In vitro Оценка защиты миокарда после гипотермии-предпосылок в модели миоцитов сердца человека

Резюме

Различные последствия различных степеней гипотермии на защиту миокарда не были тщательно оценены. Целью настоящего исследования была количественная оценка уровней клеточной смертности после различных методов лечения гипотермии в модели на основе кардиомиоцитов человека, заложив основу для будущих углубленных молекулярных исследований.

Аннотация

Ишемия / реперфузия полученных дисфункции миокарда является распространенным клиническим сценарием у пациентов после сердечной хирургии. В частности, чувствительность кардиомиоцитов к ишемической травме выше, чем у других популяций клеток. В настоящее время переохлаждение обеспечивает значительную защиту от ожидаемого ишемического оскорбления. Однако исследования сложных молекулярных изменений, вызванных переохлаждением, остаются ограниченными. Таким образом, важно определить состояние культуры, похожее на условия in vivo, которые могут вызвать ущерб, аналогичный тому, который наблюдается в клиническом состоянии в воспроизводимой манере. Для имитации ишемии, как условия in vitro, клетки в этих моделях были обработаны кислорода / глюкозы лишения (OGD). Кроме того, мы применили стандартный протокол температуры времени, используемый во время кардиохирургии. Кроме того, мы предлагаем подход к использованию простого, но всеобъемлющего метода количественного анализа травмы миокарда. Уровень апоптоза и экспрессии белков, связанных с апоптозом, оценивался по цитометрии потока и использованию комплекта ELISA. В этой модели мы протестировали гипотезу о влиянии различных температурных условий на кардиомиоцит апоптоз in vitro. Надежность этой модели зависит от строгого контроля температуры, контролируемых экспериментальных процедур и стабильных экспериментальных результатов. Кроме того, эта модель может быть использована для изучения молекулярного механизма гипотермических кардиопротекторов, которые могут иметь важные последствия для развития дополнительных методов лечения для использования с переохлаждением.

Введение

Ишемия / реперфузия полученных дисфункции миокарда является распространенным клиническим сценарием у пациентов после^{сердечной хирургии 1,2}. Во время непульсатной перфузии низкого потока и периодов полного ареста кровообращения, повреждения, связанные со всеми типами клеток сердца все еще происходит. В частности, чувствительность кардиомиоцитов к ишемической травме выше, чем у других популяций клеток. В настоящее время терапевтическая гипотермия (TH) обеспечивает существенную защиту от ожидаемого ишемического оскорбления у пациентов, перенесших^{операцию на сердце 3,}

протокол

Информация о коммерческих реагентах и инструментах указана в таблице материалов.

Линия клеток ак16 человека кардиомиоцитов была получена от слияния первичных клеток из ткани сердца взрослого желудочка с ПОМОЩЬю СВ40-преобразованных^{фибробластов человека 17}, которые были приобретены у BLUEFBIO (Шанхай, Китай). Клеточная линия развивает многие биохимические и морфологические особенности, характерные для кардиомиоцитов. Кроме того, линия клеток широко используется для оценки повреждения миокарда и функции миокарда в^{пробирке 18,19}.

Результаты

Влияние воздействия ОГД на жизнеспособность ГСМ было определено анализом CCK-8. По сравнению с тем, что наблюдалось в контрольной группе, жизнеспособность клеток была значительно снижена в зависимости от времени образом(рисунок 2A). Апоптоз ставки HCMs в разное время после re.......

Обсуждение

Сложности нетронутых животных, в том числе взаимодействия между различными типами клеток, часто препятствуют детальному изучению конкретных компонентов травмы I/R. Поэтому необходимо создать модель клеток in vitro, которая может точно отражать молекулярные изменения после ишемии in vivo. Ис?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Annexin V-FITC cell apoptosis detection kit	Bio-Technology,China	C1062M
Cardiac myocyte growth supplement	Sciencell,USA	6252
Caspase 3 activity assay kit	Bio-Technology,China	C1115
Caspase 8 activity assay kit	Bio-Technology,China	C1151
DMEM, no glucose	Gibco,USA	11966025
Dulbecco's modified eagle medium	Gibco,USA	11960044
Fetal bovine serum	Gibco,USA	16140071
Flow cytometry	CytoFLEX,USA	B49007AF
Human myocardial cells	BLUEFBIO,China	BFN60808678
Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1	Bio-Technology,China	C2006
Penicillin/Streptomycin solution	Gibco,USA	10378016
Reactive oxygen species assay kit	Bio-Technology,China	S0033S
Three-gas incubator	Memmert,Germany	ICO50
Trypsin-EDTA (0.25%)	Gibco,USA	25200056