JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Куркумин является идеальным фторфором для маркировки и визуализации амилоидных бета-белков ытец в ткани мозга из-за его преференциальной связывания с амилоидным бета-протеином, а также его структурных сходств с другими традиционными амилоидными связывающими красителями. Он может быть использован для обозначения и изображения амилоидных бета-белковых бляшек более эффективно и недорого, чем традиционные методы.

Аннотация

Осаждение амилоидного бета-белка (АЗ) во вне- и внутриклеточном пространствах является одной из отличительных патологий болезни Альцгеймера (АД). Таким образом, обнаружение присутствия АЗ в тканях мозга АД является ценным инструментом для разработки новых методов лечения для предотвращения прогрессирования АД. Несколько классических амилоидных связывающих красителей, фторхром, визуальные зонды, и АЗ-специфических антител были использованы для обнаружения АЗ гистохимически в тканях мозга АД. Использование этих соединений для обнаружения АЗ является дорогостоящим и трудоемким. Тем не менее, из-за своей интенсивной флуоресцентной активности, высокой сродство, и специфичность для АЗ, а также структурные сходства с традиционными амилоидных связывающих красителей, куркумин (Cur) является перспективным кандидатом для маркировки и изображения бляшек АЗ в посмертном ткани мозга. Это натуральный полифенол из травы Curcuma longa. В настоящем исследовании, Cur был использован для гистохимически этикетки АЗ бляшки от как генетической мыши модели 5x семейной болезни Альцгеймера (5xFAD) и из человеческой ткани АД в течение минуты. Способность маркировки Cur была сравнена с обычными амилоидных связывающих красителей, таких как тиофлавин-S (Thio-S), Конго красный (CR), и Fluoro-нефрит C (FJC), а также АЗ-специфические антитела (6E10 и A11). Мы заметили, что Cur является самым недорогим и быстрым способом маркировки и изображения бляшек АЗ по сравнению с этими обычными красителей и сравнима с АЗ-специфических антител. Кроме того, Кур связывается с большинством видов АЗ, такими как олигомеры и фибриллы. Таким образом, Cur может быть использован в качестве наиболее экономичный, простой и быстрый флюорохром обнаружения агента для АЗ бляшек.

Введение

Болезнь Альцгеймера (AD) является одним из наиболее распространенных, возрастных, прогрессирующих неврологических расстройств и одной из ведущих причин смерти во всем мире1,2. Обучение, память, и познания нарушения, наряду с нейропсихиатрическими расстройствами, являются общими симптомами проявляется вaD 3. Хотя этиология АД не была полностью выяснена, имеющиеся генетические, биохимические и экспериментальные данные свидетельствуют о том, что постепенное осаждение АЗ является окончательным биомаркером для АД4. Этот неправильно сложенный белок накапливается во внутриклеточных и внеклеточных пространствах и, как полагают, участвует в синаптической потере, повышенной нейровостригматии и нейродегенерации в корковых и гиппокампальных областях в мозге, пораженномАД 5. Таким образом, гистохимическое обнаружение АЗ в тканях АД является важным первым шагом в разработке нетоксичных, антиамилоидных препаратов для предотвращения прогрессирования АД.

