АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол описывает создание опухолевой мыши модели для мониторинга прогрессирования опухоли и ангиогенеза в режиме реального времени двойной биолюминесценции изображений.

Аннотация

Ангиогенез, как решающий процесс прогрессирования опухоли, стал горячей точкой исследования и мишенью противоопухолевой терапии. Однако, нет надежной модели для отслеживания прогрессирования опухоли и ангиогенеза одновременно в визуальной и чувствительной манере. Биолюминесценция изображения отображает свое уникальное превосходство в живой визуализации из-за его преимущества высокой чувствительности, сильная специфичность, и точные измерения. Представлено здесь протокол для создания опухолевых мыши модели путем введения Renilla luciferase помечены морин рака молочной железы линии 4T1 в трансгенной мыши с ангиогенезом индуцированной светлячок выражение. Эта модель мыши обеспечивает ценный инструмент для одновременного мониторинга прогрессирования опухоли и ангиогенеза в режиме реального времени путем двойной биолюминесценции изображения в одной мыши. Эта модель может быть широко применена в скрининге противоопухолевого препарата и онкологических исследованиях.

Введение

Ангиогенез является важным процессом в прогрессировании рака от небольших, локализованных неоплазм ы на большие, потенциально метастатические опухоли1,2. Корреляция между ростом опухоли и ангиогенезом становится одной из точек внимания в области онкологических исследований. Однако традиционные методы измерения морфологических изменений не контролируют прогрессирование опухоли и ангиогенез одновременно у живых животных с помощью визуализированного подхода.

Биолюминесценция (BLI) опухолевых клеток является особенно подходящим экспериментальным методом для мониторинга роста опухоли из-за его неинвазивности, чувствительности и специфичности3,4,5,6 . Технология BLI основана на принципе, что люцифераза может катализировать окисление конкретного субстрата при испускании биолюминесценции. Люцифераза, выраженная в имплантированных опухолевых клетках, реагирует с инъекционным субстратом, который может быть обнаружен живой системой визуализации, и сигналы косвенно отражают изменения в количестве клеток или локализации клеток in vivo6,7.

За исключением роста опухоли, опухолевый ангиогенез (критический шаг в прогрессии рака) также может быть визуализирована с помощью технологии BLI с использованием Vegfr2-Fluc-KI трансгенных мышей8,9,10. Сосудистый эндотелиальный фактор роста (Vegf) рецептор 2 (Vegfr2), один тип рецептора Vegf, в основном выражается в сосудистых эндотелиальных клетках взрослых мышей11. В Vegfr2-Fluc-KI трансгенных мышей, последовательность ДНК светлячок (Fluc) постучал в первый экзон эндогенной последовательности Vegfr2. В результате, Fluc выражается (который появляется как сигналы BLI) таким образом, что идентична уровню ангиогенеза у мышей. Чтобы вырасти за несколько миллиметров в размерах, опухоль набирает новые сосуды из существующих кровеносных сосудов, которые высоко выражают Vegfr2 вызвано факторами роста из опухолевых клеток1. Это открывает возможность использования Vegfr2-Fluc-KI трансгенных мышей неинвазивно контролировать ангиогенез опухоли BLI.

В этом протоколе, опухолевые мыши модель установлена для мониторинга прогрессирования опухоли и ангиогенеза в одной мыши через Светлячок люциферазы (Fluc) и Ренилья luciferase (Rluc) изображений, соответственно (Рисунок 1). 4T1 клеточной линии (4T1-RR) создается, что стационарно выражает Rluc и красный флуоресцентный белок (RFP) для отслеживания роста клеток Rluc изображений. Для дальнейшего изучения динамических изменений ангиогенеза в прогрессии и регрессии опухоли, другой 4T1 клеточной линии (4T1-RRT) создается, что выражает самоубийство гена простого герпеса вирус усеченный тимидин киназы (HSV-ttk), Rluc, и RFP. При администрации ганцикловира (GCV), HSV-ttk выражающие клетки избирательно абляции. На основе этих клеточных линий построена модель опухолевых мышей Vegfr2-Fluc-KI, которая служит экспериментальной моделью, преодолевая прогрессирование опухоли и опухолевой ангиогенез in vivo.

протокол

Эксперименты должны соответствовать национальным и институциональным нормам, касающимся использования животных в исследовательских целях. Разрешения на проведение экспериментов должны быть получены. Обработка животных и экспериментальные процедуры исследования придерживаются Руководящих принципов Комитета по уходу и использованию животных Университета Нанкай, которые соответствуют Руководящим принципам по уходу за животными, утвержденным Национальными институтами здравоохранения (NIH).

1. LV-Rluc-RFP (RR) и LV-Rluc-RFP-HSV-ttk (RRT) лентивирусная упаковка и производство

ПРИМЕЧАНИЕ: PLV-RR несет генные последовательности Renilla luciferase (Rluc) и красного флуоресцентного белка (RFP) под промоутер EF1, в то время как pLV-RRT несет генные последовательности кодирования Rluc, RFP, и вирус простого герпеса усеченный тимидин киназы (HSV-ttk) ( Рисунок 2).

  1. Семена 1 х 106 из 293T клеток на хорошо в 6 хорошо пластины и культуры на ночь в увлажненный инкубатор с 5% CO2 при 37 КС с Dulbecco в модифицированных орла среды (DMEM), содержащий 10% плода сыворотки крупного рогатого скота (FBS).
  2. Подготовьте липосомную суспензию: смешайте 7,5 л липосомы и 0,25 мл минимальной основной среды (MEM) в трубку 1,5 мл после инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре (RT) для равномерного разгона липосом.
  3. Подготовьте раствор DNAs (DNAs-RR): отдельно, добавьте вектор pLV-RR и хелсерплазмы до 0,25 мл MEM в трубке 1,5 мл, как описано в таблице 1.
  4. Получить липосомы / DNAs-RR соединения: осторожно добавить DNAs-RR раствор в подготовленные липосомы суспензии падение за падением и инкубировать в течение 20 минут на RT так ДНК связей с липидной мембраны.
  5. Замените среду 293T-клеток 1 мл DMEM, содержащего 10% FBS, и аккуратно добавьте соединение липосомы/ДНК-RR к среде 293T-клеток.
  6. После инкубации в увлажненном инкубаторе с 5% CO2 при 37 градусах по Цельсию на 12-16 ч замените соединение липосомы/ДНК-Р, содержащее среду 293T-клеток, 1 мл DMEM, содержащий 10% FBS и 100 U/mL пенициллин-стрептомицин.
  7. Продолжить культивирование 293T клеток в увлажненный инкубатор в течение 48 ч после трансфекции. Затем соберите супернатант из 293T клеток и центрифуги среды на 300 х г в течение 5 минут, чтобы гранулы 293T клеток. Перенесите лентивирусно-RR (LV-RR)-содержащий супернатант в стерильные полипропиленовые трубки и храните при -80 градусов по Цельсию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для работы с рекомбинантным лецивирусом требуется объект уровня биобезопасности 2 (BSL-2).
  8. Повторите шаги 1.1-1.7 и используйте вектор pLV-RRT вместо вектора pLV-RR в шаге 1.3 для получения лентивирусного-РРТ (LV-RRT). Храните LV-RRT при -80 градусах По Цельсию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Неочищенный лентивирусный запас может препятствовать росту клеток в некоторых случаях. Лентивирусный запас, возможно, потребуется очистить. Лентивирусные запасы, содержащие частицы LV-RR или LV-RRT, следует разделить на 1,5 мл труб (1 мл на трубку) для хранения, чтобы избежать нескольких циклов свободной оттепели.

2. LV-RR и LV-RRT лентивирусная трансдукция для экспрессии генов в клетках 4T1

  1. Семена 4T1 клетки в 6-колодец пластины (5 х 105 клеток / хорошо) и культуры с Розуэлл Парк Мемориальный институт (RPMI) 1640 среды, содержащей 10% FBS ночь в увлажненный инкубатор с 5% CO2 при 37 градусов по Цельсию.
  2. Удалите носитель с культурной тарелки и замените ее 1 мл свежей RPMI 1640 среды, а также 1 мл лентивирного запаса (LV-RR или LV-RRT) для каждой скважины. Добавьте 8 мкг/мл полибрена и аккуратно смешайте среду, содержащую лецивиральные частицы, трубачавверхвверхие вверх и вниз.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Пожалуйста, имейте в виду, что среда содержит лентивирусные частицы, которые могут преобразовывать клетки человека.
  3. Раствор трансдукции спина в центрифуге на 1000 г в течение 60 мин на RT, чтобы помочь повысить эффективность трансдукции. После центрифугации, культура 4T1 клеток для 4-12 ч и поддерживать в увлажненный инкубатор с 5% CO2 при 37 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для некоторых клеточных линий, полибрен может быть токсичным для долгосрочной культуры. Таким образом, время инкубации для преобразовывания различных клеток может быть изменяемым. Проверьте состояние ячейки несколько раз, чтобы найти подходящее время инкубации.
  4. Освежите среду трансиндуцированных 4T1 клеток с 2 мл RPMI 1640 среды, содержащей 10% FBS и 100 U/mL пенициллин-стрептомицин для удаления лентивирусных частиц и полибрена.

3. Скрининг на наркотики и идентификация лВ-RR и LV-RRT трансиндуцированных 4T1 клеток

  1. Выберите трансиндуцированные клетки со средой, содержащей бласцидин (BSD) в соответствии с геном BSD-резистентности, переносимым LV-RR или LV-RRT в качестве следующих описанных шагов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Кроме того, транс-индуцированных клеток, которые RFP-положительные могут быть выбраны поток цитометрии в соответствии с геном RFP осуществляется LV-RR или LV-RRT.
  2. 48 ч после трансдукции, прохождение 4Т1 ячеек в соотношении 1:3 к 1:4 со средой отбора (RPMI 1640 среда, содержащая 10% FBS, 100 U/mL пенициллин-стрептомицин, и 5 мкг/мЛ BSD). Изменение среды каждые 2 или 3 дня.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Оптимальная концентрация BSD может варьироваться от клеточной линии к линии клеток. Поэтому, экспериментальный эксперимент кривой убийства должен быть выполнен, чтобы определить оптимальную концентрацию BSD до первоначального эксперимента.
  3. 7 дней после медикаментозного скрининга, наблюдать LV-RR трансиндуцированных 4T1 клеток (4T1-RR) и LV-RRT трансиндуцированных 4T1 клеток (4T1-RRT) под флуоресценцией перевернутый фазово-контрастный микроскоп. Подсчитайте количество ячеек RFP 4T1 и все 4T1 ячейки в трех полях зрения, чтобы оценить соотношение RFP-положительное, соответственно (рисунок2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве альтернативы, RFP-положительное соотношение трансиндуцированных 4T1 клеток может быть определена цитометрии потока.
  4. Измерьте сигналы рениллы 4T1-RR-клеток и 4T1-RRT клеток с помощью живой системы визуализации для обнаружения линейной связи между числами клеток и сигналами рениллы (Рисунок 3).
  5. Расширьте BSD-экранированные 4T1-RR и 4T1-RRT-клетки со средой отбора при разделенных соотношений между 1:3 и 1:4 и храните запасы клеточной линии в жидком азоте.

4. Vegfr2-Fluc-KI мышей и опухолевых мыши модели

ПРИМЕЧАНИЕ: Трансгенные vegfr2-Fluc-KI мышей, 6-8 недель и женщины, используются в этом эксперименте для неинвазивного мониторинга ангиогенеза in vivo по BLI.

  1. Культура 4T1-RR-клеток и 4T1-RRT клеток в 60 мм Петри блюда в увлажненный инкубатор с 5% CO2 при 37 градусов по Цельсию, соответственно. Когда клетки находятся на 80% слияния, удалить среду и промыть фосфатами буферного соливого раствора (PBS).
  2. Удалить PBS и добавить дополнительные 2 мл 0,25% трипсин-0,53 мм EDTA решение соответственно. Держите блюдо на RT (или при 37 градусах Цельсия) до тех пор, пока клетки не отсоединят.
  3. Добавьте 5-10 мл свежей среды, содержащей 10% FBS, затем аспирировать и распределить клетки, чтобы переприимлять 4T1-RR и 4T1-RRT клетки в 15 мл центрифуговых труб, соответственно. Подсчитайте два типа 4Т1 ячеек с помощью счетной камеры и подготовьте суспензии клеток в концентрации 1 х 106 на 100 л в среде RPMI 1640.
  4. Анестезия Vegfr2-Fluc-KI мышей с 1%-3% изофлуран в 100% кислорода в наркозной индукционной камере с скоростью потока 1 л / мин. Монитор до щепотки ответ мыши, чтобы подтвердить состояние анестезии. Затем нанесите офтальмологическую мазь на глаза мыши, чтобы предотвратить обезвоживание.
  5. Удалите мышь из камеры и положение в nosecone. Полностью удалить волосы плеча мыши с помощью электрической бритвы и крем для удаления волос, которые могли бы обеспечить хороший вид хирургического поля и избежать блокирования сигналов BLI в последующих экспериментах.
  6. Подкожно вводят 4T1-RR-клетки (1 х 106 клеток при общем объеме 100 л) и 4T1-RRT-клетки (1 х 106 ячеек при общем объеме 100 л) в левом и правом плечах каждой мыши, соответственно (запись как День 0). Поместите мышей в зону восстановления с тепловой поддержкой до полного выздоровления.
  7. После имплантации 4T1-RR и 4T1-RRT клеток, коснуться опухолевых масс, чтобы проверить, что мыши опухоли подшипников каждый день(Рисунок S1). На 7-й день после имплантации интраперитонез вводят 50 мг/кг ганцикловир (ГКВ) опухолевым мышам два раза в день до окончания эксперимента.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перед этим экспериментом следует обнаружить цитотоксический ГКВ на 4T1-RRT-клетках. Эффективность убийства GCV может быть оценена по подсчету клеток с разной концентрацией GCV(Рисунок S2).
  8. В день 0, 3, 7, 14 и 21 после имплантации 4T1, контролировать рост опухоли и ангиогенез опухолевых мышей и оценить как Rluc и Fluc изображений (Рисунок 4).

5. Двойная биолюминесценция опухоли (Rluc) и ангиогенеза (Fluc)

  1. Откройте живую систему визуализации, инициализуя программное обеспечение для живой визуализации, а затем инициализировать систему.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Инициализация системы займет несколько минут, чтобы охладить заряд-связанных устройств (CCD) камеры до -90 градусов по Цельсию, прежде чем в состоянии начать изображения. Температура позеленеет, когда камера CCD охладится.
  2. Используйте следующие настройки камеры:
    Проверьте Люминесценцию и фотографию.
    Проверьте Оверлай.
    Настройки люминесценции:
    Время экспозиции устанавливает AUTO в нормальных условиях.
    Binning наборы до 8.
    F/Stop устанавливает до 1.
    Фильтр выбросов устанавливает открыть.
    Настройки фотографии:
    Binning наборы к среднему.
    F/Stop устанавливает до 8.
    Настройки системы IVIS:
    Поле зрения: вид мыши C-1, вид мышей Дз5.
    Высота объекта устанавливается 1,5 см.
  3. Взвешивать и записывать мышей и рассчитать объем коэлэнтеразин (КТЗ; 2,5 мг/кг) и D-люциферина (150 мг/кг) необходимо.
  4. Анестезия опухолевых мышей на 1%-3% изофлуран в 100% кислорода в наркозовой индукционной камере с скоростью потока 1 л/ мин. Мониторинг ног щепотку ответ мыши, чтобы подтвердить состояние анестезии. Затем, обойтись каплю смазки глаз мазь на оба глаза, чтобы избежать повреждения роговицы.
  5. Введите 2,5 мг КТЗ (3,33 мг/мл) на килограмм массы тела в ретробульбар мыши (например, для мыши 20 г, вводят 15 мкг КТЗ с помощью инсулиновой шприцевой иглы.
  6. Перемещение опухолевых мыши в камеру с носом в конусе анестезии мягко и приобрести несколько фотографий мыши дозасразу, чтобы получить сигналы Rluc от 4T1 клеток до BLI сигналы исчезают.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Период полураспада КТЗ очень короткий, и сигналы Rluc падение стремительно 30 с. Для обеспечения того, чтобы любой остаточный сигнал Rluc рассеялся и интервал между Rluc и Fluc изображения должно быть более 10 мин.
  7. Интраперитонеально вводят 150 мг/кг D-люциферина (30 мг/мл) с использованием иглы инсулинового шприца (например, для 20 г мыши, вводят 100 л, чтобы доставить 3 мг D-люциферина). Держите мышь на RT в течение 10 минут до изображения Fluc.
  8. Перемещение этой мыши в камеру камеры с носом в конус анестезии снова и приобрести несколько фотографий мыши дорсаль, чтобы получить сигналы Fluc от ангиогенеза.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Кинетический монитор Fluc должен быть выполнен для каждой мыши, пока сигналы не достигнут максимума, а затем исчезают.
  9. Повторите шаги процедуры 5.4-5.8 для каждой мыши.
  10. После визуализации, поддерживать мышей в теплой среде, пока животные не проснуться.
  11. В нужную точку времени (день 3, 7, 14 и 21), повторите выше процедур (шаг 5.3-5.10) для обнаружения прогрессирования опухоли и опухолевого ангиогенеза с течением времени.
  12. Проанализируйте Rluc и Fluc сигналы данных для изучения взаимосвязи между ростом опухоли и ангиогенез в прогрессии опухоли.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Регионы, представляющие интерес (ROI), которые охватывают сайт сигнала BLI, используются для анализа данных. Измерьте общее сияние (фотон) рентабельности инвестиций в единицу фотонов/секунд/см 2 /см2/см 2/sr) для каждой временной точки.
  13. Проанализируйте rluc и Fluc сигналы окупаемого удовобимых с помощью графического программного обеспечения(рисунок 4).

Результаты

В этом эксперименте, модель мыши рака молочной железы была создана с использованием 4T1 клеток для исследования взаимосвязи между ростом опухоли и ангиогенеза опухоли (Рисунок 1). Во-первых, были упакованы два лентивируса, которые перевозили генные посл?...

Обсуждение

В этом протоколе описан неинвазивный двойной blI подход для мониторинга развития опухоли и ангиогенеза. Система репортеров BLI впервые разработана, содержащая ген самоубийцы HSV-ttk/GCV для отслеживания прогрессирования опухоли и регрессии in vivo с помощью rluc imaging. Между тем, опухолевый ангиоге...

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальной программой исследований и разработок Китая (2017YFA0103200), Национальным фондом естественных наук Китая (81671734) и ключевыми проектами программы научно-технической поддержки Тяньцзиня (18YF-CSY00010), Фондам фундаментальных исследований для Центральные университеты (63191155). Мы признаем изменения Глории Нэнс, которые были полезны для улучшения качества нашей рукописи.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.25% Trypsin-0.53 mM EDTAGibco25200072
1.5 mL TubesAxygen ScientificMCT-105-C-S
15 mL TubesCorning Glass Works601052-50
293TATCCCRL-3216
4T1ATCCCRL-2539
60 mm DishCorning Glass Works430166
6-well PlateCorning Glass Works3516
Biosafety CabinetShanghai Lishen ScientificHfsafe-900LC
Blasticidine S Hydrochloride (BSD)Sigma-Aldrich15205
Cell Counting Kit-8MedChem ExpressHY-K0301
CO2 Tegulated IncubatorThermo Fisher Scientific4111
Coelenterazine (CTZ)NanoLight Technology479474
D-luciferin Potassium SaltCaliper Life Sciences119222
DMEM MediumGibcoC11995500BT
Fetal Bovine Serum (FBS)BIOIND04-001-1A
Fluorescence MicroscopeNikonTi-E/U/S
Ganciclovir (GCV)Sigma-AldrichY0001129
Graphics SoftwareGraphPad SoftwareGraphpad Prism 6
Insulin Syringe NeedlesBecton Dickinson328421
IsofluraneBaxter691477H
Lentiviral Packaging SystemBiosettiacDNA-pLV03
LiposomeInvitrogen11668019
Living Imaging SoftwareCaliper Life SciencesLiving Imaging Software 4.2
Living Imaging SystemCaliper Life SciencesIVIS Lumina II
MEM MediumInvitrogen31985-070
Penicillin-StreptomycinInvitrogen15140122
Phosphate Buffered Saline (PBS)Corning Glass WorksR21031399
PolybreneSigma-AldrichH9268-1G
RPMI1640 MediumGibcoC11875500BT
SORVALL ST 16R CentrifugeThermo Fisher ScientificThermo Sorvall ST 16 ST16R
Ultra-low Temperature RefrigeratorHaierDW-86L338
XGI-8 Gas Anesthesia SystemXENOGEN Corporation7293

Ссылки

  1. Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. The New England Journal of Medicine. 285, 1182-1186 (1971).
  2. Kerbel, R. S. Tumor angiogenesis. The New England Journal of Medicine. 358, 2039-2049 (2008).
  3. Hosseinkhani, S. Molecular enigma of multicolor bioluminescence of firefly luciferase. Cellular and Molecular Life Sciences. 68, 1167-1182 (2011).
  4. Nakatsu, T., et al. Structural basis for the spectral difference in luciferase bioluminescence. Nature. 440, 372-376 (2006).
  5. McMillin, D. W., et al. Tumor cell-specific bioluminescence platform to identify stroma-induced changes to anticancer drug activity. Nature Medicine. 16, 483-489 (2010).
  6. Madero-Visbal, R. A., Hernandez, I. C., Myers, J. N., Baker, C. H., Shellenberger, T. D. In situ bioluminescent imaging of xenograft progression in an orthotopic mouse model of HNSCC. Journal of Clinical Oncology. 26, 17006 (2008).
  7. Wang, R., et al. Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis and Therapeutic Effects with Dual Bioluminescence. Current Pharmaceutical Biotechnology. 18, 422-428 (2017).
  8. Rivera, L. B., Cancer Bergers, G. Tumor angiogenesis, from foe to friend. Science. 349, 694-695 (2015).
  9. Zhang, K., et al. Enhanced therapeutic effects of mesenchymal stem cell-derived exosomes with an injectable hydrogel for hindlimb ischemia treatment. ACS Applied Materials & Interfaces. 10, 30081-30091 (2018).
  10. Du, W., et al. Enhanced proangiogenic potential of mesenchymal stem cell-derived exosomes stimulated by a nitric oxide releasing polymer. Biomaterials. , 70-81 (2017).
  11. Lee, S., et al. Autocrine VEGF signaling is required for vascular homeostasis. Cell. 130, 691-703 (2007).
  12. Dewhirst, M. W., Cao, Y., Moeller, B. Cycling hypoxia and free radicals regulate angiogenesis and radiotherapy response. Nature Reviews. Cancer. 8, 425-437 (2008).
  13. Wigerup, C., Pahlman, S., Bexell, D. Therapeutic targeting of hypoxia and hypoxia-inducible factors in cancer. Pharmacology & Therapeutics. 164, 152-169 (2016).
  14. Wong, P. P., et al. Dual-action combination therapy enhances angiogenesis while reducing tumor growth and spread. Cancer Cell. 27, 123-137 (2015).
  15. Mezzanotte, L., van 't Root, M., Karatas, H., Goun, E. A., Lowik, C. In vivo Molecular Bioluminescence Imaging: New Tools and Applications. Trends in Biotechnology. 35, 640-652 (2017).
  16. Du, W., Tao, H., Zhao, S., He, Z. X., Li, Z. Translational applications of molecular imaging in cardiovascular disease and stem cell therapy. Biochimie. 116, 43-51 (2015).
  17. Liu, J., et al. Synthesis, biodistribution, and imaging of PEGylated-acetylated polyamidoamine dendrimers. Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 14, 3305-3312 (2014).
  18. Branchini, B. R., et al. Red-emitting chimeric firefly luciferase for in vivo imaging in low ATP cellular environments. Analytical Biochemistry. 534, 36-39 (2017).
  19. McLatchie, A. P., et al. Highly sensitive in vivo imaging of Trypanosoma brucei expressing "red-shifted" luciferase. PLoS Neglected Tropical Diseases. 7, e2571 (2013).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

150HSV ttk

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены