Обогащенная фибрином и чувствительная к tPA модель фототромботического инсульта

Резюме

Традиционные модели фототромботического инсульта (ПТС) в основном индуцируют плотные агрегаты тромбоцитов с высокой резистентностью к тканевой терапии активатором плазминогена (tPA)-литическим лечением. Здесь модифицированная мышиная модель ПТС вводится путем совместного введения тромбина и фоточувствительного красителя для фотоактивации. Модель ПТС, усиленная тромбином, производит смешанные тромбоцитарно-фибриновые сгустки и обладает высокой чувствительностью к tPA-тромболизису.

Аннотация

Идеальная модель тромбоэмболического инсульта требует определенных свойств, в том числе относительно простых хирургических процедур с низкой смертностью, постоянного размера и локализации инфаркта, осаждения тромбоцитов и сгустков крови с примесью тромбоцитов и фибрина, аналогичных таковым у пациентов, и адекватной чувствительности к фибринолитическому лечению. Модель фототромботического инсульта на основе красителя бенгальской розы (RB) отвечает первым двум требованиям, но обладает высокой рефрактерностью к tPA-опосредованному литической терапии, предположительно из-за богатого тромбоцитами, но бедного фибрином состава сгустков. Мы полагаем, что комбинация RB-красителя (50 мг/кг) и субтромботической дозы тромбина (80 ЕД/кг) для фотоактивации, направленной на проксимальную ветвь средней мозговой артерии (МЦА), может приводить к образованию обогащенных фибрином и tPA-чувствительных тромбов. Действительно, модель комбинированного фототромбоза с тромбином и RB (T+RB) вызывала смешанные тромбоцитарно-фибриновые тромбы, как показали иммуноокрашивание и иммуноблоты, и поддерживала постоянные размеры и локализацию инфаркта плюс низкую смертность. Кроме того, внутривенное введение tPA (Alteplase, 10 мг/кг) в течение 2 ч после фотоактивации значительно уменьшало размер инфаркта при фототромбозе T+RB. Таким образом, модель фототромботического инсульта, усиленная тромбином, может быть полезной экспериментальной моделью для тестирования новых методов тромболитической терапии.

Введение

Эндоваскулярная тромбэктомия и tPA-опосредованный тромболизис являются единственными двумя одобренными Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) методами лечения острого ишемического инсульта, которым ежегодно^{в Соединенных Штатах} страдают ~700 000 пациентов. Поскольку применение тромбэктомии ограничено окклюзией крупных сосудов (LVO), в то время как tPA-тромболизис может облегчить окклюзию мелких сосудов, оба метода лечения острого ишемического инсульта² являются ценными. Кроме того, комбинация обоих методов лечения (например, начало tPA-тромболизиса в течение 4,5 часов по....

протокол

Этот протокол одобрен Комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) при Университете Вирджинии и соответствует Руководству Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных. На рисунке 1А показана последовательность хирургических процедур этого протокола.

1. Подготовка к операции

1. Положите грелку с температурой 37 °C на адаптер для мелких животных не менее чем за 15 минут до операции. Подготовьте ролик с зажимом для носа для адаптера, который позволяет поворачивать голову животного. Приготовьте анестетики Кетамин (60 мг/кг)/Ксилазин (10 мг/кг).

Результаты

Во-первых, мы сравнили содержание фибрина в RB и T+RB, индуцированных фототромбозом. Мышей приносили в жертву транскардиальной перфузией фиксаторов через 2 ч после фотоактивации, а мозг удаляли для иммунофлуоресцентного окрашивания ветви MCA в продольной и поперечной плоскостях. При фотот?.......

Обсуждение

Традиционный RB-фототромботический инсульт, представленный в 1985 году, является привлекательной моделью фокальной ишемии головного мозга для простых хирургических процедур, низкой смертности и высокой воспроизводимости инфаркта головного мозга. ⁵ В этой модели фотодинами.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma	T8877	infarct
4-0 Nylon monofilament suture	LOOK	766B	surgical supplies
5-0 silk suture	Harvard Apparatus	624143	surgical supplies
543nm laser beam	Melles Griot	25-LGP-193-249	photothrombosis
adult male mice	Charles River	C57BL/6	10~14 weeks old (22~30 g)
Anesthesia bar for mouse adaptor	machine shop, UVA		surgical setup
Avertin (2, 2, 2-Tribromoethanol)	Sigma	T48402	euthanasia
Dental drill	Dentamerica	Rotex 782	surgical setup
Digital microscope	Dino-Lite	AM2111	brain imaging
Dissecting microscope	Olympus	SZ40	surgical setup
Fine curved forceps (serrated)	FST	11370-31	surgical instrument
Fine curved forceps (smooth)	FST	11373-12	surgical instrument
goat anti-rabbit Alexa Fluro 488	Invitrogen	A11008	Immunohistochemistry
Halsted-Mosquito hemostats	FST	13008-12	surgical instrument
Heat pump with warming pad	Gaymar	TP700	surgical setup
infusion pump	KD Scientific	200	thrombolytic treatment
Insulin syringe with 31G needle	BD	328291	photothrombosis
Ketamine	CCM, UVA		anesthesia
Laser protective google 532nm	Thorlabs	LG3	photothrombosis
Meloxicam SR	CCM, UVA		NSAID analgesia
micro needle holders	FST	12060-01	surgical instrument
micro scissors	FST	15000-03	surgical instrument
MoorFLPI-2 blood flow imager	Moor	780-nm laser source	Laser Speckle Contrast Imaging
Mouse adaptor	RWD	68014	surgical setup
Puralube Vet ointment	Fisher	NC0138063	eye dryness prevention
Retractor tips	Kent Scientific	Surgi-5014-2	surgical setup
Rose Bengal	Sigma	198250	photothrombosis
Thrombin	Sigma	T7513	photothrombosis
Tissue glue	Abbott Laboratories	NC9855218	surgical supplies
tPA	Genetech	Cathflo activase 2mg	thrombolytic treatment
Vibratome	Stoelting	51425	TTC infacrt
Xylazine	CCM, UVA		anesthesia