под микроскопом рассечения, подсчитать количество живых и мертвых L4 личинок на каждой табличке на нескольких timepoints. Первоначально Оценка червей как мертвый или живой каждые 30 мин. Впоследствии когда черви быстро начинают умирать, оценка их каждые 15 мин. Используйте стерильные червь забрать мягко подтолкнуть червей и определить, если они являются живым или мертвым. Червь считается мертвым, если нет никакого движения в ответ на подталкивание.
  5. Assay займет 5-6 ч для завершения. Повторите эксперимент еще два раза. После завершения анализа объединить данные из двух пластин. Ввод данных каждой группы, сравнение кривых выживания и выполнять анализ выживаемости Каплана-Мейера, с использованием статистического программного обеспечения.

8. Подготовка агарозы колодки для микроскопии

  1. Растворяют 2% w/v агарозы в деионизированной воде путем нагревать решение в микроволновую печь. Объём 5 мл раствора достаточно для подготовки 20 слайдов.
  2. Палка лаборатории ленту вдоль пополам вдоль двух стеклянных скольжениях. Это позволит определить толщину прокладки агарозы. Место чистой стеклянное скольжение между двумя слайдами тесьмой.
  3. Место 100 мкл расплавленного агарозы в центре чистый слайд. Сразу же место другой чистый стакан поверх расплавленного агарозы и аккуратно нажмите вниз, чтобы сделать площадку. Разрешить агарозы затвердеть и впоследствии удалить верхний слайд. Pad агарозы готова к использованию.

9. наблюдение за СКН-1 локализации в ответ на инфекцию стрептококка

Примечание: Шаги в этом assay изображены на рисунке 2. Локализация СКН-1 был определен с помощью штамм трансгенных червей SKN-1B/C::GFP. Чтобы продемонстрировать локализации СКН-1 за счет производства H2O2 mitis группой, одичал тип (WT), ΔspxB и дополнение штамм ΔspxB; spxB + S. gordonii были использованы. Кроме того продемонстрировать, что компоненты p38 MAPK путь регулировать локализации СКН-1 использовались трансгенных репортер штамм SKN-1B/C::GFP и RNAi вмешательства техники.

  1. Предварительно теплой 35 мм x 10 мм твоих пластин для 37 ° C. 80 мкл ночь выращиваемых культур желаемого штаммы стрептококка и распространение бактерий полностью по всей поверхности агара с помощью стерильных разбрасывателя. Инкубируйте пластины при 37 ° C в кувшин свечи на ночь (~ 18 h). Как элемент управления, семя три 35 мм x 10 мм NGM пластины с 80 мкл ночь выращиваемых культур E. coli ОР50. Инкубируйте эти пластины при 37 ° C для ~ 18 h.
  2. На следующий день, удалите пластины из jar свечи и позволяют пластины для охлаждения для RT для личинок мыть L4 10-15 минут, с помощью M9W от НГМ и NGM RNAi кормления пластин. Соберите червей в 15 мл конические трубы.
  3. Спин трубы на 450 x g за 1 мин Decant супернатант и добавляют 10 мл M9W.
  4. Повторите шаг 9.3 еще три раза.
  5. Ресуспензируйте червей в ~ 250 мкл M9W и место капель три 5 мкл червь подвески на крышку чистой Петри и оценить количество червей за мкл рассечения микроскопе.
  6. Добавьте личинки L4 ~ 100 каждый твой стрептококк семенами и NGM E. coli посеян пластин. Используйте три пластины на штамм бактерий. Инкубировать пластины для 2-3 ч при 25 ° C.
  7. После этого удалите пластины из инкубатора, вымыть их с M9W и собрать червей в 15 мл конические трубы.
  8. Моют червей 3 x, как описано в разделе шаги 9.3.
  9. Удалить большую часть M9W стремлением и 500 мкл M9W содержащий 2 мм натрия азид или 2 мм Тэтрамизол гидрохлорид червь Пелле. Это будет анестезировать червей, обеспечивая, что не движение происходит когда imaged под микроскопом.
    ОСТОРОЖНОСТЬЮ: Использование средств индивидуальной защиты (СИЗ), при обработке азид натрия. Приготовляют раствор азид под химические вытяжки.
  10. Инкубируйте червь окатышей в РТ за 15 мин. Затем место 15 мкл червь подвески на площадку подготовленных агарозы. Осторожно поместите № 1,5 coverslip агарозы pad, содержащие наркотизированных червей.
  11. С помощью флуоресцентного микроскопа, визуализируйте локализации СКН-1 используя FITC и DAPI фильтры. Глисты изображения на 10 x и 20 x увеличениях.
  12. Оценка червей, основанный на уровень локализации СКН-1. Нет ядерной локализации, локализация SKN-1B/C::GFP в передней или задней червя и ядерной локализации SKN-1B/C::GFP во всех клетках кишечника классифицируются как низкий, средний и высокий уровень локализации, соответственно.
  13. После забив флуоресцентной микроскопии, определите статистические различия Чи-квадрат и Фишер точные тесты с использованием статистического программного обеспечения.

Результаты

Члены mitis группы S. mitis, S. oralis и S. gordonii быстро убили червей, в отличие от Streptococcus mutans, S. salivarius и непатогенные E. coli ОР50 (рисA). Медиана выживаемости для S. mitis, S. oralis и S. gordonii составила 300 мин, 300 мин и 345 мин, соотв...

Обсуждение

Описанные методы могут использоваться для других патогенных бактерий, таких как Enterococcus faecium, который также производит H2O2 выращиваемой в анаэробных или микроаэрофильных условиях26. Как правило для самых патогенных организмов, она занимает несколько дней, н?...

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.

Благодарности

Мы благодарим Бинг-Ян Ванг, доктор гена Трибл (Техасский университет, Школа стоматологии), д-р Ричард Ламонт (Луисвиллский университет, Школа стоматологии) и д-р Самуил Shelburne (MD Anderson Cancer Center) для предоставления лабораторных и клинических штаммов mitis стрептококки группы. Мы также благодарим д-р Кит Blackwell (Кафедра генетики, Гарвардской медицинской школы) для штаммов C. elegans . Наконец мы благодарим д-р Даниэль Garsin и ее лаборатории (университета Техаса, Макговерн медицинская школа) за предоставление реагентов и червь штаммов для проведения исследования. Некоторые штаммы червя были предоставлены CGC, которая финансируется Управлением NIH инфраструктуры научно-исследовательских программ (P40 OD010440).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Media and chemicals
Agarose Sigma AldrichA9539-50G
Bacto peptone Fisher ScientificDF0118-17-0
BD Bacto Todd Hewitt BrothFisher ScientificDF0492-17-6
BD BBL Sheep Blood, Defibrinated  Fisher ScientificB11947
BD Difco Agar Fisher ScientificDF0145-17-0
BD Difco LB BrothFisher ScientificDF0446-17-3
Blood agar (TSA with Sheep Blood)Fisher ScientificR01200
Calcium ChlorideFisher ScientificBP510-500
CarbenicillinFisher ScientificBP26481
Catalase Sigma AldrichC1345-1G
CholesterolFisher ScientificICN10138201
IPTGFisher ScientificMP21021012
Magnesium sulfateFisher ScientificBP213-1
NystatinAcros organicsAC455500050
Potassium Phosphate DibasicFisher ScientificBP363-500
Potassium phosphate monobasicFisher ScientificBP362-500
Sodium AzideSigma AldrichS2002-25G
Sodium chloride Fisher ScientificBP358-1
Sodium HydroxideFisher ScientificSS266-1
8.25% Sodium Hypochlorite
Sodium Phosphate Dibasic Fisher ScientificBP332-500
Streptomycin Sulfate Fisher ScientificBP910-50
TetracyclinSigma Aldrich87128-25G
(−)-Tetramisole hydrochlorideSigma AldrichL9756
Yeast extractFisher ScientificBP1422-500 
Consumables 
15mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes Fisher Scientific12-565-269
Disposable Polystyrene Serological Pipettes 10mLFisher Scientific07-200-574
Disposable Polystyrene Serological Pipettes 25mLFisher Scientific07-200-575
Falcon Bacteriological Petri Dishes with Lid (35 x 10 mm)Fisher Scientific08-757-100A
No. 1.5  18 mm X 18 mm Cover SlipsFisher Scientific12-541A
Petri Dish with Clear Lid (60 x 15 mm)Fisher ScientificFB0875713A
Petri Dishes with Clear Lid (100X15mm)Fisher ScientificFB0875712
Plain Glass Microscope Slides (75 x 25 mm)Fisher Scientific12-544-4
Software 
PrismGraphpad
Bacterial Strains
S. oralis ATCC 35037
S. mitis ATCC 49456
S. gordonii DL1 Challis  
E. coli OP50
E. coli HT115
Worm Strains
StrainGenotypeTransgeneSource
N2C. elegans wild isolateCGC
EU1skn-1(zu67) IV/nT1 [unc-?(n754) let-?] (IV;V)CGC
LD002IdIs1SKN-1B/C::GFP + rol-6(su1006)Keith Blackwell

Ссылки

  1. Human Microbiome Project, C. Structure, function and diversity of the healthy human microbiome. Nature. 486 (7402), 207-214 (2012).
  2. Mitchell, J. Streptococcus mitis: walking the line between commensalism and pathogenesis. Molecular Oral Microbiology. 26 (2), 89-98 (2011).
  3. Dyson, C., Barnes, R. A., Harrison, G. A. Infective endocarditis: an epidemiological review of 128 episodes. Journal of Infection. 38 (2), 87-93 (1999).
  4. Sahasrabhojane, P., et al. Species-level assessment of the molecular basis of fluoroquinolone resistance among viridans group streptococci causing bacteraemia in cancer patients. International Journal of Antimicrobial Agents. 43 (6), 558-562 (2014).
  5. Shelburne, S. A., et al. Streptococcus mitis strains causing severe clinical disease in cancer patients. Emerging Infectious Diseases. 20 (5), 762-771 (2014).
  6. van der Meer, J. T., et al. Distribution, antibiotic susceptibility and tolerance of bacterial isolates in culture-positive cases of endocarditis in The Netherlands. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 10 (9), 728-734 (1991).
  7. Han, X. Y., Kamana, M., Rolston, K. V. Viridans streptococci isolated by culture from blood of cancer patients: clinical and microbiologic analysis of 50 cases. Journal of Clinical Microbiology. 44 (1), 160-165 (2006).
  8. Hoshino, T., Fujiwara, T., Kilian, M. Use of phylogenetic and phenotypic analyses to identify nonhemolytic streptococci isolated from bacteremic patients. Journal of Clinical Microbiology. 43 (12), 6073-6085 (2005).
  9. Kohno, K., et al. Infectious complications in patients receiving autologous CD34-selected hematopoietic stem cell transplantation for severe autoimmune diseases. Transplant Infectious Disease. 11 (4), 318-323 (2009).
  10. Zhu, L., Kreth, J. The role of hydrogen peroxide in environmental adaptation of oral microbial communities. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 717843 (2012).
  11. Okahashi, N., et al. Hydrogen peroxide contributes to the epithelial cell death induced by the oral mitis group of streptococci. PLoS One. 9 (1), 88136 (2014).
  12. Stinson, M. W., Alder, S., Kumar, S. Invasion and killing of human endothelial cells by viridans group streptococci. Infection and Immunity. 71 (5), 2365-2372 (2003).
  13. Rai, P., et al. Streptococcus pneumoniae secretes hydrogen peroxide leading to DNA damage and apoptosis in lung cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (26), 3421-3430 (2015).
  14. Braun, J. S., et al. Pneumococcal pneumolysin and H(2)O(2) mediate brain cell apoptosis during meningitis. Journal of Clinical Investigation. 109 (2), 19-27 (2002).
  15. Naji, A., et al. The activation of the oxidative stress response transcription factor SKN-1 in Caenorhabditis elegans by mitis group streptococci. PLoS One. 13 (8), 0202233 (2018).
  16. Bolm, M., Jansen, W. T., Schnabel, R., Chhatwal, G. S. Hydrogen peroxide-mediated killing of Caenorhabditis elegans: a common feature of different streptococcal species. Infection and Immunity. 72 (2), 1192-1194 (2004).
  17. Sifri, C. D., Begun, J., Ausubel, F. M. The worm has turned--microbial virulence modeled in Caenorhabditis elegans. Trends in Microbiology. 13 (3), 119-127 (2005).
  18. Irazoqui, J. E., Ausubel, F. M. 99th Dahlem conference on infection, inflammation and chronic inflammatory disorders: Caenorhabditis elegans as a model to study tissues involved in host immunity and microbial pathogenesis. Clinical & Experimental Immunology. 160 (1), 48-57 (2010).
  19. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship. Antioxidants & Redox Signaling. 13 (12), 1911-1953 (2010).
  20. Tissenbaum, H. A. Using C. elegans for aging research. Invertebrate Reproduction & Development. 59, 59-63 (2015).
  21. Blackwell, T. K., Steinbaugh, M. J., Hourihan, J. M., Ewald, C. Y., Isik, M. SKN-1/Nrf, stress responses, and aging in Caenorhabditis elegans. Free Radical Biology & Medicine. 88, 290-301 (2015).
  22. Irazoqui, J. E., Urbach, J. M., Ausubel, F. M. Evolution of host innate defence: insights from Caenorhabditis elegans and primitive invertebrates. Nature Reviews Immunology. 10 (1), 47-58 (2010).
  23. Park, S. K., Tedesco, P. M., Johnson, T. E. Oxidative stress and longevity in Caenorhabditis elegans as mediated by SKN-1. Aging Cell. 8 (3), 258-269 (2009).
  24. An, J. H., et al. Regulation of the Caenorhabditis elegans oxidative stress defense protein SKN-1 by glycogen synthase kinase-3. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (45), 16275-16280 (2005).
  25. An, J. H., Blackwell, T. K. SKN-1 links C. elegans mesendodermal specification to a conserved oxidative stress response. Genes & Development. 17 (15), 1882-1893 (2003).
  26. Moy, T. I., Mylonakis, E., Calderwood, S. B., Ausubel, F. M. Cytotoxicity of hydrogen peroxide produced by Enterococcus faecium. Infection and Immunity. 72 (8), 4512-4520 (2004).
  27. Pincus, Z., Mazer, T. C., Slack, F. J. Autofluorescence as a measure of senescence in C. elegans: look to red, not blue or green. Aging (Albany NY). 8 (5), 889-898 (2016).
  28. Teuscher, A. C., Ewald, C. Y. Overcoming Autofluorescence to Assess GFP Expression During Normal Physiology and Aging in Caenorhabditis elegans. Bio-protocol. 8 (14), (2018).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

145Caenorhabditis elegans1GFP

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены