산화 스트레스는 Mitis 그룹 Streptococci 꼬마 선 충 에 의해 발생 하는 공부

요약

선 충 류 꼬마 선 충 호스트 병원 체 상호 작용을 해 부에 우수한 모델입니다. 여기에 설명 된 멤버 mitis 그룹 streptococci와 웜 감염 유 기체의이 그룹에 의해 생산 H₂O₂ 에 대 한 산화 스트레스 반응의 활성화를 결정 하는 프로토콜이입니다.

초록

꼬마 선 충 (C. 선 충), 살아있는 선 충 류, 호스트 병원 체 상호 작용을 공부 하는 매력적인 모델로 떠오르고 있다. 제시 프로토콜이이 모델을 사용 하 여 H₂O₂의 생산을 통해 mitis 그룹 streptococci 기인한 pathogenicity 결정. Mitis 그룹 streptococci bacteremia, 심장 내 막 염, 궤도 봉와 직 염 등 많은 인간의 질병을 일으키는 원인이 되는 신흥 위협입니다. 여기에 설명 된 H₂O₂ 에 대 한 응답에이 벌레의 생존을 결정 하는 프로토콜에 의해 생산 병원 체의이 그룹. 산화 긴장 응답 녹음 방송 요인에 대 한 유전자 skn-1 인코딩을 사용 하 여,이 모델은 연쇄 구 균 감염에 대 한 필수적인 호스트 유전자를 식별 하는 데 중요 한 표시 됩니다. 또한, 유전자 변형 기자 웜 변형, SKN-1 녹색 형광 단백질 (GFP)를 융합은 사용 하 여이 병원 균의 존재 산화 스트레스 반응의 활성화를 모니터링할 수 있습니다 표시 됩니다. 이 분석 실험 것 반대로 생물 소스에 의해 파생 된 H₂O₂ 로 산화 스트레스 반응을 기회 반응성 산소 종 (선생님) 소스를 추가 제공 합니다.

서문

Mitis 그룹 streptococci oropharyngeal 구멍¹의 인간의 공생입니다. 그러나, 이러한 생물이이 틈새를 탈출 하 고 침략 적인 질병²의 다양 한을 발생할 수 있습니다. 이러한 미생물에의 한 감염 등 bacteremia, 심장 내 막 염, 궤도 cellulitis^2,,34,,56. 또한, 그들은 혈 류 감염의 원인으로 대리인은 신흥 시내 immunocompromised, neutropenic, 그리고 화학 요법^{5,,78,9 받은 암 환자} .

몇 가지 독성 요인 확인 되었습니다 있기 때문에 기본 mitis 그룹 병 인은 애매 한 메커니즘. Mitis 그룹은 H₂O₂, 구강 미생물 커뮤니티¹⁰에서 중요 한 역할을 보여줘 생산으로 알려져 있다. 최근 여러 연구 cytotoxin 상피 세포 죽음^11,12-유도로 H₂O₂ 에 대 한 역할을 강조 했습니다. S. 폐 렴, 이 그룹에 속하는 DNA 손상 및¹³치경 세포 있는 apoptosis를 유도 하는 H₂O₂ 의 높은 수준의 생산을 보였다. 급성 폐 렴 동물 모델을 사용 하 여, 동일한 연구원은 박테리아에 의해 H₂O₂ 의 생산 독성 우위를 수 여 한다 설명 했다. 폐 렴 균 성 수 막 염에 대 한 연구 또한 그 병원 체 파생 된 H₂O₂ 를 신경 세포 죽음¹⁴트리거 pneumolysin와 synergistically 역할 표시. 이 관측은 명확 하 게 박테리아의이 그룹에 의해 생산을 H₂O₂ 는 그들의 pathogenicity에 대 한 중요 한 설정 합니다.

흥미롭게도, 그것은 또한 보였다는 mitis의 회원 그룹 S. mitis 및 H₂O₂^15,16의 생산을 통해 선 충 C. 선 충 의 죽음의 원인이 S. oralis . 이 살아있는 선 충 류는 많은 생물 학적 과정을 공부 하 간단 하 고, 유전으로 온순한 모형으로 사용 되었습니다. 더 최근에, 웜은 호스트 병원 체 상호 작용^17,18연구 모델로 떠오르고 있다. 또한, 여러 연구 공부 하는이 유기 체^19,20,21을 사용 하 여 산화 스트레스의 중요성을 강조 했습니다. 그것의 짧은 라이프 사이클, RNAi에 의해 관심의 최저의 유전자 및 녹색 형광 단백질 (GFP)의 사용-융합된 기자 유전자 발현을 모니터링 하는 특성을 그것에 게 매력적인 모델 시스템의 일부. 더 중요 한 것은, 산화 스트레스와 벌레에 타고 난 면역 조절 경로 높은 포유류^20,22보존 됩니다.

이 프로토콜에서 그것는 연쇄 구 균 파생 된 H₂O₂로 인 한 pathogenicity 명료 하 C. 선 충 을 사용 하는 방법은 보여 줍니다. 수정 된 생존 분석 결과 표시 하 고 mitis 그룹의 구성원을 급속 하 게 벌레를 죽 일 수 있습니다 통해 H₂O₂의 생산. 반응 산소 종의 지속적인된 생물 소스 mitis 그룹의 구성원을 사용 하 여 (선생님) 제공, 벌레에 산화 스트레스를 유발 하는 화학 원본에 반대 합니다. 또한, 박테리아는 H₂O₂ (여러 방 벽을 교차 하 고 있는 다른 소스에 비해) 창 자 세포에 직접 타겟이 될 수 있는 벌레를 빠르게, 식민지 수 있습니다. 분석 결과 중 1)으로 skn-1 돌연변이 스트레인의 또는 2) skn-1 웜 N2 야생-타입 기준 및 벡터 제어 처리 벌레에 RNAi를 사용 하 여 아래로 노크 하 여 생존을 결정 하는 유효성이 검사 됩니다. SKN-1 C. 선 충^23,,2425의 산화 스트레스 반응을 조절 하는 중요 한 전사 요소입니다. 생존 분석, 뿐만 아니라 SKN-1B/C::GFP 유전자 변형 기자 표현 웜 변형 mitis 그룹은 산화 긴장 응답을 통해 H₂O₂ 의 생산의 활성화를 모니터링 하는 데 사용 됩니다.

프로토콜

1. 네 (토 드-휴이 트 효 모 추출 물) 한 천 배지 준비

1. 미디어의 1 L, 토 드-휴이 트 분말, 효 모 추출 물 및 2 L 삼각 플라스 크를 한 20 g 2 세대의 30 g 추가. 이온된 수의 970 mL 플라스 크의 내용에 추가 하 고 볶음 바 포함. 압력솥에서 121 ° C의 온도 압력 30 분 동안 15 파운드/인치² 의 미디어. 그 후, 저 어 접시에 미디어를 설정 하 고 부드러운 감동으로 냉각 허용.
2. 층 류 흐름에서 적절 한 크기의 멸 균 페 트리 디쉬 (성장 및 유지 보수의 박테리아를 죽이 분석 실험을 위한 35 m m x 10 m m 요리 요리 100 m m x 15 m m)에 미디어를 붓으십시오. 미디어 층 류 후드 2 h 동안 건조를 허용 합니다. 그 후, 1 개월 4 ° C에서 격판덮개를 저장할 수 있습니다.

2. 선 충 류 성장 매체 (NGM) 및 RNAi 먹이 접시 (NGM RNAi)의 준비

1. 저 막대를 사용 하 여 2.5 g 펩의 및 이온된 수 2 L 삼각 플라스 크에 970 mL에 NaCl의 3 세대 분해. 언론에의 한 천 20g을 추가 합니다. 압력솥에서 121 ° C의 온도 압력의 30 분의 15 파운드/인치² 미디어 저 어 접시에 미디어를 설정 하 고 부드러운 감동으로 냉각 허용.
2. NGM 접시의 준비에 대 한 미디어 다음 솔루션 추가: 1 M 칼륨 인산 염 버퍼의 25 mL (pH = 6.0), 1 M MgSO₄, 1m CaCl₂, (95% 에탄올에 5 mg/mL) 콜레스테롤의 1 mL의 1 mL의 1 mL (에탄올에 10 %v / w) nystatin의 1 mL 및 25 mg/mL 스의 1 mL.
3. NGM RNAi 먹이 접시의 준비에 대 한 미디어 다음 솔루션 추가: 1 M 칼륨 인산 염 버퍼의 25 mL (pH = 6.0), 1 M MgSO₄, 1m CaCl₂, (95% 에탄올에 5 mg/mL) 콜레스테롤의 1 mL의 1 mL의 1 mL (에탄올에 10 %v / w) nystatin의 1 mL, 50 mg/mL carbenicillin의 1 mL 및 IM IPTG의 1 mL.
4. 층 류에서 멸 균 페 트리 디쉬 60 m m x 15 m m으로 언론을 따르십시오. 미디어 층 류 후드 2 h 동안 건조를 허용 합니다. 그 후, 1 개월 4 ° C에서 접시를 저장할 수 있습니다.

3입니다. C. 선 충 의 유지 보수

1. 시드 하룻밤의 스포팅 50 µ L에 의해 NGM 접시는 접시의 중앙에 대장균 OP50 성장. 대장균 문화는 이전 Luria Bertani (파운드) 미디어에서 준비 하 고 몇 달 동안 4 ° C에서 저장. 번호판을 커버 하 고 층 류 후드 24 h 동안 건조 하 고 그 후 폴리스 티 렌 용기에 접시를 저장 하도록 허용.
2. 해 현미경 10 12 벗 성인 살 균 웜 선택을 사용 하 여 선택 하 고 벌레는 대장균 에 전송 OP50 시드 NGM 접시. 하룻밤 20 ° C에서 번호판을 품 어.
3. 다음 날, 살 균 웜 선택을 사용 하 여 성인을 제거 하 고 20 ° c (~2.5 일) L4 애벌레를 개발 하기 위해 배아를 허용.

4. 벌레의 동기 인구 나이의 준비

1. 2 M9W를 사용 하 여 4 개의 NGM 접시 벗 성인을 세척 하 고 15 mL 원뿔 튜브에 수집.
   1. M9W 준비: NaCl의 3 세대, 나₂HPO₄, 6 g 및 3g KH₂포₄ 의 결합 하 고 마지막 양의 이온을 제거 된 물 1 L에 용 해. 고압 솔루션 1 M MgSO₄의 1 mL을 추가.
2. 1 분, g 450 x 튜브를 회전 한 다음 웜 펠 릿 그대로 유지 하면서는 상쾌한 가만히 따르다.
3. 8.25% 염소 (가정용 표 백제)의 400 µ L 및 웜 세포 솔루션 준비 5 N NaOH의 100 µ L를 추가 합니다. 웜 펠 릿을 세포 솔루션을 추가 하 고 어른 벌레의 70%는 lysed 때까지 튜브를 터치 하 여 내용을 혼합. 정기적으로 계란의 아무 overbleaching는 되도록 해 현미경 튜브의 내용을 준수 합니다.
4. M9W의 10 mL 원뿔 튜브의 내용에 추가 하 여 표 백제 혼합 희석.
5. 450 x g 1 분 Decant 상쾌한에 튜브를 회전 다음 M9W의 10 mL를 추가 합니다.
6. 4.5 단계를 두 번 더 반복 합니다.
7. M9W의 3-5 mL에 결과 계란 펠 릿을 resuspend. 튜브 회전에 튜브를 놓습니다. 하룻밤 실 온 (RT)에서 18 rpm의 속도로 회전 하는 튜브를 허용 합니다.
8. 다음 날, 작은 L1 유 충을 1 분 동안 g 450 x 튜브를 회전 합니다. 포부, 관에 있는 액체의 ~ 250 µ L을 남겨두고 여 M9W의 대부분을 제거 합니다. L1 애벌레를 resuspend 하 고 3 5 µ L Petri 접시 뚜껑, 다음 견적 해 현미경을 사용 하 여 µ L 당 벌레의 수에 벌레의 서 스 펜 션의 상품.

5입니다. 벌레에 RNAi의 유도

1. 살 균을 사용 하 여 루프 또는, 100 m m x 15 m m 파운드 한 천 배지 50 µ g/mL carbenicillin 및 항생물질의 15 µ g/mL에 냉동된 주식 (Ahringer 및 비 달 라이브러리)에서 RNAi 포함 된 대장균 의 원하는 변종 밖으로 행진. 24 h에 대 한 37 ° C에서 번호판을 품 어.
2. 선택 하 고 원하는 RNAi 스트레인에서 고립 된 식민지 파운드 50 µ g/mL carbenicillin 보충의 2 개 mL를 포함 하는 살 균 15 mL 원뿔 관에 접종. 150 rpm에서 궤도 통에 16 h 37 ° C에서 튜브를 품 어.
3. 다음 날, 150 µ L 65 m m x 15 m m NGM RNAi 먹이 접시 살 균 분산기를 사용 하 여에 하룻밤 성장 문화 확산. 24 h에 대 한 37 ° C에서 번호판을 품 어.
4. 37 ° c.에 외피 후 rt 냉각 접시를 허용 ~ 200 L1 유 충 (벌레 단계의 동기 나이 인구에서 얻은) 대장균 에 포함 된 M9W의 적절 한 볼륨 시드 NGM RNAi 먹이 접시 추가 합니다. 애벌레 (~2.5 일) L4 단계에 도달할 때까지 20 ° C에서 접시를 품 어.

6. 감염 Mitis 그룹 Streptococci의 준비

1. 네 agar는 100 m m x 15 m m에 원하는 변종의 streptococci 밖으로 행진 (번호판 4 ° C에서 저장, 미리 따뜻한 37 ° C에 접시 각각 긴장을 질주 하기 전에), 다음 제공 하는 microaerophilic en 촛불 항아리에 37 ° C에서 하룻밤 (h ~ 18) 번호판을 품 어 (질주 된 접시는 4 ° C에서 1 주일 동안 저장할 수 있습니다) streptococci의 성장에 대 한 vironment.
2. 임상 분리 streptococci의 전파, tryptic 간장 혈액 한 천 사용 합니다. 37 ° C 하룻밤 촛불 항아리에 (h ~ 18)에서 번호판을 품 어.
3. 다음 날, 촛불 항아리에서 플레이트를 제거 하 고 메 마른 루프를 사용 하 여 고립 된 식민지를 선택 합니다. 네 국물의 2 개 mL를 포함 하는 15 mL 살 균 원뿔 관 예방 Streptococci의 임상 격리 된 것을 전파 하는 THY 보충 5 %v / v 양 혈액의 국물. 뚜껑 꽉 닫고 정적 조건에서 37 ° C에서 튜브를 품 어.

7. 생존 분석

참고: 이 분석 결과에 포함 된 단계는 그림 1에 묘사 된다. H₂O₂ 는 mitis에 의해 파생 된 입증 그룹은 벌레의 살인에 대 한 책임, 카 탈 라 제, 또는 돌연변이 스트레인 ΔspxB 미디어를 보충 하 고 보완 변형 ΔspxB; spxB + 미 gordonii 의 수 있습니다. 사용할 수 있습니다. SpxB는 mitis 그룹에서 H₂O₂ 의 생산에 대 한 책임은 pyruvate 산화 효소에 대 한 인코딩합니다.

1. 미리 따뜻하게 35 m m x 10 m m 37 ° c 그 대 접시 Streptococci의 원하는 긴장의 하룻밤 성장 문화의 80 µ L을 추가 하 고 완전히 살 균 분산기를 사용 하 여 한 천 표면에 걸쳐 박테리아를 확산. 37 ° C 하룻밤 촛불 항아리에 (h ~ 18)에서 번호판을 품 어. 컨트롤, 씨 두 35 m m x 10 m m NGM 접시 대장균 OP50의 하룻밤 성장 문화의 80 µ L로. 37 ° C에서 접시를 밤새 품 어.
2. H₂O₂ 는 mitis 그룹에 의해 생산 벌레의 살인에 대 한 책임은 확인, 추가 THY에 catalase c 1000 단위를 포함 하는 50 µ L 플레이트. 살 균 분산기를 사용 하 여 카 탈 라 제 솔루션을 확산 하 고 접시 30 분 씨 7.1 단계에서 설명한 대로 각각 연쇄 상 구 균 긴장으로 그 후 접시에 대 한 층 류에 건조를 허용.
3. 다음 날, 촛불 항아리에서 플레이트를 제거 하 고 메 마른 벌레를 사용 하 여 10-15 분에 대 한 rt 냉각 플레이트 선택, 전송 30 L4 애벌레 NGM 또는 NGM RNAi는 연쇄 상 구 균을 먹이 접시에서 시드 네 접시 허용. 사용 2 시드 연쇄 상 구 균의 변형 당 60 웜 총 네 접시. 25 ° c.에 번호판을 품 어
4. 해 현미경을 사용 하 여, 여러 timepoints 각 접시에 라이브 하 고 죽은 L4 애벌레의 수를 계산 합니다. 처음에, 죽은 벌레를 점수 또는 매 30 분을 산다. 그 후, 웜 급속 하 게 죽을 시작, 점수 그들 15 분 간격. 살 균 웜 선택을 사용 하 여 부드럽게 벌레를 자극 하 고 그들은 죽 었 거 나 살아 확인. 경우에 괴롭히는에 대 한 응답 운동 벌레 죽은 간주 됩니다.
5. 분석 결과 완료 5-6 시간 소요 됩니다. 실험 두 번 더 반복 합니다. 분석 결과의 완성 후 두 접시에서 데이터 풀. 각 그룹의 데이터를 입력, 생존 곡선을 비교 하 고 카 플 란-마이어 생존 분석 통계 소프트웨어를 사용 하 여 수행.

8입니다. 현미경 Agarose 패드의 준비

1. 전자 레인지에 솔루션을가 열 하 여 이온된 수에 agarose의 2 %w / v를 분해. 솔루션의 5 mL의 볼륨은 20 슬라이드를 준비 하는 충분 한.
2. 두 개의 유리 슬라이드를 따라 세로로 랩 테이프 스틱. 이 agarose 패드의 두께 결정 합니다. 두 개의 녹화 슬라이드 사이의 깨끗 한 유리 슬라이드를 놓습니다.
3. 깨끗 한 슬라이드의 중앙에 녹은 agarose의 장소 100 µ L. 즉시 다른 깨끗 한 유리는 녹은 agarose 위에 놓고 부드럽게 눌러 패드를 확인을 합니다. Agarose 고형화 하 고 이후 최고의 슬라이드를 제거를 허용 합니다. Agarose 패드 사용 하기 위해 준비가 되어있습니다.

9. SKN 1 지역화 연쇄 상 구 균 감염에 대 한 응답에서의 관찰

참고: 이 분석 결과에 포함 된 단계는 그림 2에 묘사 된다. SKN-1의 지역화 SKN-1B/C::GFP 유전자 변형 웜 변형 사용 하 여 결정 했다. 지역화 SKN-1의 H₂O₂ 는 mitis 그룹, 야생-타입의 생산으로 인해 (WT), ΔspxB, 및는 보완 스트레인 ΔspxB; spxB + 미 gordonii 의 사용 되었다. 또한, 유전자 변형 기자 스트레인 SKN-1B/C::GFP와 RNAi 간섭 기법 p38 MAPK 통로의 구성 요소 1 SKN의 지역화 규제를 설명 하기 위해 사용 되었다.

1. 미리 따뜻하게 35 m m x 10 m m 37 ° c 그 대 접시 연쇄 상 구 균의 원하는 긴장의 하룻밤 성장 문화의 80 µ L을 추가 하 고 완전히 살 균 분산기를 사용 하 여 한 천 표면에 걸쳐 박테리아를 확산. 37 ° C 하룻밤 촛불 항아리에 (h ~ 18)에서 번호판을 품 어. 컨트롤, 씨앗 3 35 m m x 10 m m NGM 접시 대장균 OP50의 하룻밤 성장 문화의 80 µ L로. 이 접시 ~ 18 h 37 ° C에서 품 어.
2. 다음 날, 촛불 항아리에서 접시를 제거 하 고 10-15 분 세척 L4 애벌레 NGM에서 M9W를 사용 하 여에 대 한 rt 냉각 플레이트 및 NGM RNAi 먹이 접시. 15 mL 원뿔 튜브에 벌레를 수집 합니다.
3. 450 x g 1 분 Decant는 상쾌한에 튜브를 회전을 M9W의 10 mL를 추가 합니다.
4. 9.3 단계 세 번 더 반복 합니다.
5. 깨끗 한 Petri 접시 뚜껑에 벌레의 서 스 펜 션의 M9W 및 장소 3 5 µ L 상품 ~ 250 µ L에서 벌레를 resuspend 고 해 현미경을 사용 하 여 µ L 당 벌레의 수를 예상.
6. 각 네 구 시드 및 시드 NGM 대장균 접시에 100 ~ L4 애벌레를 추가 합니다. 박테리아의 스트레인 당 세 접시를 사용 합니다. 2 ~ 3 h 25 ° c.에 대 한 번호판을 품 어
7. 그 후, 인큐베이터에서 플레이트를 제거 하 고 M9W로 그들을 씻어 15 mL 원뿔 튜브에 벌레를 수집.
8. 벌레 3 워시 x에 설명 된 대로 단계 9.3.
9. 포부로는 M9W의 대부분을 제거 하 고 웜 펠 릿에 M9W 포함 2 m m 나트륨 아 지 드 또는 2 mM tetramisole 염 산 염의 500 µ L를 추가 합니다. 이 벌레를 현미경 군데 발생 하는 운동 보장 anesthetize 것입니다.
   주의: 나트륨 아 지 드를 처리할 때 개인 보호 장비 (PPE)를 사용 합니다. 화학 후드 아 지 드 솔루션을 준비 합니다.
10. 15 분 동안 RT에서 웜 펠 릿을 품 어. 그런 다음 준비한 agarose 패드에 벌레의 서 스 펜 션의 15 µ L 자리. 부드럽게 마 취 벌레를 포함 하는 agarose 패드 번호 1.5 coverslip 장소.
11. 형광 현미경을 사용 하 여, SKN-1 이용 FITC와 DAPI 필터의 지역화 시각화. 이미지는 10 x 20 x 배율에서 벌레.
12. SKN-1의 지역화의 수준에 따라 벌레를 점수. 아니 핵 지역화, SKN-1B/C::GFP 앞쪽 또는 웜, 후부의 지역화 및 SKN-1B/C::GFP 모든 창 자 세포에서의 핵 지역화 낮음, 보통 및 높은 수준의 지역화로 각각 분류 됩니다.
13. 형광 현미경, 득점 후 chi-제곱 및 피셔의 정확한 시험 통계 소프트웨어를 사용 하 여 통계적 차이 확인 합니다.

결과

mitis의 회원 그룹 S. mitis, S. oralis, S. gordonii 빠르게 사망 S. mutans, S. salivarius, 및 비 병원 성 대장균 에 반대 벌레, OP50 (그림 3A). S. mitis, S. oralis, S. gordonii 메디아 생존이 이었다 300 분, 300 분, 345 분, 각각. 살인 H₂O₂에 의해 중재 된 경우를 확인 하려면 catalase 네 agar에...

토론

Enterococcus faecium, H₂O₂ 에서 혐 기성 성장 생산 등 다른 병원 성 세균에 대 한 설명 하는 메서드를 사용할 수 있습니다 microaerophilic²⁶조건 또는. 일반적으로, 대부분 병원 성 유기 체를 위한 그것은 걸립니다 몇 일 주 생존 분석 실험. 그러나, mitis 그룹의 구성원에 의해 H₂O₂ 의 강력한 생산으로 인해 이러한 분석 5-6 h 설명 된 조건 내에서 완료 될 ...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Media and chemicals
Agarose	Sigma Aldrich	A9539-50G
Bacto peptone	Fisher Scientific	DF0118-17-0
BD Bacto Todd Hewitt Broth	Fisher Scientific	DF0492-17-6
BD BBL Sheep Blood, Defibrinated	Fisher Scientific	B11947
BD Difco Agar	Fisher Scientific	DF0145-17-0
BD Difco LB Broth	Fisher Scientific	DF0446-17-3
Blood agar (TSA with Sheep Blood)	Fisher Scientific	R01200
Calcium Chloride	Fisher Scientific	BP510-500
Carbenicillin	Fisher Scientific	BP26481
Catalase	Sigma Aldrich	C1345-1G
Cholesterol	Fisher Scientific	ICN10138201
IPTG	Fisher Scientific	MP21021012
Magnesium sulfate	Fisher Scientific	BP213-1
Nystatin	Acros organics	AC455500050
Potassium Phosphate Dibasic	Fisher Scientific	BP363-500
Potassium phosphate monobasic	Fisher Scientific	BP362-500
Sodium Azide	Sigma Aldrich	S2002-25G
Sodium chloride	Fisher Scientific	BP358-1
Sodium Hydroxide	Fisher Scientific	SS266-1
8.25% Sodium Hypochlorite
Sodium Phosphate Dibasic	Fisher Scientific	BP332-500
Streptomycin Sulfate	Fisher Scientific	BP910-50
Tetracyclin	Sigma Aldrich	87128-25G
(−)-Tetramisole hydrochloride	Sigma Aldrich	L9756
Yeast extract	Fisher Scientific	BP1422-500
Consumables
15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes	Fisher Scientific	12-565-269
Disposable Polystyrene Serological Pipettes 10 mL	Fisher Scientific	07-200-574
Disposable Polystyrene Serological Pipettes 25 mL	Fisher Scientific	07-200-575
Falcon Bacteriological Petri Dishes with Lid (35 mm x 10 mm)	Fisher Scientific	08-757-100A
No. 1.5  18 mm x 18 mm Cover Slips	Fisher Scientific	12-541A
Petri Dish with Clear Lid (60 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875713A
Petri Dishes with Clear Lid (100 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875712
Plain Glass Microscope Slides (75 mm x 25 mm)	Fisher Scientific	12-544-4
Software
Prism	Graphpad
Bacterial Strains
S. oralis ATCC 35037
S. mitis ATCC 49456
S. gordonii DL1 Challis
E. coli OP50
E. coli HT115
Worm Strains
Strain	Genotype	Transgene	Source
N2	C. elegans wild isolate		CGC
EU1	skn-1(zu67) IV/nT1 [unc-?(n754) let-?] (IV;V)		CGC
LD002	IdIs1	SKN-1B/C::GFP + rol-6(su1006)	Keith Blackwell