В течение последних нескольких десятилетий, несколько красителей и антител были использованы во многих исследовательских лабораториях для обозначения и изображения АЗ бляшки в тканях мозга, но некоторые из этих методов являются трудоемкими и красители или антитела, используемые являются дорогостоящими, требуя несколько аксессуаров Химических веществ. Таким образом, разработка недорогих средств обнаружения бляшек АЗ в мозге АД было бы новым желанным инструментом. Многие лаборатории начали использовать Cur, перспективный антиамилоидный природный полифенол, для маркировки и визуализации АЗ, а также терапевтический агент дляAD 6,7,8,9. Его гидрофобность и липофильная природа, структурное сходство с классическими амилоидными связывающими красителями, сильная флуоресцентная активность, а также сильное сродство к связыванию с АЗ делает его идеальным флюорофором для маркировки и визуализации бляшек АЗ в ткани АД10 . Кур связывается с АЗ-бляшками и олигомерами, и его присутствие также обнаруживается во внутриклеточных пространствах7,11,12,13. Кроме того, было показано, что минимальное количество (1-10 нм) кур может пометить АЗ в 5x семейной болезни Альцгеймера (5xFAD) ткани мозга7. Несмотря на то, что концентрация 1 нМ не обеспечивает оптимальную интенсивность флуоресценции для подсчета бляшек АЗ, 10 нм или более высокая концентрация Кур делает. Ран и его коллеги14 сообщили, что дозы, как низко как 0,2 нМ дифторорона-дериватизированных Кур может обнаружить в виво АЗ отложений почти так же хорошо, как инфракрасный зонд. Достаточно ли этой дозы для обозначения бляшек АЗ в тканях, до сих пор не ясно. Большинство предыдущих исследований использовали 20-30 минут для окрашивания бляшек АЗ с использованием Cur, но оптимальное окрашивание может потребовать гораздо меньше времени.

Настоящее исследование было разработано, чтобы проверить минимальное время, требуемое Cur для обозначения БЛяшек АЗ в тканях мозга АД и сравнить чувствительность для маркировки и визуализации бляшек АЗ в тканях головного мозга от мышей 5xFAD после окрашивания с Cur с другими обычными Аз-связывающие красители, такие как Тиофлавин-С (Тио-С), Конго красный (CR) и Фтор-нефрит C (FJC). Способность маркировки этих классических амилоидных связывающих красителей была сравнена с куром, встроенными в парафина и криостатными коронарными мозгами от мышей 5xFAD и из выдержанных человеческих АД и контроля мозговой ткани. Полученные результаты свидетельствуют о том, что Cur этикетки АЗ бляшки таким образом, похожие на АЗ-специфических антител (6E10) и умеренно лучше, чем Тио-S, CR, или FJC. Кроме того, когда интраперитонеальные инъекции мышей Cur к 5xFAD вводили в течение 2-5 дней, он пересек гематоэнцефалический барьер и связан с бляшками7. Интересно, что наномолярные концентрации Cur были использованы для обозначения и изображения бляшек АЗ в 5xFAD ткани мозга7,14. Кроме того, морфологически различные БЛяшки АЗ, такие как основные, неуритемые, диффузные и сгоревшие бляшки могут быть помечены Cur более эффективно, чем с любым из других обычных амилоидных связывающих красителей7. В целом, Cur может быть применен к этикетке и изображению бляшек ВК в посмертных тканях мозга из моделей aD животных и/или человеческой ткани АД простым и недорогим способом, как надежная альтернатива специфическим антителам АЗ.

протокол

Все методы, описанные здесь, были одобрены Комитетом по уходу за животными и использованию (ACUC) Государственного университета Сагино-Вэлли. Человеческая ткань была получена из установленного банка мозга в Banner Sun Health Institute в Аризоне15,16.

1. Перфузия животных

  1. Подготовьте фиксаторные и перфузийные буферы.
    1. Подготовка 0,1 M фосфатного буфера натрия, добавив 80 г хлорида натрия (NaCl), 2 г хлористого калия (KCl), 21,7 г фосфата водорода динатрия (Na2HPO47H2O), 2,59 г фосфата калия диводорода (KH2PO4 ), и двойной дистиллированной воды, чтобы сделать в общей сложности 1 л.
    2. Подготовка 4% параформальдегида (PFA).
      1. Добавьте 40 г параформальдегида в 1 л ПБС (0,1 М, рН 7,4).
      2. Нагрейте раствор PFA до 60-65 градусов по Цельсию и смешайте с помощью магнитного мешалки.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Температура не должна превышать 65 градусов по Цельсию.
      3. Добавьте несколько капель NaOH (1 N) с капельницаю, чтобы полностью растворить PFA.
      4. Фильтр унижай раствор PFA со средним и тонкой фильтровальной бумагой и храните при 4 градусах Цельсия.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Решение хорошее в течение месяца.
  2. Выполните анестезию животных и перфузию.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Двенадцатимесячный B6SJL-Tg APP SwFlLon, PSEN1-M146L-L286V, 1136799Vas/J (5'FAD) возрастные контрольные мыши (n no 6 в группе) были приобретены у поставщиков и выведены в доме животных Сагино-Вэлли государственного университета. Генотипинг был подтвержден полимеразной цепной реакцией (ПЦР), как описано ранее7. Человеческая ткань мозга AD включает в себя посмертную ткань мозга AD и возрастную контрольную ткань.
    1. Анестезия животное с соответствующим анестетический агент, такие как пентобарбитал натрия (390 мг/кг массы тела), или кетамин / ксилазин смесь (до 80 мг/кг тела вес кетамина и 10 мг/кг веса тела xylazine) путем интраперитонеальной инъекции (27 G иглы и 1 мЛ шприц). Проверьте уровень анестезии, щипая ногой. Если животное не реагирует, то оно готово к перфузионной операции.
    2. Поместите обезопадеченное животное в положение на спине на подносе хирургии перфузии и с помощью небольших ножниц радужной оболочки сделать разрез на задней части левого желудочка.
    3. Вставьте 22 G иглы перфузии в левый желудочек и сделать небольшой разрез в правом ячеек, чтобы удалить перфузионную жидкость из организма. Используйте гравитационную систему перфузии, чтобы позволить ледяной перфузийной жидкости (0,1 М ПБС, рН 7,4) течь в течение 5-6 мин (скорость потока 20-25 мл/мин).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Четкая печень является показателем оптимальной перфузии.
    4. Переключите буферный клапан на ледяной 4% параформальдегидный раствор для фиксации и дайте ему течь в течение 8–10 мин.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Тремор следуют затвердевшей или жесткой конечностей являются показателями хорошей фиксации.
    5. Удалить мозг из черепа с помощью ножниц. Используя шпатель, собирать мозг и поместить его в флакон 4% PFA (по крайней мере 10x объем объема мозга) и хранить при 4 градусах Цельсия до дальнейшего использования.

2. Обработка тканей

  1. Вырезать криостат разделы.
    1. Передача мозга в градуированные растворы сахарозы (10%, 20% и 30%) и хранить при 4 градусах по 24 ч каждый, пока не использовать.
    2. Используя криостат при -22 градусах Цельсия, вырежьте 40 мкм толщиной секций. Соберите 10-20 секций на скважину в 6 скважинной пластине, наполненной PBS и азидом натрия (0,02%).
  2. Парафин встраивает секции для мыши и ткани человеческого мозга.
    1. Для парафиновых секций обезвоживается пронизанаи и 24 ч постфиксированной мозговой ткани с градуированными спиртами (50%, 70%, 90%) за 2 ч каждый, а затем 100% алкоголя 2x на 1 ч каждый), а затем с ксилена 2x на 1 ч каждый) при комнатной температуре.
    2. Проникайте в ткань ксиленовым парафином (1:1) 2x на 1 ч при 56 градусах Цельсия в стеклянной конической колбе, покрытой алюминиевой фольгой.
    3. Погрузите ткань в расплавленный парафин (56 градусов по Цельсию) в течение 4-6 ч.
    4. Вырезать 5 мкм толщиной разделов с помощью роторного микротома при комнатной температуре и поместить их в ванну воды ткани при температуре 45 градусов по Цельсию.
  3. Гистохимически наметьте таблички АЗ в секциях криостата с куром.
    1. Промыть секции со ступени 2.1.2 с PBS (pH 7.4) 3x для 5 мин каждый.
    2. Погрузите секции в 70% этанола в течение 2 мин при комнатной температуре.
    3. Растворите запас Кур (1 мМ) в метаноле и разбавьте 70% этанола, чтобы получить окончательную рабочую концентрацию 10 мкм.
    4. Погрузите секции рабочим решением Cur в течение 1-5 мин при комнатной температуре на шейкере при 150 об/мин.
    5. Откажитесь от решения Cur и промойте 70% этанола 3x на 2 мин каждый.
    6. Положите разделы на поли-L-лизина покрытием стеклянные слайды и монтировать с крышкой с помощью органических монтажных носителей, таких как дистирол пластификатор ксилена (DPX).
    7. Просматривайте под флуоресцентным микроскопом с помощью фильтров для возбуждения/выбросов 480/550 нм.
  4. Гистохимически наметьте бляшки АЗ в встроенной в парафин мыши и секции человеческого мозга с помощью Cur.
    1. Депарафинизировать участки тканей со ступени 2.2.4 с ксиленом 2x на 5 мин каждый при комнатной температуре.
    2. Регидратировать с градуированными растворами алкоголя (100%, 80%, 70%, 50% на 1 мин каждый) и с дистиллированной водой 2x на 5 мин каждый при комнатной температуре.
    3. Пятно разделов с Cur (10 мкм) в течение 10 минут при комнатной температуре в темноте, встряхивая при 150 об/мин. Вымойте 70%, 90% и 100% спирт на 2 мин каждый.
    4. Очистить с ксиленом 2x в течение 5 минут каждый и крышка скольжения с DPX.
    5. Визуализируйте под флуоресцентным микроскопом, как упоминалось в шаге 2.3.7.
  5. Colocalize Cur с антителами АЗ в бляшках и олигомерах АЗ.
    1. Вымойте криостат разделы от шага 2.1.2 с PBS 3x в 12 хорошо пластины.
    2. Блок разделы с 10% нормальной сыворотки козы (NGS) растворяется в PBS с 0,5% Triton-X-100 при комнатной температуре в течение 1 ч.
    3. Откажитесь от блокирующего решения. Инкубировать секции с антителами АЗ-специфических (6E10 или A11, разбавленные 1:200) растворяются в свежем блокирующем растворе, содержащем 10% NGS и 0,5% Triton-X100 на ночь при 4 градусах Цельсия в шейкере при 150 об/мин.
    4. Отбросьте раствор антител и промойте секции PBS 3x по 10 минут каждый.
    5. Инкубировать вторичным тегом антител с красным флюорофором (например, Alexa 594) на 1 ч при комнатной температуре в темноте.
    6. Вымойте pbS 3x по 10 мин каждый.
    7. Вымойте 70% спирта 1x.
    8. Инкубировать секции с Кур (10 мкм) в течение 5 мин при комнатной температуре.
    9. Вымойте 70% спирта 3x на 1 мин каждый.
    10. Обезвоживать 90% и 100% алкоголем по 1 мин каждый, очистить ксиленом 2x по 5 мин каждый, и смонтировать на слайдах с помощью DPX.
    11. Визуализируйте с помощью флуоресцентного микроскопа с соответствующими фильтрами возбуждения/выбросов для красных и зеленых сигналов.
    12. Для внутриклеточной колокализации АЗ, пятно разделов с использованием АЗ-антибод (6E10), отдых с Cur при комнатной температуре в темноте с тряской при 150 об/мин, и противораковые с либо Hoechst-33342 (1 мг/мл) и / или DAPI (1ug/ml) в течение 10 мин при комнатной температуре в темно ежей с тряской при 150 об/мин. Вымойте с PBS 3x.
    13. Возьмите изображения с красными, зелеными и синими фильтрами с целью 100x (общее увеличение 1000x).
  6. Наклейка АЗ таблички с Thio-S, CR, и FJC.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подробные протоколы для маркировки Thio-S и CR ранее были зарегистрированы7.
    1. Для окрашивания FJC промыть свободно плавающие секции, полученные от шага 2.1.2 с PBS 3x на 5 мин каждый.
    2. Поместите секции в 12 хорошо пластины и пятно с FJC (0.001%) в течение 10 минут в темноте при комнатной температуре.
    3. Откажитесь от раствора FJC и промойте PBS 3x по 5 мин каждый.
    4. Инкубировать хлоридом аммония (NH4Cl, 50 мМ растворяется в PBS) в течение 10 минут при комнатной температуре.
    5. Откажитесь от решения NH4Cl и промойте PBS 3x в течение 5 минут каждый.
    6. Следуя шагам в разделе 2.4, обезвоживается с градуированными растворами алкоголя, ясно, монтировать, и вид под флуоресценционным микроскопом с использованием 450/520 нм возбуждания / выбросов фильтров.

Результаты

Куркумин этикетки АЗ таблички в течение минуты. Когда мы запятнали ткань 5xFAD с Cur, мы обнаружили, что Cur этикетки АЗ бляшки в течение 1 мин. Несмотря на то, что увеличение времени инкубации с Cur несколько увеличило интенсивность флуоресценции бляшек АЗ, количество наблюда?...

Обсуждение

Наша гипотеза состояла в том, что Cur может быть использован как самый быстрый, простой и наименее дорогой способ маркировки и изображения бляшек АЗ в посмертной ткани мозга АД по сравнению с другими классическими амилоидными связующими красителей, а также антителами АЗ. Целью этого исс?...

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Поддержка этого исследования была получена из Института полевых неврологий вознесения Святой Марии.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)IHC world, Woodstock, MD
Aanimal model of Alzheimer's diseaseJackson's laboratory, Bar Harbor, ME
Absolute alcoholVWR,Radnor, PA
Alexa 594Santacruz Biotech, Dallas, TX
Antibody 6E10Biolegend, San Diego, CA
Antibody A11Millipore, Burlington, MA
Compound light microscopeOlympus, Shinjuku, JapanOlympus BX51
Congo redSigma, St. Louis, MO
CryostatGMI, Ramsey, MNLeicaCM1800
CurcuminSigma, St. Louis, MO
Disodium hydrogen phosphateSigma, St. Louis, MO
Dystyrene plasticizer xyleneBDH, Dawsonville, GA
Filter papersFisher scientific, Pittsburgh, PA
Hoechst-33342Sigma, St. Louis, MO
Inverted fluorescent microscopeLeica, Buffalo Grove, ILLeica DMI 6000B
Inverted fluorescent microscopeOlympus, Shinjuku, JapanOlympus 1x70
Normal goat serumSigma, St. Louis, MO
ParaffinSigma, St. Louis, MO
ParaformaldehydeSigma, St. Louis, MO
Ploy-lysine coated charged glass slideGlobe Scientific Inc, Mahwah, NJ
Potassium chlorideSigma, St. Louis, MO
Potassium dihydrogen phosphateSigma, St. Louis, MO
Sodium azideSigma, St. Louis, MO
Sodium chlorideSigma, St. Louis, MO
Sodium hydroxideEMD Millipore, Burlington, MA
Sodium pentobarbitalVortex Pharmaceuticals limited, Dearborn, MI
Thioflavin-SSigma, St. Louis, MO
Triton-X-100Sigma, St. Louis, MO
XyleneVWR,Radnor, PA

Ссылки

  1. Cummings, J. L. Alzheimer's disease. New England Journal of Medicine. 351 (1), 56-67 (2004).
  2. Jack, C. R., Holtzman, D. M. Biomarker modeling of Alzheimer's disease. Neuron. 80 (6), 1347-1358 (2013).
  3. Tarawneh, R., Holtzman, D. M. The clinical problem of symptomatic Alzheimer disease and mild cognitive impairment. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (5), (2012).
  4. Selkoe, D. J. Cell biology of protein misfolding: the examples of Alzheimer's and Parkinson's diseases. Nature Cell Biology. 6 (11), 1054-1061 (2004).
  5. Hardy, J., Allsop, D. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).
  6. Chen, M., et al. Use of curcumin in diagnosis, prevention, and treatment of Alzheimer's disease. Neural Regeneration Research. 13 (4), 742-752 (2018).
  7. Maiti, P., et al. A comparative study of dietary curcumin, nanocurcumin, and other classical amyloid-binding dyes for labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue of 5x-familial Alzheimer's disease mice. Histochemistry and Cell Biology. 146 (5), 609-625 (2016).
  8. Maiti, P., Dunbar, G. L. Use of Curcumin, a Natural Polyphenol for Targeting Molecular Pathways in Treating Age-Related Neurodegenerative Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), (2017).
  9. Maiti, P., Dunbar, G. L. Comparative Neuroprotective Effects of Dietary Curcumin and Solid Lipid Curcumin Particles in Cultured Mouse Neuroblastoma Cells after Exposure to Abeta42. International Journal of Alzheimer's Disease. , (2017).
  10. den Haan, J., Morrema, T. H. J., Rozemuller, A. J., Bouwman, F. H., Hoozemans, J. J. M. Different curcumin forms selectively bind fibrillar amyloid beta in post mortem Alzheimer's disease brains: Implications for in-vivo diagnostics. Acta Neuropathologica Communications. 6 (1), 75 (2018).
  11. Koronyo, Y., et al. Retinal amyloid pathology and proof-of-concept imaging trial in Alzheimer's disease. JCI Insight. 2 (16), (2017).
  12. Koronyo, Y., Salumbides, B. C., Black, K. L., Koronyo-Hamaoui, M. Alzheimer's disease in the retina: imaging retinal abeta plaques for early diagnosis and therapy assessment. Neurodegenerative Diseases. 10 (1-4), 285-293 (2012).
  13. Koronyo-Hamaoui, M., et al. Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model. NeuroImage. 54 (Suppl 1), S204-S217 (2011).
  14. Ran, C., et al. Design, synthesis, and testing of difluoroboron-derivatized curcumins as near-infrared probes for in vivo detection of amyloid-beta deposits. Journal of the American Chemical Society. 131 (42), 15257-15261 (2009).
  15. Beach, T. G. The Sun Health Research Institute Brain Donation Program: Description and Experience, 1987-2007. Cell Tissue Bank. 9 (3), 229-245 (2008).
  16. Green, S. J., Killiany, R. J. Subregions of the inferior parietal lobule are affected in the progression to AD. Neurobiology of Aging. 31 (8), 1304-1311 (2010).
  17. Ono, K., Hasegawa, K., Naiki, H., Yamada, M. Curcumin has potent anti-amyloidogenic effects for Alzheimer's beta-amyloid fibrils in vitro. Journal of Neuroscience Research. 75 (6), 742-750 (2004).
  18. Garcia-Alloza, M., Borrelli, L. A., Rozkalne, A., Hyman, B. T., Bacskai, B. J. Curcumin labels amyloid pathology in vivo, disrupts existing plaques, and partially restores distorted neurites in an Alzheimer mouse model. Journal of Neurochemistry. 102 (4), 1095-1104 (2007).
  19. Mutsuga, M., et al. Binding of curcumin to senile plaques and cerebral amyloid angiopathy in the aged brain of various animals and to neurofibrillary tangles in Alzheimer's brain. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (1), 51-57 (2012).
  20. Tei, M., Uchida, K., Mutsuga, M., Chambers, J. K., Nakayama, H. The binding of curcumin to various types of canine amyloid proteins. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (4), 481-483 (2012).
  21. Liu, L., Komatsu, H., Murray, I. V., Axelsen, P. H. Promotion of amyloid beta protein misfolding and fibrillogenesis by a lipid oxidation product. Journal of Molecular Biology. 377 (4), 1236-1250 (2008).
  22. Wu, C., Scott, J., Shea, J. E. Binding of Congo red to amyloid protofibrils of the Alzheimer Abeta(9-40) peptide probed by molecular dynamics simulations. Biophysical Journal. 103 (3), 550-557 (2012).
  23. Wu, C., Wang, Z., Lei, H., Zhang, W., Duan, Y. Dual binding modes of Congo red to amyloid protofibril surface observed in molecular dynamics simulations. Journal of the American Chemical Society. 129 (5), 1225-1232 (2007).
  24. Gutierrez, I. L., et al. Alternative Method to Detect Neuronal Degeneration and Amyloid beta Accumulation in Free-Floating Brain Sections With Fluoro-Jade. ASN Neuro Methods. 10, 1-7 (2018).
  25. Yang, F., et al. Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in vivo. Journal of Biological Chemistry. 280 (7), 5892-5901 (2005).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

153

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены